国家高技术研究发展计划(2013AA102801)
- 作品数：11 被引量：42H指数：3
- 相关作者：姚冬生谢春芳刘大岭杨广宇冯雁更多>>
- 相关机构：暨南大学上海交通大学国家工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学理学更多>>
- 饲用酶蛋白的理性设计及其改良技术
- 2013年
- 酶作为天然的生物催化剂,具有高催化效率和高底物选择特异性的特点,在工农业生产上有重要的应用价值。通过对酶蛋白的改造是获得优良性质酶蛋白的重要来源。针对饲用酶应用的特点,从酶蛋白理性分子设计策略及其技术方法角度综述了酶的热稳定性及pH稳定性改造,蛋白酶抗性改造和酶蛋白的多性质改造等,以期为相关实验研究提供技术参考。
- 刘小芸姚冬生
- 关键词：分子设计热稳定性糖基化
- 超嗜热酯酶EST2在不同宿主中的异源高效表达研究被引量：2
- 2014年
- 来源于超嗜热古菌Alicyclobacillus acidocaldarius的酯酶EST2是目前报道的活性最高的超嗜热酯酶,具有极大的工业应用价值。为促进EST2的生产应用,将其分别在大肠杆菌及毕赤酵母中进行异源表达,并就不同宿主对表达情况和重组酶酶学性质的影响进行了分析。在大肠杆菌和毕赤酵母中重组表达的EST2酶学性质基本一致:最适温度分别为75℃和77.5℃,最适p H均为8.0,比活力分别为4656.6 U/mg和4078.3 U/mg,70℃水浴保温4.5 h,残余活力均在70%以上。在摇瓶发酵的基础上,于5 L发酵罐中进行了重组大肠杆菌及毕赤酵母的高密度发酵。毕赤酵母高密度发酵120 h菌体干重达68 g/L,最大表达酶活力为959.6 U/ml。大肠杆菌高密度发酵25 h菌体干重达60.8 g/L,最大酶活力14825.6 U/ml,表达量是毕赤酵母的15.4倍,单位时间产量是酵母的74.2倍。结果表明大肠杆菌发酵周期短、表达量高,更适合进行嗜热酯酶EST2的高效生产,这为促进嗜热酯酶在工业生物技术产业的应用奠定了基础。
- 罗漫杰谢渊钱志刚冯雁杨广宇
- 关键词：异源表达高密度发酵大肠杆菌毕赤酵母
- 构建人工遗传线路增进毕赤酵母纤维素代谢功能
- ＜正＞巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）的遗传背景已经研究比较清晰,可进行蛋白翻译后的修饰、加工和折叠等优点,有良好的可操作性,已发被用于表达多种外源蛋白。因具有毒性小,发酵工艺成熟,易于工业化,培养成本低...
- 周妮陈丹谢春芳刘大岭刘忠钱垂文姚冬生
- 文献传递
- 利用N-糖基化修饰对β-甘露聚糖酶Man47的稳定性改造被引量：3
- 2013年
- N-糖基化是真核生物蛋白质最重要的翻译后修饰之一。以Armillariella tabescensβ-甘露聚糖酶Man47为研究对象,利用计算化学对A.tabescensβ-甘露聚糖酶Man47进行理性设计,经过分子对接、二级结构分析和糖基化的可行性分析后,构建具有EAS(enhanced aromatic sequence)序列的突变体g-123作为N-糖基化的突变位点。将其整合到毕赤酵母表达载体SMD1168上,通过电转化得到重组转化子。最后对突变体g-123的温度稳定性、酸碱稳定性、胃蛋白酶和胰蛋白酶抗性进行分析。结果表明:糖基化A.tabescensβ-甘露聚糖酶Man47突变体g-123与野生型相比,其热稳定性、酸碱稳定性、蛋白酶抗性均得到不同程度的改善。
- 谢春芳黎玉凤刘大岭姚冬生
- 关键词：N-糖基化翻译后修饰蛋白质设计生物信息学
- 我国北方玉米上平脐蠕孢属和弯孢属真菌及其所致叶斑病被引量：9
- 2016年
- 平脐蠕孢属(Bipolaris)和弯孢属(Curvularia)真菌可引起多种玉米叶斑病。为了解当前玉米生产上此类病害的发生情况,2014年8-9月对我国玉米主产区北京、河北、河南、黑龙江和吉林5省市玉米上疑似由该两属真菌引起的叶部病斑样品进行了采集,随后进行了真菌的分离和鉴定。共采集样品42份,根据其形状特点归为4类:长条形、椭圆形、小点状和梭形病斑。经组织分离获得平脐蠕孢属和弯孢属真菌28株,基于形态学和rDNA-ITS序列的系统发育分析共鉴定出5个种:玉蜀黍平脐蠕孢(B.maydis)、玉米平脐蠕孢(B.zeae)、玉米生平脐蠕孢(B.zeicola)、新月弯孢(C.lunata)和穂状弯孢(C.spicifera)。从长条形病斑和椭圆形病斑上分离到的主要是B.maydis和B.zeicola,从小点状病斑分离到的主要是C.lunata,其次是B.zeae。分离出C.lunata的样品病斑较为稀疏、颜色略浅、呈苍白色,分离出B.zeae的样品病斑更为密集、颜色较深。从梭型病斑分离到的是C.spicifera。有少数样品可分离到上述两种菌。采用孢子悬浮液喷雾法对温室玉米苗接种,上述5种真菌均可致病。以接种B.maydis发病最快,发病最重;接种B.zeicola、C.lunata或C.spicifera发病较慢,症状明显;接种B.zeae发病最慢,仅引起小点状病斑。研究结果可为玉米叶斑病的正确诊断提供资料和依据。
- 郭玉杰牛永春邓晖
- 关键词：玉米叶斑病
- 纤维素酶E4胃蛋白酶抗性的理性分子设计
- 当饲用酶被畜禽食用后,胃是它进入的第一个停留时间较长的消化器官。然而饲用酶在胃中将面临两大危害:酸解作用和酶解作用。因此,提高饲用酶在消化道环境中对胃蛋白酶的耐受性,对其功能的发挥颇为重要。本实验室在前期的研究中提出了基...
