辽宁省科学技术计划项目(2011415052-3)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：马楠祁馨卉姜又红崔慧霞李妍更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Smad3 siRNA对树突状细胞疫苗抗乳腺癌作用的影响
- 2013年
- 目的:研究在通过siRNA(small interference,RNA)干扰技术沉默外周单核细胞来源的树突细胞(dentritic cells,DC)的Smad3,阻断TGF-β1/Smad3传导通路,并在外源性TGF-β1(transforming growth factorbeta-1,TGF-β1)的作用下对树突状细胞疫苗的影响。方法:针对设计Smad3特异性siRNA利用RNAIMAX转入DC细胞并用Westen-blot法检测Smad3的沉默效果。应用重组人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(hmGM-CSF)和重组人白介素-4(hmIL-4),刺激DC成熟。利用反复冻融的方法提取乳腺癌细胞MCF-7的全抗原。实验分组:Control-DC-冻融抗原(Ag)组、TGF-β1-Control-DC-冻融抗原(Ag)组、TGF-β1-Negtive siRNA-Smad3-DC-冻融抗原(Ag)组和TGF-β1-siRNA-Smad3-DC-冻融抗原(Ag)组。流式检测各组DC成熟表型的变化,ELISA检测各组DC上清IL-12的水平,CCK-8法检测DC诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀瘤活性。结果:TGF-β1-siRNA-Smad3-DC-冻融抗原(Ag)组表面成熟标志CD80、CD83、CD86、HLA-DR(P<0.05)及IL-12分泌水平(P<0.05)明显高于TGF-β1-Control-DC-冻融抗原(Ag)组和TGF-β1-Negtive siRNA-Smad3-冻融抗原(Ag)-DC组。且TGF-βI-siRNA-Smad3-DC-冻融抗原(Ag)组诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀瘤活性较TGF-β1-Control-DC-冻融抗原(Ag)组、TGF-β1-Negtive siRNA-Smad3-DC-冻融抗原(Ag)组明显增强。结论:通过沉默DC的Smad3的方法,阻断TGF-β1/Smad3传导通路,能逆转TGF-β1对DC分化发育和递呈乳腺癌相关抗原的作用。
- 马楠祁馨卉崔慧霞李妍刘云鹏姜又红
- 关键词：树突状细胞TGF-Β1SMAD3肿瘤疫苗
- Smad3小干扰RNA在转化生长因子β_1作用下对树突状细胞成熟及功能的影响被引量：3
- 2012年
- 目的研究通过RNA干扰技术阻断外周单核细胞来源的树突细胞(DC)内的Smad3,并在转化生长因子β(1TGF-β1)作用下对DC的成熟和免疫抑制作用的影响。方法设计针对Smad3特异性小干扰RNA(siRNA),利用RNAiMAX转入DC,并用RT-PCR检测转染效果。实验分Control-DC组、TGF-β1-Control-DC组、TGF-β1-Negative siRNA-Smad3 DC组和TGF-β1-siRNA-Smad3 DC组。流式检测各组DC成熟表型的变化,ELISA检测各组DC上清白细胞介素12(IL-12)的水平,CCK-8法检测DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果 TGF-β1-siRNA-Smad3 DC组表面成熟标志CD80、CD83、CD86、HLA-DR及IL-12分泌水平明显高于TGF-β1-Control-DC组和TGF-β1-Negative siRNA-Smad3 DC组(P<0.05),且TGF-β1-Negative siRNA-Smad3 DC组刺激同种异体T细胞增殖的能力显著增强。结论通过阻断DC的Smad3表达,可以逆转TGF-β1对DC成熟和免疫功能的抑制。
- 马楠祁馨卉崔慧霞李妍刘云鹏姜又红
- 关键词：SMAD3肿瘤疫苗
- GPC3基因重组慢病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达被引量：2
- 2013年
- 目的构建含有GPC3的shRNA序列慢病毒表达载体并转染肝癌细胞,观察其转染效率及在肝癌细胞中的表达。方法应用重组DNA技术,将设计好的GPC3基因特异性siRNA序列构建至慢病毒表达载体pGLV3-GFP上,并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用RT-PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染HepG2细胞后GPC3基因的表达情况。结果慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×108TU/mL,转染后,GPC3基因表达明显降低。结论成功构建GPC3基因的shRNA慢病毒载体,所介导的RNAi能有效抑制靶细胞中GPC3基因的表达。
- 祁馨卉崔慧霞马楠姜又红
- 关键词：GPC3RNA干扰慢病毒载体
