河北省卫生厅医学科学研究重点课题(07126)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王洁王旭石宏于利洁顾洪涛更多>>
- 相关机构：河北医科大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省卫生厅医学科学研究重点课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向抑制人木糖基转移酶-I基因的shRNA真核表达载体的构建被引量：3
- 2008年
- 目的构建靶向抑制人木糖基转移酶-Ⅰ(XT-Ⅰ)基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,为探讨唾液腺肿瘤性肌上皮细胞合成及分泌蛋白多糖(PG)的研究奠定基础。方法根据GenBank提供的XT-Ⅰ基因序列,设计短链寡核苷酸,化学合成后经退火形成双链DNA片段,克隆到Pgenesil-1载体中,构建shRNA真核表达载体WJ1-WJ6,行酶切及核酸测序鉴定;将构建的XT-Ⅰ特异性shRNA表达载体转染体外培养的人唾液腺腺样囊性癌细胞株ACC-M,在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术检测转染效率,并采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞XT-Ⅰ基因mRNA和蛋白表达水平的变化。结果经酶切、连接后构建的6个质粒命名为WJ1、WJ2、WJ3、WJ4、WJ5、WJ6。酶切及核酸测序鉴定证实,构建的shRNA表达载体WJ1-WJ6序列正确;转染WJ1-WJ6后ACC-M细胞均可表达绿色荧光;流式细胞术测定转染效率平均为50.26%;RT-PCR结果显示,WJ3显著抑制XT-Ⅰ mRNA的表达,抑制率为72.39%;Western blot结果显示,WJ3有效抑制XT-Ⅰ的蛋白表达,抑制率为70.18%。结论成功构建靶向抑制XT-Ⅰ的shRNA真核表达载体WJ1-WJ6,其中WJ3可高效抑制XT-Ⅰ基因mRNA及蛋白水平的表达,为唾液腺肿瘤中PG的RNAi研究奠定了基础。
- 石宏王洁王旭顾洪涛侯亚丽于利洁
- 关键词：唾液腺肿瘤肌上皮细胞蛋白多糖
- 蛋白多糖与涎腺腺样囊性癌增殖的关系被引量：2
- 2010年
- 目的探讨蛋白多糖（proteoglycans）合成的阻抑对人涎腺腺样囊性癌ACC—M细胞增殖的影响。方法构建靶向人木糖基转移酶-Ⅰ（xylosyltransferase—Ⅰ，XT-Ⅰ）基因的短发卡状RNA（shorthairpin RNA，shRNA）真核表达载体shRNA—WJ3，转染人涎腺腺样囊性癌高转移株ACC．M细胞，通过G418筛选稳定转染的细胞，采用实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法测定shRNA-WJ3的基因沉默效果；检测各组细胞蛋白多糖合成分泌水平的变化。采用甲基噻唑基四唑法（MTT）检测细胞增殖情况；流式细胞术测定细胞周期改变。结果shRNA—WJ3转染ACC-M细胞后，细胞中XT—I基因的mRNA和蛋白表达抑制率分别为83．70％和79．60％；稳定转染shRNA—WJ3的ACC—M—WJ3细胞蛋白多糖分泌显著降低（P〈0．01），抑制率为49．71％～54．59％。MTT法检测结果表明：蛋白多糖合成阻抑后，ACC—M细胞增殖活性明显降低；ACC—M-WJ3细胞与对照组细胞相比：S期细胞数目减少；G1～G0期细胞数目增加，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论蛋白多糖合成分泌的阻抑能有效抑制ACC—M细胞的增殖。
- 石宏王洁董福生王旭李荷香
- 关键词：涎腺蛋白多糖
