黑龙江省自然科学基金(ZNJ0702-01)
- 作品数：6 被引量：43H指数：4
- 相关作者：李广兴任晓峰牛泽曾岩潘龙更多>>
- 相关机构：东北农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡γ-干扰素基因原核表达及多抗血清的制备被引量：6
- 2010年
- 将扩增的鸡γ-干扰素基因(CHIFN-γ)克隆至原核表达载体pET30a上,构建了重组表达质粒pET-30a-CHIFN-γ。将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,于37℃不同时间诱导表达,经SDS-PAGE分析表明该蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,且以可溶蛋白的形式存在。蛋白通过镍离子亲和树脂进行纯化,并作为免疫原制备兔抗CHIFN-γ多抗血清。Western-blotting结果表明目的蛋白与多抗血清有免疫反应性。
- 曾岩任晓峰蔡皓璠牛泽李广兴
- 重组鸡白细胞介素-2对禽流感灭活疫苗免疫增强作用的研究被引量：14
- 2010年
- 为研究重组鸡白细胞介素-2(IL-2)对H5N1亚型禽流感灭活苗的免疫效果,将重组IL-2蛋白和禽流感灭活疫苗联合免疫14日龄SPF鸡,免疫后每周测定一次血清抗体效价﹑脾脏T淋巴细胞亚群,最后计算攻毒保护率。试验结果表明:重组IL-2蛋白具有增强禽流感疫苗免疫效果的作用,提高了血清中的抗体水平﹑增加了脾脏T淋巴细胞CD4+﹑CD8+亚群数量。
- 牛泽任晓峰曾岩刘明卢春颖李广兴
- 关键词：禽流感灭活疫苗免疫效果
- Ea3-1E与mChIL-15融合基因的构建及其真核表达质粒的免疫效果被引量：2
- 2010年
- 应用重叠扩增PCR技术将鸡堆形艾美球虫子孢子表面抗原3-1E基因片段(Ea3-1E)与编码鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段(mChIL-15)进行串联连接,并在这2个基因片段之间引入4个柔性连接肽SPGS,获得融合基因Ea3-1E-linker-mChIL-15。以pcDNA3.1(+)为载体构建并鉴定真核表达质粒pcD-NA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15。应用磷酸钙法将质粒体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术对重组质粒的体外瞬时表达进行检测。将重组质粒pcDNA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15、pcDNA3.1-Ea3-1E和pcDNA3.1分别于14和21日龄经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,28日龄时,除非免疫非感染组外,各组感染5×104个堆形艾美球虫孢子化卵囊,观察真核表达质粒的免疫保护效果。结果显示,成功构建了融合基因3-1E-linker-mChIL-15,转染后第30小时可检测到融合基因编码蛋白在293T细胞中的瞬时表达。与质粒pcDNA3.1-Ea3-1E相比,质粒pcDNA3.1-Ea3-1E-linker-mChIL-15二次免疫后可提供明显的抗球虫免疫保护效果,提高相对增重率(96.48%),降低卵囊排出率(68.35%),降低十二指肠病变记分等。抗球虫指数为183.78。
- 马德星潘龙杨静红唐丽李广兴
- 关键词：融合基因真核表达质粒免疫效果
- 鸡堆形艾美球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其抗球虫免疫保护作用被引量：13
- 2009年
- 应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从堆形艾美球虫SH株子孢子中扩增3-1E基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E。质粒纯化后体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术检测3-1E蛋白在转染细胞中的表达情况。将构建的重组质粒以及空载体质粒分别于14、21日龄分2次经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,28日龄除非免疫非感染对照组外各组攻击性感染5×104个堆形艾美球虫孢子化卵囊,观察真核表达质粒对球虫感染鸡的免疫保护作用并探讨其免疫保护机理。结果显示,与载体对照组相比,质粒pcDNA3.1(+)-3-1E 2次免疫后可显著提高脾CD8+T淋巴细胞亚型数量,并具有一定的抗球虫免疫保护作用,可显著减少每克粪便的卵囊排出量,降低十二指肠病变记分,减少增重下降等。
- 马德星潘龙杨静红蔡浩璠李广兴
- 关键词：3-1E基因真核表达质粒免疫保护
- 重组鸡γ-干扰素对H5亚型禽流感灭活苗的免疫增强作用被引量：7
- 2010年
- 为研究重组鸡γ-干扰素(Chicken interferonγ,ChIFN-γ)对禽流感灭活疫苗的免疫增强效果,使用重组鸡γ-干扰素作为免疫佐剂,联合禽流感灭活疫苗采用胸部肌肉注射的方式免疫SPF雏鸡,免疫后每周测定血清抗体效价、免疫器官T、B淋巴细胞转化水平,攻毒后计算攻毒保护率。结果表明,鸡γ-干扰素提高了血清抗体水平,免疫器官T、B淋巴细胞转化水平和攻毒保护率,与疫苗组相比多数指标差异显著(P<0.05)。鸡γ-干扰素对H5亚型禽流感灭活疫苗具有免疫增强作用。
- 曾岩任晓峰蔡皓刘明牛泽李广兴理番
- 关键词：灭活苗免疫增强
- 3-1E/mChIL-15融合基因构建及在真核细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 将鸡堆形艾美尔球虫（E.acervulina）子孢子和裂殖子表面抗原3-1E基因片段与鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段（mChIL15）通过四个柔性氨基酸SPGS连接,构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1/3-1E-linker-mChIL-15。表达质粒纯化后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光和免疫组织化学方法对重组质粒的体外瞬时表达进行检测。结果表明,成功构建了融合基因3-1E-linker-mChIL-15,转染后30h可检测到融合基因编码的融合蛋白在293T细胞中的瞬时表达。研究为鸡艾美尔球虫基因工程疫苗进一步研制及应用奠定了基础。
- 马德星潘龙郎跃深杨静红李广兴
- 关键词：融合基因真核表达质粒
