国家自然科学基金(30572366)
- 作品数：10 被引量：57H指数：5
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- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学第一附属医院更多>>
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- 均匀试验优化金银花总黄酮提取工艺被引量：7
- 2008年
- 目的:优化金银花总黄酮提取工艺。方法:采用均匀分布设计法对金银花总黄酮提取过程中提取时间、温度、所使用的溶剂倍数及浸出次数进行优选,以总黄酮量为评价指标进行U11(116)试验,确定最优工艺。结果:总黄酮提取最佳工艺为:提取时间1h、提取温度85℃、溶剂倍数10倍、溶剂浓度5%乙醇溶液、浸出次数1次。结论:本研究建立的提取方法简便、可靠,可为生产工艺提供理论依据。
- 唐敏刘耀王渝夏培元
- 关键词：金银花均匀设计
- HPLC法测定人肝细胞L02内外液中金丝桃苷的含量
- 2011年
- 目的:建立测定人肝细胞L02内、外液中金丝桃苷(Hyp)含量的方法。方法:以80μg·mL-1的Hyp与L02共孵育0、3、6、12、24h后,采用高效液相色谱(HPLC)法测定细胞内、外液中金丝桃苷的含量。色谱柱为KROMASIL C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸(45∶55),柱温为30℃,流速为1.0mL·min-1,紫外检测波长为360nm。结果:细胞外液中Hyp的标准曲线为Y=35.412X-8.586(r=0.9999),表明Hyp检测浓度在2～200μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系;细胞内液中Hyp的标准曲线为Y=35.759X-7.422(r=0.9999),表明Hyp检测浓度在0.1～10μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。细胞外、内液中Hyp的平均回收率分别为(96.00±2.43)%、(97.18±4.62)%,平均日内RSD分别为1.98%、4.36%,平均日间RSD分别为1.75%、2.86%。样品溶液处理后室温放置22h,未处理样品溶液于-20℃放置6d,平均RSD均<5%。结论:本方法简单、准确、线性范围宽、灵敏度高、精密度和回收率良好,可为进一步研究Hyp的抗氧化作用与机制奠定方法学基础。
- 幸海燕夏培元戴青陈剑鸿孙凤军
- 关键词：高效液相色谱法金丝桃苷
- 金黄色葡萄球菌sigB基因同源重组质粒构建的研究被引量：1
- 2006年
- 目的:构建金黄色葡萄球菌sigB基因的同源重组质粒,为进一步研究其生物膜的形成机制奠定基础。方法:将“sigB上游序列-卡拉霉素抗性基因-sigB下游序列”目的片断以金黄色葡萄球菌X387基因组DNA和pEGFP-N2质粒分别进行PCR扩增,其中3个片段互连的末端以其本身的序列互补,两端分别携带EcoRⅠ、XhoⅠ酶切位点,并采用融合PCR法进行片段连接;按pBluescriptⅡSK(+)质粒说明书构建含连接片断的质粒,分别将重组pBluescriptⅡSK(+)质粒和载体质粒pGEM-7zf(+)用SacⅠ和XhoⅠ双酶切后,用T4连接酶构建pGEM-7zf(+)-sigB基因同源重组质粒。结果:同源重组质粒经PCR扩增出目的片断,且琼脂糖凝胶电泳和测序证实目的片断正确。结论:金黄色葡萄球菌sigB基因同源重组质粒构建成功。
- 孙凤军夏培元
- 关键词：金黄色葡萄球菌同源重组PCR
- 亚抑菌浓度红霉素对临床分离表皮葡萄球菌黏附能力的影响
- 2009年
- 目的:研究红霉素在亚抑菌浓度下对临床分离表皮葡萄球菌(SE)黏附能力的影响。方法:在药敏试验的基础上确定红霉素的亚抑菌药物浓度,以此浓度下的红霉素作用于代表菌株Se.015,采用微孔法测定光密度值以评价药物对菌株黏附能力的影响,电镜法观察样品中Se.015的黏附情况,同时设立空白溶剂为对照组。结果:在红霉素的亚抑菌浓度(4mg.L-1)下,与对照组比较,红霉素组光密度值升高(P<0.05),电镜下可见Se.015黏附量增加。结论:红霉素在亚抑菌浓度下可增强部分临床分离表皮葡萄球菌的黏附能力,提示其应用可能在特定条件下增加细菌生物膜感染的风险。
- 枉前孙凤军熊利蓉夏培元
- 关键词：红霉素表皮葡萄球菌
- luxS基因敲除临床分离大肠杆菌株生物膜形成能力的变化被引量：3
- 2011年
