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裸磁珠对高菌量细菌吸附性能的初步研究被引量：9: 2006年; 目的:研究不同实验条件下自制裸磁珠对细菌吸附效率,优化吸附条件,为后续裸磁珠的应用研究奠定基础。方法:考察不同的磁珠用量、菌量、孵育温度、孵育时间下磁珠对细菌吸附效率,比较磁珠的保存方法对其吸附率的影响。用磁珠吸附定量细菌后计数残留菌数,计算其吸附率。结果:磁珠用量与吸附率近似正相关,吸附容量与原始菌量存在对数线性相关。温度影响吸附效率。孵育时间40 m in后吸附率无明显差异,达到平衡。此外,干式和湿式保存的磁珠,对试验细菌的吸附率无明显差异。结论:自制裸磁珠以50 mg(干式)37℃孵育40 m in对高菌量试验菌(>106cfu/m l)有较高的吸附效率(>80%),可望用于样品中细菌的分离富集。; 樊学军陈恒孙敏邱晋田绿波曾力裴晓方; 关键词：吸附率

TaqMan^(TM)实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的初步研究被引量：8: 2006年; 目的:建立实时荧光TaqM anTM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法,为食品中蜡样芽胞杆菌污染的调查及食物中毒的快速准确定量检测提供手段。方法:通过分析蜡样芽胞杆菌16S rDNA、23S rDNA、16S-23S ITS、gyrB、groEL、cereolysin AB、HBL(hb lA、hb lC、hb lD)、NHE(nheA、nheC、nheD)、bce-T等目的基因,对比所选取的不同目的基因优缺点,最终选择合适的目的基因16S-23S ITS进行同源性分析,并根据GenBank公布的蜡样芽胞杆菌16S-23S ITS基因的保守序列,用引物与探针专业设计软件自行设计引物和TaqM anTM探针,并利用硅胶模型TM基因组DNA提取法制备DNA标准品,通过对TaqM anTM实时荧光PCR退火温度、探针浓度、引物浓度、Mg2+离子浓度、缓冲液浓度及酶用量等反应条件的优化,初步建立蜡样芽胞杆菌的实时荧光TaqM anTM快速定量检测方法,并利用该方法对模拟样品进行检测。结果:选取的16S-23S ITS基因同源性达到99%以上,特异性好;所有蜡样芽胞杆菌均含有两段16S-23S ITS基因,有利于提高反应的灵敏度。通过对各实验条件的优化,得出蜡样芽胞杆菌TaqM anTM实时荧光PCR的最佳反应条件,初步建立起实时荧光TaqM anTM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法,该方法能在3 h左右完成整个检测过程。结论:实时荧光Taq-M anTM定量检测法不但灵敏度好,而且特异性高,检测时间短,能提高蜡样芽胞杆菌的检出率和检测准确性,可望应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的快速准确定量诊断。; 沈圣余娟滕毅丁晓贝郑萍裴晓方; 关键词：蜡样芽胞杆菌实时荧光PCR

自制裸磁珠对常见食源性致病菌吸附性能的研究被引量：12: 2006年; 目的:研究自制裸磁珠对常见食源性致病菌和卫生指示菌的吸附性能,摸索从样品中快速分离和浓集细菌的方法。方法:试验裸磁珠对细菌的吸附性能,摸索温度和样品成分对其吸附性能的影响。结果:自制裸磁珠在37℃对常见食源性致病菌和卫生指示菌有很强的吸附,吸附率均高于97%。食品成分对其吸附有一定影响,吸附率最低为58.42%。结论:自制裸磁珠可望用于环境和食品样品中多种细菌的非特异性吸附分离和浓集,值得进一步研究和推广。; 邱晋樊学军沈圣孙敏谢志梅腾毅许欣裴晓方; 关键词：食源性致病菌

重组沙门菌侵袭蛋白A的原核表达与纯化被引量：3: 2006年; 目的在大肠杆菌中表达重组沙门菌侵袭蛋白A,并对表达产物进行分离和纯化。方法提取沙门菌基因组模板,PCR扩增侵袭因子invA基因目的片段,插入表达质粒载体pET-30c(+)中,构建pET-invA重组子,经双酶切和测序证实后,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导重组蛋白表达,镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Westernblot检测鉴定表达蛋白。结果成功构建了沙门菌pET-invA大肠杆菌表达重组子,实现了该蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分离纯化的表达产物纯度达到电泳纯。结论沙门菌侵袭蛋白A的成功表达和分离纯化,为该蛋白的免疫学性能研究、相应抗体的制备以及沙门菌快速检测方法的建立奠定了基础。; 周爱萍张祖昌许欣樊学军占利孙敏裴晓方; 关键词：重组蛋白质原核表达

实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌重组质粒标准的构建被引量：1: 2008年; 〔目的〕构建蜡样芽胞杆菌16s-23sITS重组质粒,为实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌提供质粒标准。〔方法〕选择蜡样芽胞杆菌16s-23sITS特异基因作为目的靶序列,设计、合成引物和探针,采用普通PCR扩增特异靶序列,克隆到pGM-T载体后,转化感受态大肠埃希菌DH5,α经蓝白斑筛选,再分别用EcoRI酶切,普通PCR及测序3种方法证实目的片段已成功重组。建立荧光定量PCR检测蜡样芽胞杆菌的标准曲线。〔结果〕成功构建目的重组质粒,并以此为标准制作荧光定量PCR标准曲线,重组质粒标准具有较大的线性范围(102copies/μl～108copies/lμ)和灵敏度。〔结论〕该方法构建的16s-23sITS基因重组质粒能满足实时荧光定量测定对参考标准的要求,为后续实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的推广应用提供了条件。; 田绿波左浩江陈肖潇周倩樊学军吴志云裴晓方; 关键词：重组质粒实时荧光定量PCR

多重PCR快速检测致泻大肠埃希菌被引量：4: 2010年; 大肠埃希菌（Escherichia coli，E．coli）是寄居在人和动物肠道中的正常菌群之一，但其中一些菌株携带毒力基因，具有致病性，能引起人类腹泻，被称为致泻E．coli。根据发病机制、临床特征、流行病学特征、O抗原血清及细菌的毒力测定，可将致泻E．coli分为5类：; 朱敏冉陆沈圣邱晋张立实裴晓方; 关键词：致泻大肠埃希菌多重PCR E.COLI 流行病学特征正常菌群毒力基因

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四川省科技攻关计划(05SG022-001-3)

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