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五种寄生虫基因组研究进展: 2011年; 对近年来疟原虫、血吸虫、锥虫、环形泰勒虫和小泰勒虫等几种寄生虫基因组研究进展进行了简单概述,包括基因组测序、遗传图谱和物理图谱的构建、测序后结果的分析及筛选的功能基因与虫体致病的关系,并对基因组测序结果的应用前景进行了展望。以期从基因组水平上了解这几种寄生虫的生物学特性,从而为发现一些与致病性相关的基因及研制相应的抗虫药物奠定理论基础,此外分析克氏锥虫及寄生虫端粒酶测序结果有助于探究癌症的作用机制,从而为抗癌研究提供展新的思路。; 张萍刘光远田占成罗金谢俊仁; 关键词：疟原虫血吸虫锥虫环形泰勒虫

长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA的克隆与原核表达及其表达产物的酶活性分析: 2011年; 通过对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,得到了长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA序列。利用生物信息学方法对该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析,同时构建了系统发育树。采用PCR方法扩增目的基因完整的开放阅读框,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Wes-tern-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性,同时进行体外酶活性分析。结果表明,成功获得了长角血蜱酸性磷酸酶全长序列,体外高效诱导表达了约67.0 ku的重组蛋白。Western-blot表明该蛋白具有很强的反应原性,且在pH5.0时,该酶水解对硝基苯磷酸二钠的能力最强。; 张萍刘光远田占成谢俊仁罗金; 关键词：长角血蜱酸性磷酸酶原核表达酶活性分析

长角血蜱MESK基因的克隆及其生物学特性分析: 2013年; 为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了表达。48h后对细胞进行裂解,用兔抗长角血蜱阳性血清与表达出的重组蛋白进行反应,以检测重组蛋白的免疫活性。结果显示,MESK基因全长为1 426bp,包括1个1 185bp的开放阅读框。该基因含有5个N-糖基化位点、5个豆蔻酰化位点、9个酪氨酸蛋白Ⅱ激酶磷酸化位点、1个酪氨酸蛋白激酶位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、1个蛋白磷酸激酶C磷酸化位点。SDS-PAGE分析及Western-blot分析表明,表达出的重组蛋白的分子质量约为71ku,且以与兔抗长角血蜱阳性血清反应,免疫原性良好。结果表明,MESK基因可以作为一种重要的分子标记参与蜱分类的研究,在作为候选抗蜱疫苗的研究中具有重要的开发价值。; 赵波刘光远罗金张萍田占成谢俊仁田美媛王芳芳袁小松; 关键词：长角血蜱生物信息学克隆真核表达

几种蜱MLP基因的表达及其表达产物反应原性的分析: 2012年; 通过对饥饿的长角血蜱雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,以期获得长角血蜱MLP基因全长cDNA序列。设计通用引物,采用PCR方法分别从青海血蜱、麻点璃眼蜱、森林革蜱、微小牛蜱及小亚璃眼蜱中对MLP基因完整的开放阅读框进行了扩增,并将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性。结果表明,成功扩增了长角血蜱的MLP基因全长序列及多个蜱种的MLP基因开放阅读框序列,体外高效诱导表达了约39.2ku的不同蜱的MLP重组蛋白。Western-blot结果表明,长角血蜱的MLP重组蛋白具有很强的反应原性,且不同蜱的重组蛋白间具有很强的交叉反应性。; 沈辉刘光远柴慧萍田占成谢俊仁罗金张萍田美媛殷宏; 关键词：MLP 原核表达

RPS8-巴贝斯虫和泰勒虫发育遗传标记基因: 目的梨形虫（包括巴贝斯虫和泰勒虫）是一类蜱传性血液原虫,在脊椎动物,主要寄生于红细胞或淋巴细胞内。尽管经验丰富的传统分类学家可以鉴定目前已知的国内流行的梨形虫虫种,但对于一些未知梨形虫虫种,特别是形态相近,生活史相似的梨...; 田占成陈荣贵赵卫东刘光远殷宏罗建勋关贵全罗金谢俊仁沈辉田美媛郑进峰袁小松王芳芳; 关键词：梨形虫系统进化分析; 文献传递

RPS8-巴贝斯虫和泰勒虫发育遗传标记基因: 梨形虫(包括巴贝斯虫和泰勒虫)是一类蜱传性血液原虫,在脊椎动物,主要寄生于红细胞或淋巴细胞内。尽管经验丰富的传统分类学家可以鉴定目前已知的国内流行的梨形虫虫种,但对于一些未知梨形虫虫种,特别是形态相近,生活史相似的梨形虫...; 田占成陈荣责赵卫东刘光远殷宏罗建勋关贵全罗金谢俊仁沈辉田美媛郑进峰袁小松王芳芳; 关键词：梨形虫系统进化分析

长角血蜱卵泡抑素相关蛋白的定性: 2009年; 参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株卵泡抑素基因的核苷酸序列(GenBank Accession No.DQ248886)设计合成一对引物,从本实验室保藏的单克隆洁净长角血蜱饥饿成蜱中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出814bp的卵泡抑素基因,序列比对结果显示:与长角血蜱致病性Okayama株的核苷酸序列及氨基酸序列一致性分别为97.8%和99%,将其亚克隆到表达载体pGEX-4T-1中进行表达,GST融合重组蛋白预期分子量为57kD。表达重组蛋白经MagneGSTTM蛋白纯化系统纯化后作为抗原分别与抗不同发育阶段长角血蜱(卵、幼蜱、若蜱、成蜱)多克隆抗体作为一抗进行免疫印迹,结果表明:与长角血蜱卵制备的多克隆抗体有很强的免疫反应,而与其他发育阶段(幼蜱、若蜱、成蜱)饥饿长角血蜱制备的多克隆抗体反应性很弱。以上结果表明:长角血蜱卵泡抑素蛋白在长角血蜱产卵及卵成熟发育时期的表达水平较其他发育阶段(幼蜱、若蜱、成蜱)的蛋白表达水平高。; 田占成刘光远殷宏罗建勋谢俊仁; 关键词：长角血蜱卵泡抑素

长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达被引量：3: 2012年; 根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达纯化后,进行Western-blot试验鉴定其生物学活性。结果,长角血蜱4D8基因的氨基酸序列与青海血蜱、肩突硬蜱的同源性分别为90%、81%。表达的重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白。Western-blot试验证明,该重组蛋白能很好地识别兔抗长角血蜱全蜱阳性血清。结果表明,4D8基因作为一种重要的分子标记基因在蜱的流行病学调查方面有着重要的价值,同时作为潜在的候选抗原基因在疫苗的研究方面也有重要意义。; 罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛; 关键词：长角血蜱克隆原核表达

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甘肃省自然科学基金(096RJZA128)