国家自然科学基金(30873348)
- 作品数：9 被引量：13H指数：3
- 相关作者：杨大国吴其恺邓欣刘成海冉云更多>>
- 相关机构：深圳市第三人民医院湖北中医药大学上海中医药大学更多>>
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- 甲胎蛋白表达缺失的人肝癌HepG2细胞株的构建被引量：2
- 2011年
- 目的:建立甲胎蛋白(AFP)表达缺失的HepG2细胞株。方法:选择AFP的RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,与线性化的pll 3.7连接,扩增纯化得到所需质粒。鉴定后将质粒用慢病毒包装、纯化得到病毒粗提液,与HepG2细胞共培养,转染后用RT-PCR和Western blot实验检测细胞AFP的表达情况。结果:RT-PCR和Western blot实验显示,干扰后HepG2细胞AFP基因和蛋白的表达显著减少。干扰效率达84%。所得细胞株传代后仍仅能检测到微量AFP表达。结论:成功构建稳定的AFP表达接近缺失的HepG2模型细胞株。
- 冉云邓欣杨大国吴其恺刘成海陶艳艳聂广
- 关键词：甲胎蛋白基因干扰肝癌细胞
- 正肝方对黄曲霉毒素B_1诱发的大鼠癌前病变肝组织胰岛素样生长因子-Ⅱ表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:观察正肝方对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发的大鼠癌前病变肝组织胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)表达的影响。方法:100只Wistar大鼠随机分为4组:模型对照组30只、正肝方小剂量预防组30只、正肝方大剂量预防组30只、正常大鼠对照组10只。除正常对照组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理各组大鼠造模。正肝方大、小剂量预防组在造模期间,将不同浓度正肝方水剂(0.6g/ml,0.3g/ml)按10ml/kg分别灌喂大鼠;模型对照组用无菌蒸馏水按10ml/kg灌喂大鼠。8周后处死大鼠,肝组织取材。分别采用免疫组化染色法和RT-PCR法,检测肝组织中IGF-Ⅱ蛋白和mRNA表达。结果:模型组肝组织IGF-Ⅱ染色阳性细胞百分率(LI)和表达强度(PU)最高,并且IGF-ⅡmRNA表达水平也最高(P<0.01)。正肝方能降低大鼠癌前病变肝组织IGF-Ⅱ蛋白和mRNA的异常高表达(P<0.01),且呈现出一定的量效关系。结论:正肝方能通过下调IGF-Ⅱ异常高表达,从而减弱IGF-Ⅱ通过自分泌生长刺激机制导致的AFB1启动的肝细胞异常增生。
- 邓欣杨大国吴其恺汪多平
- 关键词：肝癌前病变
- 正肝方影响大鼠癌前病变肝组织γ-谷氨酰转移酶和谷胱甘肽S-转移酶-π阳性灶的对比研究被引量：6
- 2009年
- [目的]探讨正肝方对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发的大鼠癌前病变肝组织γ-谷氨酰转移酶(GGT)、谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-P)阳性灶的影响。[方法]Wistar大鼠100只随机分为4组:模型组30只、正肝方小剂量预防(小剂量)组30只、正肝方大剂量预防(大剂量)组30只、正常大鼠对照(正常)组10只。除正常组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理各组大鼠造模。大、小剂量组在造模期间,将正肝方水剂(0.6 g/ml,0.3 g/ml)按10ml/kg分别灌胃;模型组用无菌蒸馏水10 ml/kg灌胃。8周后处死大鼠,肝组织取材。组织化学法做肝组织GGT染色、免疫组化法做肝组织GST-P染色,电脑图像分析系统测量GGT和GST-P阳性灶的数量、大小。[结果]大剂量组大鼠肝组织GGT阳性灶为(10.91±4.25)个/cm2,灶总面积为(2.94±1.52)mm2/cm2;GST-P阳性灶为(24.75±10.99)个/cm2,灶总面积为(4.80±2.75)mm2/cm2,均显著低于模型组(P<0.01)。[结论]正肝方能减少AFB1诱发的大鼠癌前病变肝组织GGT和GST-P阳性灶的数量和大小,对AFB1诱发的肝癌前病变具有一定的预防作用。
