河北省自然科学基金(C2009000191)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：河北大学青岛大学医学院附属医院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- SLC38A3抗体的制备及细胞内定位
- 2012年
- 从人胎肝cDNA文库中钓取得到SLC38A3全长cDNA序列.利用生物信息学方法对SLC38A3蛋白序列进行分析,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择一段多肽序列作为抗原用于抗体制备.将该片段克隆到pET-DsbA融合蛋白表达载体上,在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下产生SLC38A3抗原肽.纯化目的蛋白并制备兔抗SLC38A3蛋白的多克隆抗体.利用Western blot鉴定抗体特异性,并初步分析该蛋白在人肺癌细胞A549内的定位.结果显示,成功构建了SLC38A3片段的原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,制备了特异性较高的人SLC38A3蛋白多克隆抗体,并证实该蛋白表达于细胞质内.为进一步研究SLC38A3的生物学功能奠定了基础.
- 吴琛郭亚伟王媛媛田焕娜刘晓波
- 关键词：多克隆抗体基因定位
- GALNT14对人乳腺癌MCF-7细胞迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 构建真核表达载体pcDNA 3.1-Flag-T14,重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,利用脂质体将重组质粒转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,经G418筛选并建立稳定转染GALNT14细胞株。应用半定量RT-PCR、Western blot检测稳定细胞株GALNT14 mRNA及蛋白表达水平,细胞划痕修复及穿膜试验检测GALNT14基因对MCF-7迁移能力的影响,同时RT-PCR检测GALNT14对MMP-2,MMP-9,TGF-β1及VEGF等肿瘤浸润转移相关因子表达的影响。结果显示成功构建了真核重组表达载体pcDNA 3.1-Flag-T14,经RT-PCR和Western blot检测显示成功获得了稳定表达GALNT14的MCF-7细胞株;GALNT14能够提高MCF-7细胞株的迁移能力,且能增加侵袭转移相关因子MMP-2,MMP-9,TGF-β1及VEGF的表达。结论:GALNT14可明显促进MCF-7细胞的迁移,可能在肿瘤侵袭转移中起重要作用。
- 吴琛田焕娜王媛媛刘芳铭张晓康李秦剑谢园园
- 关键词：乳腺癌稳定转染细胞迁移
- 乙酰氨基半乳糖转移酶14多抗的制备及鉴定被引量：2
- 2011年
- 利用生物信息学方法分析乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14)蛋白序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择一段多肽序列作为抗原用于抗体制备。将该DNA片段插入pET-DsbA,构建原核表达载体pET-DsbA-GALNT14。用IPTG诱导表达蛋白,经镍柱纯化蛋白后免疫新西兰大白兔,获得GALNT14多克隆抗血清。用免疫扩散和免疫印迹检测抗体效价及特异性。结果显示,成功表达并纯化了目的蛋白。免疫动物后获得了效价较高、特异性强的GALNT14多克隆抗体,GALNT14蛋白在人乳腺癌和肾癌细胞株中均有表达。该结果为进一步研究GALNT14的功能及其在肿瘤发生发展的作用方面奠定了基础。
- 吴琛郭晓丹宋玉华张博马思思邓昊葛建峰李世奇徐强康现江
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 乙酰氨基半乳糖转移酶14(GALNT14)在毕赤酵母中的表达纯化及活性鉴定
- 2011年
- 将GALNT14全长编码区克隆到分泌型酵母表达载体pPIC9K中,构建重组载体pPIC9K-T14,经电转至毕赤酵母GS115中表达,使用G418筛选高表达重组菌,并对诱导条件进行优化,表达产物使用SDS-PAGE分析、Western blot鉴定、Sephadex G-100纯化、最后经HPLC检测活性。结果显示,在提供更好的供氧量条件下,用0.75%甲醇诱导可提高目的蛋白的表达量而降低杂蛋白的表达。培养上清液经SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子量约64 kDa;Western blot结果显示在相应分子量处有一条特异性条带;利用Sephadex G-100成功分离纯化了目的蛋白;活性测定结果显示所获得的目的蛋白具有催化活性,为深入研究GALNT14的结构与功能奠定了基础。
- 吴琛葛建峰张博马思思刘芳铭王媛媛田焕娜刘晓波张晓康李秦剑
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- UDP-GalNAc:多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14被引量：5
- 2010年
- UDP-GalNAc:多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族(简称GalNAc-T)是黏蛋白O-糖基化的起始酶,N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14(GalNAc-T14)是该家族中最新发现的成员。近年来有人指出,O-糖基化可能与肿瘤的发生发展具有密切关系,因此对N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族的研究也受到越来越多重视。本文主要综述了GalNAc-T14的命名、结构、分布、功能以及潜在的应用价值。
- 郭晓丹吴琛康现江
- 关键词：肿瘤发生
