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湖南省教育厅优秀青年基金(118107)
作品数:
2
被引量:4
H指数:1
相关作者:
刘双全
吴移谋
谢小平
张秋桂
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梅毒螺旋体 Tp0844重组蛋白的表达、纯化及免疫反应性研究
2015年
目的:克隆、表达梅毒螺旋体重组蛋白 Tp0844,纯化表达产物并进行免疫反应性分析,筛选与宿主具有高反应性的 Tp 主要蛋白。方法通过生物信息学分析,获取 Tp0844基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni-NTA 亲合层析柱纯化重组蛋白,Western 印迹法检测其重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况。结果成功构建 PET-30a(+)-Tp0844原核表达重组体,经诱导表达后发现该重组体可高表达出可溶性的重组蛋白,经亲和层析纯化后获得了相对分子质量为43000的重组蛋白;以梅毒 IgG 抗体阴、阳性血清为一抗,采用 Western 印迹法检测发现,Tp0844重组蛋白与梅毒阳性血清能发生明显特异反应,而与健康阴性血清未出现反应条带。结论可溶性重组表达的 Tp0844蛋白具有较好的免疫反应性,可作为梅毒发病机制研究的候选抗原。
刘双全
刘琼
关键词:
苍白密螺旋体
重组蛋白质类
免疫学
免疫反应性
梅毒螺旋体TP0993重组蛋白的表达、纯化及免疫活性分析
被引量:4
2013年
目的探讨梅毒螺旋体重组蛋白TP0993在梅毒血清学诊断中的应用价值。方法通过生物信息学分析,获取TP0993基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni—NTA亲合层析柱纯化重组蛋白,Western印迹检测其免疫抗原性,用重组蛋白直接注射免疫新西兰家兔,评价其免疫原性。用纯化的TP0993重组蛋白包被微孔板,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测临床梅毒患者血清和健康体检者正常血清,同时与梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行比较,根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况,评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值。结果成功构建PET-28a(+)-0993原核表达载体,经表达、纯化后获得相对分子质量约为34000的重组蛋白;Western印迹检测显示该重组蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;利用纯化的TP0993重组蛋白免疫新西兰兔,能诱导新西兰兔产生特异性免疫应答。以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,对TPPA法检测的480份临床血清进行检测,与TPPA法比较ELISA法的灵敏度为88.3%,特异度为85.8%,ELISA法与TPPA法符合率为86.5%。结论重组表达的TP0993蛋白具有较好的免疫活性,可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一。
谢小平
刘双全
张秋桂
吴移谋
关键词:
密螺旋体
苍白
重组蛋白质类
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