- 王英
- 关键词：过渡态分子模拟
- 文献传递
- 酵母培养物、枯草芽孢杆菌和木瓜蛋白酶对保育猪生长性能、营养物质表观消化率和粪便微生物数量的影响被引量：16
- 2016年
- 为了探究从神曲(MMF)和酸面团中分离到的酿酒酵母的作用,本试验研究了新型的复合酵母培养物(YC)、枯草芽孢杆菌(BSK)、木瓜蛋白酶(PE)对保育猪生长性能、营养物质表观消化率和粪便微生物数量的影响。选择平均体重为(15.70±0.26)kg的断奶仔猪225头,随机分为5组,每组3个重复,每个重复15头猪。对照(CT)组饲喂基础饲粮,YC组饲喂基础饲粮+5 g/kg YC,BSK组饲喂基础饲粮+2×1011CFU/kg BSK,PE组饲喂基础饲粮+0.3 g/kg PE,复合(YP)组饲喂基础饲粮+5 g/kg YC+0.3 g/kg PE。预试期5 d,正试期30 d。结果表明:1)YP组末重、平均日增重显著高于CT组(P<0.05),料重显著低于CT组(P<0.05);YC组末重高于CT、BSK、PE组(P>0.05)。各组间平均日采食量无显著差异(P>0.05)。YC、PE和YP组的腹泻率均显著低于CT和BSK组(P<0.05)。2)YC、BSK、PE、YP组总能和干物质的表观消化率显著高于CT组(P<0.05),YC组粗蛋白质、磷的表观消化率显著低于YP组(P<0.05),YC组酸性洗涤纤维、钙的表观消化率显著低于其他各组(P<0.05)。各组间有机物和粗脂肪的表观消化率无显著差异(P>0.05)。3)YC、YP组粪便乳酸菌数量和乳酸菌/大肠杆菌显著高于其他各组(P<0.05),粪便大肠杆菌数量显著低于其他组(P<0.05)。由此可知,新型YC可以改善仔猪生长性能和肠道生态环境,YC和PE的联用对仔猪生长也有积极作用。
- 张丽丁宏标
- 关键词：酵母培养物枯草芽孢杆菌木瓜蛋白酶保育猪
- 基于计算化学设计的N-糖基化修饰对β-甘露聚糖酶稳定性的改造
- ＜正＞N-糖基化,通过肽链上的天冬酰胺（Asn）的酰胺基（-NH2）与寡糖的半缩醛羟基（GlcNAc的β-羟基）相连,是真核生物蛋白质最重要的翻译后修饰之一。N-糖基化修饰通过加速蛋白质的正确折叠,减少聚集数量,非折叠状...
- 黎玉凤刘小芸谢春芳刘大岭姚冬生
- 文献传递
- 酿酒酵母JI1和LS1401的筛选及其培养物的益生作用研究
- 引言酵母及酵母培养物是最早应用、使用时间最长、效果显著的微生态添加剂。酵母在特定工艺条件下经过充分的厌氧发酵干燥后制成酵母培养物。它由酵母细胞代谢产物、经过发酵后的培养基以及少量酵母细胞所构成,营养丰富。酵母培养物益生作...
- 张丽丁宏标
- 通过毕赤酵母表达系统获得高纯度的重组人血管内皮生长因子(rhVEGF165)被引量：2
- 2021年
- 血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF165)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子,高纯度的VEGF165对于抗肿瘤药物和生物标志物研发检测试剂必不可少。目前关于VEGF165的异源表达方法,纯化步骤多且产物纯度不高。以毕赤酵母表达系统为基础,构建人血管内皮生长因子(VEGF165)多拷贝的表达载体。按照酵母密码子偏好性优化人血管内皮生长因子基因(vegf165)的密码子,在毕赤酵母BBPB表达载体基础上,用Biobrick生物积块的方法,构建以Pgap为启动子的五拷贝rh VEGF165表达载体,同时添加组氨酸标签。利用His标签和VEGF165自身的肝素结合结构域,仅用两步亲和层析纯化得到纯度高于98%的rh VEGF165蛋白。rh VEGF165纯化后浓度为0.45 mg/m L,且具有生物学活性。该异源表达策略简化了rh VEGF165的纯化步骤,rh VEGF165具有天然VEGF165的生物学活性,且纯度达到目前文献报道的最高水平。
- 周伟杰吴凤梅姚冬生谢春芳
- 关键词：人血管内皮生长因子VEGF165多拷贝毕赤酵母
