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MSCS通过分泌细胞因子及抗凋亡作用修复H2O2损伤的PCl2细胞: 目的:新生儿缺氧缺血性脑损伤是儿童神经系统致残的常见原因之一,课题组前期研究表明体内移植MSCs对HIBD新生大鼠学习记忆功能的恢复具有明显促进作用,但同时也发现MSCs在体内的分化率不足10%,因此,仅用直接分化为有功...; 张赟江伟毕杨龚敏张小建喻琴魏小平李廷玉陈洁; 关键词：MSCS 细胞因子 HIBD PC12; 文献传递

大鼠白细胞介素-6重组腺病毒构建及初步鉴定: 2014年; 目的构建携带大鼠白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)基因的重组腺病毒,为研究IL-6在神经损伤中的生物学作用提供技术手段。方法体外扩增大鼠IL-6基因,定向克隆到pAdTrace-TOX腺病毒穿梭质粒中,构建重组pAdTrace-IL-6过表达腺病毒质粒,并与骨架质粒pAd-Easy-1在BJ5183菌中发生同源重组,获得pAd-IL-6腺病毒载体,经PacⅠ酶切后转染HEK293细胞进行包装扩增。通过Ad-IL-6腺病毒感染PC12细胞,Real-time PCR和Western blot检测PC12细胞中IL-6及STAT3的表达。结果 PCR电泳及酶切、测序鉴定均证实目的基因IL-6正确克隆至腺病毒载体中,所构建的腺病毒Ad-IL-6可感染PC12细胞,有效增加IL-6的表达水平,促进IL-6信号通路中关键蛋白磷酸化STAT3的表达。结论成功构建携带IL-6的重组腺病毒载体,该载体可显著增高PC12细胞中IL-6基因和蛋白表达水平,并上调IL-6相关信号通路。; 刘晶晶张赟毕杨龚敏李廷玉陈洁; 关键词：白细胞介素-6 重组腺病毒 PC12细胞 STAT3

大鼠siTLR4重组腺病毒载体的构建及功能鉴定被引量：1: 2012年; 目的构建特异性针对大鼠TLR4基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究TLR4在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础。方法设计并合成3对大鼠TLR4基因的siRNA序列,退火处理后定向克隆到pSES-HUS穿梭质粒中,获得pSES-HUS-siTLR4,经Pme I线性化后与pAdEasy-1骨架质粒在BJ5183细菌中进行同源重组,从而构建pAd-siTLR4质粒,通过脂质体转染,在HEK293细胞中包装形成Ad-siTLR4腺病毒颗粒,用该病毒感染PC12细胞,从基因和蛋白质水平分别检测3对siTLR4的抑制效果,同时从蛋白质水平检测TLR4下游关键分子NF-κB的表达。结果 PCR、酶切和测序均证实目的基因正确克隆到所构建的pAd-siTLR4重组腺病毒载体中;经包装获得的Ad-siTLR4病毒颗粒在PC12细胞中能够有效地抑制TLR4 mRNA和蛋白水平的表达,并显著地降低了NF-κB的表达。结论成功构建了pAd-siTLR4重组腺病毒质粒,同时包装获得了Ad-siTLR4重组腺病毒,转染PC12细胞后不仅能明显降低TLR4的表达,而且有效地抑制了TLR4通路下游关键分子NF-κB的表达。; 张赟毕杨龚敏江伟魏小平李廷玉陈洁; 关键词：SIRNA 重组腺病毒载体 NF-ΚB 免疫调节

大鼠Toll样受体2基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3: 2012年; 目的:构建特异性抑制大鼠TLR2基因的重组腺病毒载体,并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中进行功能鉴定。方法:体外合成3对大鼠siTLR2的双链DNA序列,经退火定向克隆到穿梭质粒pSES-HUS中获得pSES-HUS-siTLR2质粒,Pme I线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒进行同源重组获得pAd-siTLR2质粒,脂质体转染HEK293细胞,包装获得Ad-siTLR2腺病毒颗粒,继而感染PC12细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测3对siRNA对TLR2基因的抑制效率。结果:PCR凝胶电泳和测序结果均证实目的基因正确克隆到腺病毒载体中;Real-time PCR和Western blot结果显示:携带siTLR2的病毒颗粒能够在mRNA和蛋白水平有效抑制PC12细胞中TLR2的表达。结论:成功构建了Ad-siTLR2重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,转染PC12细胞后能有效抑制TLR2基因的表达,为进一步研究TLR2在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础。; 张赟龚敏毕杨江伟喻琴李廷玉陈洁; 关键词：TOLL样受体2 SIRNA 重组腺病毒载体免疫调节

抑制骨髓间充质干细胞内源性白介素-6分泌对氧糖剥夺损伤PC12细胞的影响: 2014年; 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)来源的白介素-6(IL-6)对神经细胞损伤的作用。方法构建大鼠沉默IL-6(siIL-6)慢病毒,感染MSCs,嘌呤霉素筛选siIL-6-MSCs稳定细胞株。Real-Time PCR和Western blotting检测细胞IL-6 mRNA和蛋白表达变化,ELISA检测siIL-6-MSCs培养上清液中IL-6分泌水平。将siIL-6-MSCs细胞与氧糖剥夺(OGD)损伤的PC12细胞分离共培养,Annexin V-FITC/PI法检测损伤细胞凋亡,Western blotting检测细胞中IL-6信号通路关键蛋白STAT3以及凋亡相关因子Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果 siIL-6干扰序列正确插入慢病毒质粒中。siIL-6慢病毒感染MSCs后,IL-6 mRNA和蛋白表达及IL-6分泌水平均显著降低。与siIL-6-MSCs分离共培养后,OGD损伤的PC12细胞凋亡增加,STAT3、Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高。结论 MSCs来源的IL-6可能通过STAT3信号通路,调节OGD损伤PC12细胞的抗凋亡作用。; 何慕兰刘晶晶谷燕李廷玉陈洁; 关键词：骨髓间充质干细胞白介素-6 氧糖剥夺 STAT3 抗凋亡

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重庆市卫生局科研项目(2009-1-41)