转基因生物新品种培育专项(2008ZX08007-002)
- 作品数：9 被引量：53H指数：4
- 相关作者：严云勤佟慧丽李树峰李光鹏昝林森更多>>
- 相关机构：东北农业大学内蒙古大学国家肉牛改良中心更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家高技术研究发展计划“十一五”科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 肌肉特异性基因启动子的上游转录调控元件研究进展被引量：6
- 2012年
- 真核生物启动子位于基因5’端上游转录起始位点附近,是包含核心启动子以及上游转录调控元件的一段DNA序列,这些转录调控元件控制着基因表达的强度和特异性。肌肉特异性启动子的上游调控元件种类、数量和排列顺序决定着基因在肌肉中的特异性表达。深入研究肌肉启动子的上游调控元件,可以进一步了解肌肉基因表达机制,从而为肌肉性状的改良、增殖分化的机理和疾病的基因治疗等研究提供重要依据。该文回顾了近年来肌肉特异性启动子研究领域中的新发现,包括肌肉特异性启动子转录调控元件的分子机制、建立人工合成肌肉启动子的方法及应用,并探讨该领域中急需解决的问题和发展前景。
- 赵丹丹刘聪聪贾明玉杨悦叶枫严云勤
- 关键词：转录调控元件
- A-FABP基因5’侧翼区多态性及其与秦川牛肉用性状的关联分析
- 本研究通过对牛脂肪型脂肪酸结合蛋白基因5’侧翼区的1441bp序列进行SNPs检测,结果在转录起始位点上游-389bp处发现T→C突变,进而利用PCR-SSCP的方法在秦川牛、南阳牛、鲁西牛、夏南牛和郏县红牛共5个牛群体...
- 刘艳妍昝林森王洪宝季舒涵樊月圆
- 关键词：A-FABP基因PCR-SSCP遗传多态性肉用性状
- 文献传递
- 肌动蛋白解聚因子Cofilin在小鼠卵母细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 肌动蛋白解聚因子通过切断微丝,增加G-actin的浓度,从而促进细胞骨架的重组,影响细胞的迁移、增殖、凋亡等重要的生理功能。文章通过原位杂交技术在小鼠卵巢组织切片中观察到Cofilin的mRNA在卵母细胞中存在强表达,应用免疫荧光技术检测到Cofilin蛋白主要定位于GV期卵母细胞核内染色体附近,从而推测Cofilin可能与卵母细胞中染色质的凝集、移动及其他功能有关,参与调节哺乳动物卵母细胞的发育。
- 倪华李玉春王清泉李永旺
- 关键词：肌动蛋白解聚因子卵母细胞原位杂交免疫荧光技术
- 牛MyoG基因启动子的克隆及功能的初步分析被引量：26
- 2012年
- 本研究旨在比较日本和牛MyoG基因的不同长度片段启动子的活性强弱并初步探讨其中的机制。根据GenBank已公布的牛MyoG基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增日本和牛MyoG基因的一系列启动子缺失序列,构建重组克隆载体pMD18-T-MyoGpro,对阳性克隆进行限制性酶切鉴定、测序及生物信息学分析,进而构建一系列启动子缺失片段的pGL3-MyoGpro双荧光素酶表达载体,转染牛肌源干细胞(MDSCs)和牛胎儿成纤维细胞,并进行双报告基因活性检测。结果表明,日本和牛MyoG基因的166～2 125bp启动子都能不同程度的启动双荧光素酶报告基因在牛肌源干细胞中的表达,且具有肌肉特异性。通过生物信息学分析得知日本和牛MyoG启动子序列中有1个TATA盒,15个E-box,并可能含有MyoD、MEF2、MEF3、MTBF、TEF1、PRDF、Sp1、多个SRF、ERE、GRE及多个Oct-1等转录因子调控结合位点,本试验通过比较不同长度启动子片段的活性并结合对上述转录因子的分析,认为这些转录因子可能对启动子活性起着重要的调控作用。对牛MyoG基因启动子的克隆与功能和序列分析为进一步研究MyoG基因的表达调控奠定了基础。
- 王秋华曹允考李树峰佟慧丽兴孝友李光鹏严云勤
- 关键词：MYOG基因启动子序列转染生物信息学分析
- pIRES2-EGFP-MyoG真核表达载体的构建和鉴定
- 2010年
- 为了构建能够表达日本和牛生肌素(myogenin,MyoG)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP-MyoG,试验从日本和牛成纤维细胞基因组中扩增出MyoG基因,插到带有EGFP和内部核糖体转入位点(IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,经酶切鉴定正确后转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞,用RT-PCR和Western-blot检测MyoG基因的表达情况。结果表明:真核表达载体pIRES-EGFP-MyoG构建成功,且在鲁西黄牛胎儿成纤维细胞中得到了有效表达。说明真核表达载体中的MyoG能够在鲁西黄牛胎儿成纤维细胞中成功表达。
- 徐婷婷李树峰佟慧丽冯霞卢丽严云勤
- 关键词：日本和牛MYOG转染PIRES2-EGFP
- 鲁西黄牛成纤维细胞MSTN基因敲除研究被引量：6
- 2010年
