四川省卫生厅科研基金(2008-527-080178)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：泸州医学院附属医院四川大学华西医院四川大学更多>>
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- 全反式维甲酸干预鼠胚神经干细胞联合胶质细胞源性神经营养因子及硫酸软骨素酶ABC移植修复大鼠脊髓损伤的研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)干预培养的鼠胚神经干细胞(neural stem cells,NSCs)联合胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neur otrophic factor,GDNF)、硫酸软骨素酶ABC(chondroitinase ABC,Ch ABC)移植治疗大鼠脊髓损伤的效果。方法取健康成年雌性SD大鼠60只,体重200~250 g,随机分为5组(n=12),分别为假手术组(A组)、损伤对照组(B组)、NSCs+GDNF移植组(C组)、NSCs+Ch ABC移植组(D组)、NSCs+GDNF+Ch ABC移植组(E组)。B^E组于T10平面横断脊髓建立脊髓全横断损伤模型,A组仅显露硬脊膜但不损伤脊髓。于术后第8天将Brd U标记的ATRA干预培养的鼠胚NSCs移植至C、D、E组大鼠,第8~14天C^E组每天对应给予10μL GDNF、10μL Ch A BC,A、B组给予等量生理盐水。术后观察大鼠一般情况;于术前1 d、术后7 d及移植后1、2、5、8周采用BBB评分评估大鼠双后肢运动功能,采用体感诱发电位(somatosensory evoked potentials,SEP)评估神经传导功能。移植8周处死各组大鼠,取移植节段脊髓行HE染色和免疫荧光染色观察。结果造模术后共5只大鼠死亡,均补充。造模术后各时间点,B^E组大鼠BBB评分均较A组降低,SEP潜伏期均较A组延长,差异有统计学意义(P<0.05);造模术后7 d、移植后1周时,B^E组组间BBB评分、SEP潜伏期比较,差异无统计学意义(P>0.05);移植2、5、8周,C^E组大鼠双后肢功能逐步恢复,各时间点BBB评分均高于B组,SEP潜伏期均短于B组,差异有统计学意义(P<0.05);移植5、8周,E组BBB评分高于C、D组,SEP潜伏期短于C、D组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色示,A组灰、白质分界清楚,细胞排列规则;B组损伤区血管形态欠完整,细胞排列紊乱,可见囊腔及胶质瘢痕形成;C^E组细胞增生明显,坏死囊腔较B组小。免疫组织荧光染色示,A、B组未见明显Brd U标记阳性细胞;C、D、E组Brd U阳性细胞胞体呈橘红色,E组阳性细胞多于C、D组(P<0.05)。C^E组神�
- 廖烨晖钟德君康敏姚帅辉张毅余永涛
- 关键词：神经干细胞胶质细胞源性神经营养因子硫酸软骨素酶ABC脊髓损伤
- 全反式维甲酸促鼠胚神经干细胞向神经元分化中BMP-2的表达及意义
- 2012年
- 目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic-acid,ATRA)体外促NSCs分化为神经元的过程中,BMP-2表达的变化及意义。方法 1.0μmol/L ATRA诱导体外培养的鼠胚神经干细胞,诱导3、5、7、9 d后,采用免疫细胞化学、qPCR、Western-Blot检测BMP-2表达变化。结果无ATRA干预时BMP-2表达量较高,随着诱导时间的延长,BMP-2表达逐渐降低,分化7～9 d时表达最低。结论 BMP-2在NSCs体外分化的的早期表达较高,在NSCs分化为神经元过程中逐渐下调,表明ATRA诱导NSCs向神经元的分化与BMP-2信号的抑制有关。
- 钟德君李森康敏徐双魏书一王清王松
- 关键词：神经干细胞全反式维甲酸BMP-2分化
- ATRA干预培养鼠胚神经干细胞联合GDNF移植对脊髓损伤再生修复的作用被引量：2
- 2014年
- 目的体外应用全反式维甲酸(ATRA)进行干预培养的鼠胚神经干细胞(NSCs)联合胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)移植至大鼠损伤脊髓,探讨其对脊髓损伤再生修复的效果。方法体外应用ATRA 1.0μmol/L浓度下诱导NSCs,将60只雌性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、损伤对照组、ATRA干预组、GDNF组、ATRA+GDNF组,每组10只。损伤对照组、ATRA干预组、ATRA+GDNF组、GDNF组大鼠行胸段脊髓全横断损伤效果。术后于移植前1 d、移植后1、2、5、8周,评估大鼠双后肢运动功能,测定运动诱发电位(MEP)评估神经传导功能,采用免疫荧光染色观察移植后NSCs存活情况,5-溴脱氧尿嘧啶核苷/胶质纤维酸性蛋白(BrdU/GFAP)免疫荧光双标染色观察星形胶质细胞分化情况,5-溴脱氧尿嘧啶核苷/微管相关蛋白-2(BrdU/MAP-2)免疫荧光双标染色观察神经元分化情况。评估轴突生长情况。结果 8周后ATRA+GDNF组大鼠行为学评分高于其他各组(P<0.01)。与ATRA干预组及GDNF组相比,8周后ATRA+GDNF组脊髓内GFAP、MAP-2阳性细胞表达面积增大(P<0.05);移植的NSCs在受损脊髓内存活并向周围迁移,后肢运动功能较对照组及ATRA干预组、GDNF组明显改善。结论体外ATRA干预的NSCs联合GDNF移植可有效补充缺失的神经细胞,改善脊髓内微环境,对大鼠后肢功能的改善优于单一应用细胞或神经营养因子移植。
- 姚帅辉钟德君康敏廖烨辉张毅
- 关键词：神经干细胞胶质细胞源性神经营养因子脊髓损伤
- ATRA诱导鼠胚神经干细胞向神经元分化过程中Notch1的表达变化及意义被引量：3
- 2010年