- 杨大国邓欣吴其恺汪多平
- 关键词：肝癌前病变正肝方化学预防
- 正肝方药物血清对甲胎蛋白刺激的AFPsiRNA HepG2细胞系凋亡的影响
- 2016年
- 目的:观察正肝方药物血清对甲胎蛋白(AFP)刺激的AFPsiRNA HepG2细胞凋亡的影响。方法:正肝方浸膏粉经灌胃给药制备正肝方大鼠血清。体外培养AFPsiRNA HepG2细胞,将细胞分为5%正常大鼠血清组、5%正肝方大鼠血清组、10%正常大鼠血清组、10%正肝方大鼠血清组、5%正常大鼠血清+AFP组、5%正肝方血清+AFP组、10%正常大鼠血清+AFP组、10%正肝方大鼠血清+AFP组共8组,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:无AFP刺激时,正肝方大鼠血清与正常大鼠血清对HepG2细胞凋亡相比较,差异无显著性意义(P>0.05);当有AFP刺激时,正肝方血清与正常大鼠血清对细胞凋亡相比较,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:正肝方大鼠血清能显著诱导AFPsiRNA HepG2细胞凋亡。其机制是通过影响AFP介导的肝癌细胞凋亡通路来实现的。
- 冉云杨大国陈文林邓欣刘成海
- 关键词：甲胎蛋白HEPG2细胞系
- 外源性甲胎蛋白对甲胎蛋白表达缺失HepG2细胞系增殖与凋亡的影响
- 2013年
- 目的:观察不同浓度外源性甲胎蛋白(AFP)对AFPsiRNA-HepG2细胞系(AFP表达缺失HepG2细胞系)的增殖与凋亡的影响。方法:体外培养AFPsiRNA-HepG2细胞,将细胞分为对照组,100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml AFP 6组,MTT法检测细胞增殖;Annexin V-APC/7-AAD染色、流式细胞术检测细胞凋亡百分比。结果:MTT结果提示,与阴性对照组比较,100μg/ml AFP组显著抑制细胞增殖(P<0.01),低于100μg/mlAFP组促进细胞增殖(P<0.05);流式细胞术结果提示,与阴性对照组比较,100μg/ml AFP组显著诱导细胞凋亡(P<0.01),低于100μg/ml AFP干预组对细胞凋亡无影响(P>0.05)。结论:低于100μg/ml AFP可促进细胞增殖,高于100μg/ml AFP可显著抑制细胞增殖,并诱导其发生凋亡。
- 冉云邓欣杨大国吴其恺陈文林陶艳艳
- 关键词：甲胎蛋白增殖凋亡
- 正肝方对大鼠癌前病变肝组织细胞周期蛋白D_1及依赖性激酶4的影响被引量：6
- 2011年
- [目的]观察正肝方对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发的大鼠癌前病变肝组织细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）的影响。[方法]Wistar大鼠100只随机分为4组：模型、正肝方小剂量、正肝方大剂量组各30只、正常组10只。除正常组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴（2-AAF）处理各组大鼠造模。正肝方大、小剂量组在造模期间,将正肝方水剂（0.6、0.3 g/ml）按10 ml/kg分别灌胃;模型组用无菌蒸馏水按10 ml/kg灌胃。8周后处死大鼠,肝组织取材。分别采用免疫组化法和RT-PCR法,检测大鼠肝组织中Cyclin D1、CDK4蛋白和mRNA表达。[结果]模型组Cyclin D1、CDK4染色阳性细胞百分率（LI）和表达强度（PU）最高,Cyclin D1、CDK4mRNA表达水平也最高（P〈0.01）。正肝方能降低大鼠癌前病变肝组织Cyclin D1、CDK4蛋白和mRNA的异常高表达（P〈0.01或〈0.05）,且呈现出一定的量效关系。[结论]正肝方能通过下调Cyclin D1、CDK4异常表达,改善细胞周期G1~S期调控点失控,从而减缓肝细胞异常增生。