- 目的探讨LuxS基因对临床分离大肠杆菌生物膜形成能力的影响。方法以临床分离大肠杆菌S17为研究对象,PCR分别扩增S17 LuxS基因的上下游序列和质粒pEGFP-N1的卡那抗性基因,分别连入T载体pAT2,再通过酶切连接的方法分别将LuxS基因的上、下游序列连接入pAT2-kana质粒,构建同源重组质粒pAT2-△luxS,同源重组质粒转化大肠杆菌DH5α扩增后,提取质粒后双酶切获得同源重组片段,将同源重组片断电转入感受态S17,通过同源重组构建LuxS基因缺失的S17,96孔板结晶紫染色法分析LuxS基因缺失株生物膜形成能力的变化。结果 LuxS基因缺失株基因组PCR扩增出1678的片断,测序鉴定正确,成功构建临床分离大肠杆菌S17 LuxS基因缺失株,S17与S17LuxS基因缺失株形成生物膜的微孔板法半定量OD值的结果分别为(1.51±0.09)和(0.43±0.13)。结论 LuxS基因对细菌生物膜的形成具有重要调控作用。
- 孙凤军枉前史惠卿夏培元
- 关键词：大肠杆菌LUXS基因生物膜基因敲除
- 临床分离表皮葡萄球菌的大环内酯耐药性与生物膜形成能力、icaA基因型的关系被引量：5
- 2009年
- 目的研究68株临床分离表皮葡萄球菌大环内酯耐药性与生物膜形成能力、icaA基因型之间的关系,初步预测采用大环内酯抗菌药物预防表皮葡萄球菌生物膜感染的有效性。方法以琼脂平板稀释法测定菌株的最小抑菌浓度,采用微孔测定法考察临床分离表皮葡萄球菌生物膜形成能力,通过PCR法测定icaA基因型,探讨三者之间的关系。结果临床分离表皮葡萄球菌对大环内酯耐药程度较高(88.2%),且耐药菌生物膜形成能力较敏感菌显著增强(P<0.05),耐药菌与敏感菌的icaA阳性比率没有统计学差异(P>0.05)。结论红霉素、阿奇霉素、克拉霉素等常用的大环内酯类药物可能难以有效地预防表皮葡萄球菌生物膜感染。
- 枉前孙凤军夏培元
- 关键词：表皮葡萄球菌细菌生物膜大环内酯
- 临床分离金黄色葡萄球菌生物膜相关基因的PCR分析被引量：8
- 2009年
- 目的确定临床分离的金黄色葡萄球菌生物膜形成能力和生物膜相关基因之间的关系,为生物膜形成的机制研究提供依据。方法96孔板番红染色法检测生物膜的形成,icaAD、icaBC、sar、agr和sigB的PCR扩增,并对产物进行测序和同源性比较。结果27株金黄色葡萄球菌中共有17株形成了肉眼可见的生物膜,其中以X387和X409两株最明显;有22株扩增出icaAD和icaBC,全部菌株扩增出sar、agr和sigB。结论ica是形成金葡菌生物膜的关键基因,但ica在形成生物膜过程中需要其他基因的协同作用。
- 孙凤军枉前夏培元
- 关键词：金黄色葡萄球菌生物膜
- 临床分离金黄色葡萄球菌药物敏感性和形成生物膜的相关性分析被引量：8
- 2009年
- 目的确定临床分离的金葡菌药物敏感性和生物膜形成能力之间的关系,为生物膜耐药机制的研究提供依据。方法采用倍比稀释法检测细菌的MIC,96孔板番红染色法检测生物膜的形成,fisher精确概率法对细菌耐药性和生物膜形成能力进行相关性分析。结果本组27株金葡菌中,除对万古霉素和米诺环素的敏感率为100%和81.5%外,对左氧氟沙星、阿米卡星、红霉素、苯唑西林、亚胺培南、克林霉素和环丙沙星均严重耐药;27株金葡菌中有17株形成了肉眼可见的生物膜,其中以X387和X409 2株最明显。结论金葡菌的耐药性与其形成生物膜的能力无相关性。
- 孙凤军枉前夏培元
- 关键词：金黄色葡萄球菌生物膜药物敏感性
- 金丝桃苷对CCl_4诱导的大鼠肝损伤的保护作用研究被引量：12
- 2011年
- 目的:研究金丝桃苷(hyperfine,HP)对CCl4诱导的大鼠肝损伤的保护作用。方法:连续3d对大鼠灌胃给予不同剂量的HP,并于末次给药6h后灌胃给予CCl4复制急性肝损伤模型,24h测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织匀浆中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性;同时进行肝组织病理学观察。结果:不同剂量的HP可显著降低模型大鼠血清中ALT、AST,肝组织匀浆中MDA含量;显著升高SOD、GSH活性;病理切片表明,HP预处理组肝组织损伤均有不同程度减轻,其中以30mg·kg-1剂量效果最佳。结论:HP对CCl4诱导的大鼠急性肝损伤具有较好的保护作用,其作用机制可能与HP抑制抗氧化酶活性和抗自由基活性有关。
- 唐敏刘耀夏培元
- 关键词：金丝桃苷四氯化碳急性肝损伤保肝作用
- 金银花总黄酮粗提物体外抑菌作用研究被引量：14
- 2008年
- 目的:考察金银花总黄酮粗提物对临床主要致病菌的体外抑菌作用。方法:以DM130大孔吸附树脂为固定相,经不同浓度的乙醇梯度洗脱金银花水煎液得到各组分(水洗含糖较多组分为A、含糖较少组分为B,20%洗脱组分为C,40%洗脱组分为D,60%洗脱组分为E),测定各组分对临床主要致病菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:组分B对金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用,MIC值为1mg·mL-1。结论:B组分对临床主要致病菌有较强的抑制作用。
- 唐敏刘耀王渝李夏培元
- 关键词：金银花总黄酮MIC
