国家教育部博士点基金(20060487024)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：沈关心朱慧芬雷萍沈昕刘静更多>>
- 相关机构：华中科技大学陕西省人民医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家高技术研究发展计划湖北省“十一五”科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 次级淋巴组织趋化因子浓度梯度抑制肿瘤细胞免疫逃逸被引量：4
- 2007年
- 目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对肿瘤细胞免疫逃逸的影响。方法根据SLC浓度梯度,实验分6组;流式细胞术检测肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子的表达、肿瘤细胞凋亡,Western blot检测肿瘤细胞胞内BCL-2表达,ELISA检测肿瘤细胞培养上清中生长转化因子β(TGF-β)水平。结果在一定浓度范围内,随SLC浓度增加,肿瘤细胞的HLA-Ⅰ类分子表达增高,肿瘤细胞凋亡增多;BCL-2表达增高,而肿瘤细胞TGF-β分泌水平降低。结论SLC具有抑制肿瘤细胞免疫逃逸的作用。
- 吴砂袁晓梅朱慧芬沈关心
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子肿瘤细胞免疫逃逸
- 抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定
- 2009年
- 目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白。方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因。以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfRscFv-SLC融合蛋白的表达。SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性。FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性。结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfRscFv-Linker-SLC序列,表明pET28a+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功。IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41kD的条带,符合scFv-SLC理论值。FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfRscFv有所提高。结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合。
- 潘兴飞刘静沈昕许海霞姚欣欣陈广生胡军朱慧芬雷萍沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体次级淋巴组织趋化因子融合蛋白
- 抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达
- 2009年
- 目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达。方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamHⅠ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性。结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合。结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性。
- 代维刘静黄鹤文雪袁晓梅雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体重叠延伸PCR
- 抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体(mAb)体外抗瘤效应。方法:采用CFSE染色、PI-AnnexinⅤ染色和PI染色,通过流式细胞术分析抗人TfR mAb对高表达的人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡和周期的影响;通过MTT法检测抗人TfR mAb联合化疗药物对HepG2和MCF-7细胞增殖的抑制作用。结果:抗人TfRmAb能抑制HepG2和MCF-7细胞的增殖,并诱导其凋亡和S期阻滞;与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结论:抗人TfR mAb具有良好的体外抗瘤效应。
- 沈昕邢薇何峰容李黎刘静朱慧芬雷萍沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单克隆抗体
- 抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化大肠杆菌TG1,阳性菌经IPTG诱导表达,FCM检测bsFv与K562,HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果:酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功;SDS-PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致;FCM结果证明bsFv可与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合,且结合的阳性率较scFv有所提高。结论:成功构建了抗转TfR的bsFv,且能与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合。
- 肖代雯朱慧芬沈昕邢薇黄宇雷萍黄韬王国斌沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体双价抗体