- 杨大国邓欣吴其恺汪多平
- 关键词：肝癌前病变正肝方细胞周期蛋白D1
- 正肝方对黄曲霉毒素B_1诱发的大鼠癌前病变肝组织增殖细胞核抗原和甲胎蛋白的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:观察正肝方对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发的大鼠癌前病变肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)和甲胎蛋白(AFP)的影响。方法:100只Wistar大鼠随机分为4组,模型组、正肝方小剂量预防组、正肝方大剂量预防组各30只,正常组10只。除正常组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴(2-AAF)对3组大鼠进行造模。造模期间,将不同浓度正肝方水剂(0.6g/ml,0.3g/ml)分别灌喂正肝方预防组大鼠;用无菌蒸馏水灌喂模型组大鼠。8周后处死大鼠,肝组织取材。采用免疫组化染色法检测大鼠肝组织PCNA、AFP水平。结果:模型组大鼠肝组织PCNA、AFP染色标记指数(LI)、阳性单位(PU)值最高,正肝方大剂量组大鼠PCNA和AFP染色的PU值、LI值均较模型组显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论:大剂量正肝方能有效降低大鼠癌前病变肝组织PCNA和AFP的表达,减轻大鼠癌前病变肝组织的异常增生。
- 邓欣杨大国刘钦吴其恺汪多平
- 关键词：肝癌前病变增殖细胞核抗原甲胎蛋白
- 正肝方药物血清对甲胎蛋白刺激的AFPsiRNA-HepG2细胞系增殖的影响被引量：1
- 2011年
- [目的]观察中药正肝方药物血清对甲胎蛋白(AFP)刺激的AFPsiRNA-HepG2细胞增殖的影响。[方法]正肝方浸膏粉经灌胃给药制备正肝方大鼠血清,体外培养AFPsiRNA-HepG2细胞,将细胞分为5%正常大鼠血清、5%正肝方血清、10%正常大鼠血清、10%正肝方血清、5%正常大鼠血清加AFP刺激、5%正肝方血清加AFP刺激、10%正常大鼠血清加AFP刺激、10%正肝方血清加AFP刺激共8组,MTT法检测细胞增殖。[结果]无AFP刺激时,正肝方血清组与正常大鼠血清组OD值差异无统计学意义(P>0.05);有AFP刺激时,正肝方血清组与正常大鼠血清组OD值差异有统计学意义(P<0.01),正肝方血清组显著抑制AFPsiRNA-HepG2细胞增殖。[结论]正肝方血清通过影响AFP介导的AFPsiRNA-HepG2细胞的增殖抑制肝癌细胞增殖。
- 邓欣冉云杨大国吴其恺刘成海
- 关键词：正肝方甲胎蛋白增殖
- 杨大国教授正肝方在慢性肝病治疗中的应用被引量：2
- 2014年
- 杨大国教授是深圳市名中医,湖北中医药大学教授,博士研究生导师,深圳市名老中医学术经验继承指导老师。杨教授长期从事肝病中西医结合科研、教学和临床工作。正肝方是杨大国教授经40余年潜心研究及临床验证的、根据慢性肝炎发生、发展、转变的基本规律而创建的治疗慢性肝炎的经验方。其临床应用范围广泛,杨教授多用此方加减治疗肝纤维化、肝硬化、肝癌前病变等具有正虚邪恋体征的相关病症,临床疗效满意。该方充分体现了杨教授采用整体观念、辨证与辨病相结合治疗慢性肝炎的学术思想,兹论述如下。
- 陈文林吴其恺冉云杨大国
- 关键词：慢性肝病正肝方慢性肝炎博士研究生
