广东省自然科学基金(8151051501000056)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 不同试剂盒对乙脑病毒RNA提取效能的比较
- 2009年
- 目的比较常见的3种商售RNA提取试剂对乙脑病毒检测的相对效率、耗时和成本,为实验室应用及检测结果的评价提供依据。方法对乙脑病毒参考株悬液作10-1～10-4系列稀释,选用QIAGEN公司的QIAamp Viral RNA MiniKit、Sangon生物公司的RNA提取试剂盒和Invitrogen公司的Trizol试剂3种核酸提取方法提取上述样本RNA,用TaqMan实时荧光定量反转录聚合酶链反应对其提取效率进行评价,并比较3种试剂(盒)的耗费时间和价格。结果对不同稀释度乙脑病毒样本的检测,均以QIAGEN公司QIAamp Viral RNA MiniKit检测的敏感度最高。以该试剂盒的提取效率为100%,则Invitrogen和Sangon生物公司RNA提取试剂(盒)的提取效率分别为77.4%～86.8%和64.2%～74.1%。3种试剂(盒)对cDNA起始模板量的估计也有明显的影响,差别达到1～3个数量级,以QIAGEN公司的试剂盒最敏感。3种试剂(盒)提取RNA耗时分别为60min、100min和70min,价格效率比分别为46元、23元和20元。结论RNA提取试剂可影响JEV荧光定量PCR检测的结果,各实验室应根据实验目的和实验室条件,合理选择病毒RNA提取试剂盒。
- 陈亿雄陈志永柯雪梅任旭琦陈清
- 关键词：乙脑病毒RNA提取
- 两种PCR方法检测狂犬病毒的敏感性和特异性比较
- 2011年
- 目的比较Nested-PCR和SYBR GreenⅠReal-Time PCR两种方法检测狂犬病毒的敏感性、特异性和时效性。方法对10倍连续稀释的狂犬病毒(疫苗株)核酸样品,采用Nested-PCR和SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法进行平行检测,比较两种方法的敏感性;同时以登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸对两种方法的特异性进行评价。结果 SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法可检测出2.3×106copies/μl核酸分子,与Nested-PCR方法相比,敏感度提高10倍。两种检测方法的特异性均好,与登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸均无交叉反应。SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法检测花费3h,检测时间比Nested-PCR方法节省2h。结论与Nested-PCR相比,SYBR GreenⅠReal-Time PCR是相对高效的检测狂犬病毒的方法。
- 马莉珍柯雪梅肖建鹏陈清
- 关键词：狂犬病毒NESTED-PCRREAL-TIMEPCRSYBR
- 实验小鼠感染鼠诺如病毒的检测被引量：3
- 2011年
- 目的了解实验小鼠鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的携带情况及其基因特征。方法在广州某实验动物中心抽取两个种系的实验小鼠,采集其粪便标本,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测粪便标本的MNVORF2特异性基因(547bp,MNVnt5104～5650)。对阳性PCR产物进行测序并以测序结果构建基因进化树分析。结果共采集实验小鼠粪便标本20份,粪便来源的小鼠外表健康、活泼、进食正常,没有腹泻现象。MNV的阳性率为30.0%(6/20),阳性实验小鼠种类包括昆明小鼠(3/13)和NIH小鼠(3/7)。本研究检测的6个MNVs在进化树上独立一小分支,与参考株MNV2、3、4最为相近;核酸序列比较发现6个MNVs核酸序列的同源性最高,为98.3%～99.8%。结论该实验动物中心的小鼠存在较高的MNV携带状况,并可能在饲养设施内传播,有必要进一步探讨实验小鼠携带MNV的生物学意义。
- 肖建鹏马莉珍刘姗周军华陈志永陈清
- 关键词：实验小鼠RT-PCR携带率
- RT-PCR与SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法检测乙型脑炎病毒的比较被引量：3
- 2010年
- 目的:比较RT-PCR和SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法检测乙型脑炎病毒(JEV)的敏感性、特异性和时效性。方法:采用RT-PCR和SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法对连续10倍稀释的JEV核酸样品平行检测,比较两种方法的敏感性。同时以登革2型病毒、诺如病毒和狂犬病毒核酸进行两种方法的特异性测试。结果:SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法可检测出40copies/μL的核酸分子水平,与普通RT-PCR方法相比,敏感度提高了10倍,检测时间节省2h。两种检测方法在检测JEV方面,与登革2型病毒、诺如病毒和狂犬病毒核酸均无交叉反应。结论:与普通RT-PCR相比,SYBR GreenⅠ实时RT-PCR是一种更敏感、快速检测JEV的方法。
- 陈志永肖建鹏马莉珍高璐璐陈清
- 关键词：SYBR