- 目的观察全反式维甲酸(ATRA)体外诱导鼠胚神经干细胞(NSCs)分化为神经元过程中Notch1的表达变化,并探讨其机制。方法将NSCs分为两组,观察组加入终浓度为1.0μmol/L的ATRA,对照组不加ATRA。采用免疫细胞化学法检测NSCs Notch1蛋白,采用实时荧光定量PCR法检测NSCs Notch1 mRNA。结果观察组NSCs经ATRA诱导3、5、7、9 d,Notch1蛋白积分光密度值分别为539.43±13.46、488.67±13.12、437.54±13.10、434.32±13.04,Notch1 mRNA相对表达量分别为0.412 2±0.080 2、0.216 4±0.125 2、0.022 1±0.135 5、0.017 7±0.006 1;对照组分别为591.35±15.61、0.624 3±0.274 5,与对照组相比,P均<0.05。结论在ATRA体外促鼠胚NSCs分化为神经元过程中,Notch1表达减少;ATRA诱导NSCs向神经元的分化与抑制Notch信号途径有关。
- 钟德君康敏王清王高举张德胜宋跃明
- 关键词：神经干细胞NOTCH1蛋白
- Wnt-1在全反式维甲酸促鼠胚神经干细胞向神经元分化中的作用被引量：6
- 2009年
- 目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)体外促神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化为神经元过程中Wnt-1表达的变化,及Wnt-1对NSCs分化的作用。方法取孕12～16dSD大鼠,分离和培养鼠胚NSCs。取第3代NSCs调整密度为1×106个/mL,分别用0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L浓度的ATRA干预,通过荧光双标染色技术和流式细胞仪检测各组细胞神经元分化率,确定1.0μmol/L浓度为ATRA促NSCs分化的最佳浓度。实验组用1.0μmol/L ATRA诱导体外培养第3代NSCs,培养3、5、7、9d后用免疫细胞化学染色、实时荧光定量PCR、Westernblot检测Wnt-1表达的变化;对照组不加ATRA培养。结果免疫细胞化学染色示对照组Wnt-1蛋白表达极少;实验组3d时表达最强,阳性细胞多;培养5d仍可见Wnt-1阳性表达;3、5d时积分吸光度(IA)值与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);7、9d Wnt-1阳性表达明显减少,IA值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量PCR检测示对照组Wnt-1 mRNA相对表达量为0.0217±0.0721;实验组相对表达量随时间增加逐渐降低,3、5d时分别为0.5122±0.2800、0.2164±0.8870,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);7、9d分别为0.0385±0.2994、0.0355±0.3095,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Westernblot印迹检测可见特异染色条带,对照组Wnt-1蛋白表达量为0.0051±0.5583;实验组表达量随时间增加逐渐降低,3、5d时分别为0.4517±0.0713、0.3117±0.0805,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);7、9d分别为0.0073±0.0527、0.0047±0.9314,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在浓度为1.0μmol/L的ATRA诱导下,Wnt-1与NSCs的分化早期成正调控,可能与激活包括经典的Wnt信号途径等信号有关,表明Wnt-1与NSCs向神经元的分化有关。
- 钟德君康敏王清张德胜宋跃明
- 关键词：神经干细胞WNT-1分化
- 全反式维甲酸促大鼠胚胎神经干细胞向神经元分化中β连环蛋白的表达及意义被引量：2
- 2010年
- 目的:观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)在体外促进大鼠胚胎神经干细胞(neural stemcells,NSCs)分化为神经元过程中β连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在NSCs分化中的意义。方法:取第3代大鼠胚胎NSCs体外培养,实验组加入1.0μmol/L ATRA诱导,分别于干预后3、5、7、9d采用免疫细胞化学染色、实时荧光定量RT-PCR、Western blot检测β-catenin的表达及变化情况,对照组不加ATRA培养,于相应时间点进行相同检测。比较两组各时间点β-catenin的表达量。结果:免疫细胞化学染色示实验组在培养3～7d时β-catenin表达逐渐增强(P<0.05),7d与9d差异无统计学意义(P>0.05),实验组各时间点与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);实时荧光定量RT-PCR检测示3～7d时β-catenin mRNA相对表达量逐渐增加(P<0.05),7d与9d差异无统计学意义(P>0.05),实验组各时间点与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Western blot印迹检测实验组细胞内β-catenin总蛋白、胞浆内β-catenin蛋白、胞核内β-catenin蛋白3～7d时表达量逐渐增加(P<0.05),7d与9d差异无统计学意义(P>0.05)。细胞内β-catenin的总蛋白变化趋势与RT-PCR结果相似,且胞浆内β-catenin和胞核内β-catenin的蛋白表达量随时间增加而增加。结论:NSCs分化为神经元的过程中,Wnt/β-catenin信号途径被激活,且β-catenin在细胞浆及细胞核内表达量均增多,与NSCs的分化成正调控,在细胞分化达到平衡状态时(7d～9d)表达量不再增加,表明ATRA促NSCs向神经元的分化与经典的Wnt/β-catenin信号途径有关。
- 钟德君康敏王高举王清王松
- 关键词：神经干细胞全反式维甲酸Β-CATENIN分化