- 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)又称GDF-8,属于转化生长因子超家族,是在骨骼肌中广泛表达的一类糖蛋白。试验根据已知牛MSTN基因的序列设计引物,通过PCR技术克隆获得同源长短臂,利用pPNT质粒为骨架构建含有loxP-Neo-loxP结构的打靶载体,然后利用脂质体转染鲁西黄牛成纤维细胞,G418和GANC双向筛选,收集打靶细胞,PCR法进行鉴定,初步确定筛选到的细胞为MSTN基因敲除细胞,为后续试验获得MSTN基因敲除牛奠定了基础。
- 冯霞李树峰佟慧丽徐婷婷卢丽严云勤李光鹏
- 关键词：鲁西黄牛肌肉生长抑制素打靶载体基因敲除
- 诱导小鼠胚胎干细胞在体外分化为骨骼肌细胞的实验研究
- 2013年
- 小鼠胚胎干细胞是从胚泡未分化的内部细胞团中得到的干细胞,它在体外培养的环境中具有无限增殖、自我更新以及多向分化的特性。将小鼠胚胎干细胞在体外诱导分化为肌肉细胞,并且利用这些分化得来的肌肉细胞治疗肌肉退行性疾病,是干细胞研究领域的热点。该实验的目的在于筛选小鼠胚胎干细胞向骨骼肌细胞定向分化的实验条件,有效地将体外单层贴壁培养的小鼠胚胎干细胞诱导分化成骨骼肌细胞。最终发现,10-8mol/L维甲酸(retinoid acid,RA)+0.5%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组诱导小鼠胚胎干细胞在体外分化成骨骼肌前体细胞的效率最高,分化得到的骨骼肌前体细胞经进一步纯化,能分化为多核的肌管。该实验为治疗肌肉退行性疾病提供了细胞来源,也为研究小鼠胚胎干细胞分化为骨骼肌细胞的机制提供了有利的条件。
- 叶枫佟慧丽杜巍严云勤
- 关键词：小鼠胚胎干细胞骨骼肌细胞分化
- 秦川牛IRS-1基因多态性与体尺和肉质性状的相关性被引量：4
- 2012年
- 旨在研究秦川牛IRS-1基因外显子的多态性,及其与秦川牛体尺和肉质性状的相关性。选取384头同等饲养条件下的18～24月龄健康秦川牛母牛为研究对象,采用PCR-SSCP技术结合DNA测序技术检测IRS-1基因外显子上存在的SNPs位点,并将其与秦川牛体尺和肉质性状进行关联分析。经DNA测序发现,在IRS-1基因外显子的2 346(B1位点)和2 394bp处(B2位点)分别发生了G→A和C→G突变,经分析发现,分别为氨基酸序列第782处Glu和798处Leu的同义突变。通过SSCP带型分析分别出现CC、CD和AA、AB 2种基因型,均未检测出第3种纯合基因型;卡方检验显示,B1位点在所检测牛群中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而B2位点则处于Hardy-Weinberg极度不平衡状态(P<0.01);且B1处CC基因型为优势基因型,C为优势等位基因,处于低度多态状态;B2处基因型AA为优势基因型,A为优势等位基因,处于低度多态状态;关联分析表明,B1位点不同基因型个体间在体斜长、腰角宽、胸围和眼肌面积方面差异显著(P<0.05),B2位点在腰角宽、胸深和背膘厚方面差异显著(P<0.05)。将2个突变位点合并基因型进行单倍型分析发现,双杂合基因型个体(ABCD)除背膘厚和肌间脂肪含量外其他所分析的各性状均显著高于其他基因型组合,且多标记位点的组合效应值高于单标记位点。结果提示,IRS-1基因对秦川牛体尺及部分肉质性状有显著的影响,可以作为秦川肉牛新品系培育早期选择的候选基因,其中组合ABCD可能是影响秦川牛体尺和胴体性状的最佳基因型组合。
- 马向辉昝林森高建斌杨宁朱光星成功王洪宝郝瑞杰付常振姜碧杰詹小立白银萍
- 关键词：PCR-SSCP多态性合并基因型
- A-FABP基因5′侧翼区多态性及其与秦川牛肉用性状的关联分析被引量：12
- 2010年
- 本研究通过对牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因5′侧翼区的1441bp序列进行SNPs检测,结果在转录起始位点上游-389bp处发现T→C突变,进而利用PCR-SSCP的方法在秦川牛、南阳牛、鲁西牛、夏南牛和郏县红牛共5个牛群体中进行个体基因型分析,结果发现3种基因型,分别命名为AA、AB和BB。χ2检验表明,除秦川牛外其它各品种在该基因座均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。基因型与秦川牛肉用性状的关联分析发现,AB基因型个体的宰前活体质量、胴体质量、含水率均显著低于AA和BB基因型个体(P<0.05),AA和BB基因型个体之间差异不显著;BB基因型个体大理石花纹等级极显著优于AB基因型个体(P<0.01),显著优于AA基因型个体(P<0.05)。推测这一位点可能是影响牛肉大理石花纹及含水率的主效QTL或与之紧密连锁,可尝试做为肉牛肉质性状的候选分子标记。
- 刘艳妍昝林森王洪宝季舒涵樊月圆
- 关键词：A-FABP基因PCR-SSCP遗传多态性肉用性状
- 克隆牛与转基因克隆牛研究与应用
- 体细胞克隆技术(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)已在牛、羊、猪、马、骡、骆驼等多种家畜中获得成功。按照出生健康后代和总操作卵之间的比值计算,各种动物的总克隆效率分别是牛1%～5%,绵...
- 白春玲张立程磊苏广华吴侠魏著英李光鹏
- 文献传递
