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骨形态发生蛋白-2基因活化纳米骨浆修复兔桡骨缺损的实验研究被引量：5: 2007年; 目的观察骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因活化纳米骨浆在损伤部位的局部成骨基因表达和骨缺损重建修复效果。方法新西兰白兔54只，其中48只实验动物随机分成三组（每组16只32侧），制成双侧桡骨中段15mm骨缺损模型。A组：注入hBMP-2＋纳米骨浆；B组：注入空白质粒＋纳米骨浆；C组：注入纳米骨浆。另6只动物制作左桡骨中段骨缺损，不植入材料，作为空白对照。术后4、8和12周取材行影像学检查、组织学观察、分子生物学检测和生物力学检测。结果术后12周A、B和C组骨缺损均修复，A组骨缺损处有明显BMP-2的mRNA和蛋白质表达，在ALP水平、成骨速度、新生骨量及新生骨力学强度等方面均明显优于B、C两组（P〈0．05）。空白对照组骨缺损无愈合。结论纳米骨浆复合BMP-2质粒后，具有一定骨诱导作用，植入体内后成骨速度、质量及力学强度较单纯的纳米骨浆明显增强，能够有效修复骨缺损。; 田晓滨孙立杨述华胡如印张宇坤傅德皓; 关键词：纳米材料基因表达骨形态发生蛋白类骨缺损

克隆并构建人骨形成蛋白-2真核表达载体: 目的:探讨构建人骨形成蛋白2(human bone morphgenetic protein 2,hBMP-2)真核表达载体的方法。方法:由人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用RT-PCR方法扩增获得人BMP-2基因c...; 田晓滨孙立杨述华; 关键词：骨形成蛋白-2 真核表达载体基因克隆; 文献传递

克隆并构建人骨形成蛋白2真核表达载体被引量：11: 2006年; 目的探讨构建人骨形成蛋白2(humanbonemorphgeneticprotein2,hBMP-2)真核表达载体的方法。方法由人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用RT-PCR方法扩增获得hBMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM-T-hBMP-2重组质粒载体,转化到大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,利用限制性酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒。分别用EcoR和Not双酶切pGEM-T-hBMP-2质粒和pcDNA3.1(+)真核表达载体,将克隆载体中hBMP基因重组到pcDNA3.1(+)真核表达载体,提取质粒作酶切电泳、PCR鉴定及DNA测序。结果人骨肉瘤细胞中经RT-PCR得到1.2kbp的hBMP-2扩增条带,重组质粒pGEM-T-hBMP-2经酶切电泳可见1.2kbp的hBMP-2条带和4.0kbp的载体片断;pcDNA3.1-hBMP-2质粒经酶切电泳可见1.2kbp的hBMP-2条带和5.0kbp的载体片断,重组质粒酶谱分析与预期一致;DNA序列分析测序结果校对后经BLAST分析,表明核酸序列与GeneBank中和hBMP-2的mRNA序列完全吻合。结论通过此方法能成功克隆获得hBMP-2基因,并构建其真核表达载体。; 田晓滨孙立杨述华; 关键词：骨形成蛋白2 真核表达载体基因克隆

人BMP2及VEGF双基因共表达腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定被引量：1: 2006年; 目的构建人骨形态发生蛋白2(BM P 2)与血管内皮生长因子(VEGF)双基因腺病毒穿梭质粒。方法对pCU-CAGG S-hVEGF 165的目的基因亚克隆并引入新的酶切位点,定向连入腺病毒穿梭载体pShu ttle-CM V,将质粒pcDNA 3.1-BM P 2及pIRES酶切后,将BM P 2和IRES片段定向连入pShu ttle-CM V-hVEGF 165,构建可同时表达两个目的基因重组质粒pShu ttle-CM V-hBM P 2-IRES-hVEGF 165,进行酶切分析及序列测定。结果酶切分析及核酸序列测定证实重组质粒构建正确。结论成功构建了BM P 2及VEGF双基因腺病毒穿梭质粒;为联合基因治疗骨缺损的研究奠定了基础。; 孙立田晓滨张宇坤郜勇杨述华; 关键词：共表达

不同方法显像骨组织微血管的对比研究: [目的]比较血管墨汁灌注-Van Gieson(V G)复合染色法与其它组织染色法在组织切片血管显像中的优缺点,为骨组织血管化检测寻找一种简单直观的方法。[方法]青山羊一侧股动脉内灌注10%中华墨汁、10%甲醛和20%甘...; 简月奎田晓滨; 关键词：血管墨汁; 文献传递

不同方法显像骨组织微血管的对比研究被引量：5: 2008年; [目的]比较血管墨汁灌注-Van Gieson(VG)复合染色法与其他组织染色法在组织切片血管显像中的优缺点,为骨组织血管化检测寻找一种简单直观的方法。[方法]青山羊一侧股动脉内灌注10%中华墨汁、10%甲醛和20%甘露醇混合液(体积比7:2:1)至股静脉流出液呈黑色。取下胫骨,10%甲醛溶液固定,EDTA脱钙,香柏油浸泡,制成50～100μm厚切片,用复合墨汁灌注-VG染色法观察山羊胫骨微血管。[结果]复合墨汁灌注-VG染色法既可清楚显示微血管的数量、大小、分支和吻合,还能清楚显示微血管与周围组织的关系。较单纯墨汁灌注厚切片、HE、Masson和Weigert间苯二酚-碱性品红染色VG复染法显示微血管清楚。[结论]复合墨汁灌注-VG染色法对微血管显像较清楚,且还可清楚显示微血管与周围组织的关系,可在骨组织工程血管化检测中试用。; 简月奎吴雪晖田晓滨赵筑川李波李起鸿; 关键词：血管墨汁 VAN

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贵州省科学技术基金(20052053)