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重组hTERT腺病毒载体的构建、包装与纯化及其意义被引量：1: 2012年; 目的利用分子生物技术构建人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因腺病毒表达载体并检测hTERT基因腺病毒转染细胞的功能表达。方法用凝胶电泳、测序、Western blot-ting等鉴定hTERT质粒。用PCR技术扩增hTERT基因,构建hTERT-PIRES2-EGFP基因载体,重组到pAd腺病毒,转染293A细胞扩增病毒。终点稀释分析法测病毒滴度。CsCl连续梯度离心纯化。结果凝胶电泳、测序和Western blotting检测hTERT基因分子量、序列以及功能是正确的。并且成功构建hTERT腺病毒,病毒浓度达2.1×1012ifu/mL。结论成功构建hTERT腺病毒,为hTERT基因治疗的基础研究和动物实验研究奠定了基础。; 周荣平殷明崔运能张忠民麦奇光陆明徐颂金大地; 关键词：人端粒酶逆转录酶腺病毒

肌间隙入路腰椎间盘退变模型的构建被引量：12: 2012年; 目的探讨背最长肌与腹外斜肌间隙入路纤维环穿刺法构建兔腰椎间盘退变模型的可行性。方法新西兰大白兔6只,从兔子背最长肌与腹外斜肌间隙入路暴露椎体和椎间盘,L2/3为对照组,不暴露也不穿刺椎间盘;L3/4为假手术组,剪断L4右侧横突后暴露椎间盘,但不进行穿刺;L4/5、L5/6为穿刺组,剪断L5、L6右侧横突后暴露椎间盘并用18G针穿刺构建模型。分别在术前及术后4周对实验动物进行X线和磁共振(MRI)检查,4周后处死实验动物,取材后行组织学及免疫组织化学检查。结果术后4周,X线检查显示模型组L4/5、L5/6椎间盘高度明显降低、骨赘形成、终板硬化,MRI T2加权像亦见椎间盘高度下降,其椎间盘髓核信号明显减弱;大体观察见该组椎间盘髓核组织较少并组织松脆,呈淡黄色改变;组织学观察髓核脊索细胞数量减少,免疫组织化学观察到髓核Ⅱ型胶原表达比对照组和假手术组明显减少。结论本研究为椎间盘退变的研究提供了一种较为理想的、相对可靠的动物模型。; 崔运能周荣平麦奇光陆明徐颂王亮李绍林金大地; 关键词：椎间盘退变髓核

去甲二氢愈创木酸抑制骨肉瘤Mg63细胞生长的研究被引量：1: 2012年; 【目的】探讨去甲二氢愈创木酸对骨肉瘤细胞Mg63的生长抑制作用及其机制。【方法】应用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)和克隆形成法测定去甲二氢愈创木酸对Mg63细胞的生长抑制作用,检测其抑制骨肉瘤细胞生长的时间效应和剂量效应;用流式细胞技术进行细胞周期分析;用Western blot法检测药物对Mg63细胞mTORC1信号通路活性的影响。【结果】去甲二氢愈创木酸对Mg63细胞具有明显的生长抑制作用,且呈时间依赖和剂量依赖关系,72 h IC50值为(48±2)μmol/L。10、20、50μmol/L可显著抑制Mg63克隆形成数量,且随剂量增加抑制作用明显增强。细胞周期阻滞于G0/G1期,mTORC1信号通路蛋白p-S6和p-4E-BP1与对照组相比明显下调。【结论】去甲二氢愈创木酸明显抑制骨肉瘤细胞mg63增殖,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,这一作用可能是通过对mTORC1信号通路的抑制完成。; 王京亮王亮王小开张忠民金大地; 关键词：骨肉瘤去甲二氢愈创木酸增殖

去甲二氢愈创木酸抑制骨肉瘤细胞黏附、迁移和侵袭: 2012年; 目的研究去甲二氢愈创木酸(NDGA)对骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭特性的影响,并初步探讨其相关机制。方法不同浓度的NDGA处理MG63细胞,用CCK-8法、细胞划痕试验和Transwell小室模型分别测定其黏附力、迁移力和侵袭力,Western blot法检测MG63细胞基质金属酶(MMPs)表达量的变化。结果 NDGA明显抑制骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭力(P<0.05);NDGA抑制MG63细胞的黏附、迁移和侵袭力呈剂量依赖性;Westernblot检测表明MG63细胞MMP-2和MMP-9的表达明显下调。结论 NDGA可抑制骨肉瘤MG63细胞的体外黏附,迁移和侵袭,这种抑制效应可能是通过减少骨肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达来实现。; 王京亮王亮王小开金大地; 关键词：去甲二氢愈创木酸骨肉瘤

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广东省自然科学基金(8151051501000024)