国家自然科学基金(30660227)
- 作品数：18 被引量：68H指数：5
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- 相关机构：宁夏医科大学佛山市妇幼保健院沭阳县人民医院更多>>
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- 内毒素血症小鼠肺组织损伤及血清炎症因子变化的研究被引量：4
- 2010年
- 目的建立内毒素血症小鼠模型,观察模型小鼠肺损伤指标及血清炎症因子的变化,以用于抗内毒素药物研究。方法 BALB/c小鼠分为正常对照组、LPS模型组,每组再分为2、6、12、24h四个时间点组,每组10只。LPS 7mg·kg-1尾静脉注射建立内毒素血症小鼠模型,记录一般状况、肉眼及光镜观察肺组织的病理变化;检测肺水含量;放免法检测血清TNF-α含量;硝酸还原酶法检测血清NO含量。结果内毒素肺损伤模型组小鼠在给予LPS后30min即有症状出现,至24h未见缓解;肉眼与光镜观察肺脏病理改变,发现6h起肺脏病理改变明显可见并逐渐加重,延至24h亦未见减轻;模型鼠肺组织W/D值显著升高;血清TNF-α和NO值均在给予LPS后2h即显著升高,并分别在6h和12h达到高峰,直至24h仍明显高于正常对照组(P<0.01)。结论尾静脉注射LPS 7mg·kg-1可建立较为理想的急性肺损伤动物模型;炎症介质的失控性表达是内毒素引起急性肺损伤的重要机制之一。
- 梁锦屏王琳琳黄菱郭凤英周娅
- 关键词：内毒素急性肺损伤TNF-Α
- 槐定碱对内毒素肝损伤小鼠ERK和TNF-α表达的干预作用被引量：4
- 2010年
- 目的观察槐定碱对急性内毒素肝损伤小鼠的干预效应及对磷酸化ERK(pERK)、TNF-α表达的影响。方法以内毒素肝损伤小鼠为实验对象,记录各组小鼠一般情况,肉眼及HE染色光镜观察小鼠肝组织病理改变,免疫组化检测肝组织中pERK的表达与分布,放射免疫法检测血清TNF-α。结果槐定碱3个剂量干预组小鼠一般情况改善,肝组织病理改变减轻,中、高剂量组肝组织中pERK核移位现象及pERK阳性细胞数较LPS组显著减少(P<0.01),与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);中、高剂量组小鼠血清TNF-α水平均显著低于LPS组(P<0.01),而与正常对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论槐定碱干预对急性内毒素肝损伤小鼠具有明显保护作用,其机制与抑制肝组织中pERK及血清TNF-α的表达有关。
- 高晓峰周娅黄菱赵建宁王宁萍
- 关键词：槐定碱TNF-Α
- 槐定碱2种加药方式对LPS激活的RAW264.7巨噬细胞TLR4-JNK通路的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:观察槐定碱预处理和预混合2种给药方式对脂多糖(LPS)激活的RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)及下游c-jun氨基末端激酶(JNK)、c-jun表达的影响,探讨槐定碱抗LPS的分子机制。方法:将RAW264.7细胞分为5组:RAW264.7细胞对照组加入未加血清的DMEM培养基;LPS组加含100μg/L LPS的DMEM培养基;槐定碱药物组加含31.25 mg/L槐定碱的DMEM培养基;槐定碱预处理组以含31.25 mg/L槐定碱的DMEM培养基孵育细胞24 h弃去槐定碱,而后加入100μg/L LPS的DMEM培养基继续孵育细胞;槐定碱预混合组以终浓度为31.25 mg/L槐定碱与100μg/L LPS预先混合1 h的DMEM培养基孵育细胞。上述5组处理完毕后于5、30、60、120 min收集细胞,以RT-PCR技术检测RAW264.7细胞TLR4、JNK、c-jun mRNA表达,免疫细胞化学和Western blot检测细胞c-jun的蛋白的表达。结果:RAW264.7细胞对照组与槐定碱药物组各项指标差异无统计学意义(P>0.05);LPS组RAW264.7细胞的TLR4、JNK、c-jun mRNA及c-jun蛋白表达均显著高于RAW264.7细胞对照组(P<0.01或P<0.05),但各指标显著升高的时间点有所不同;槐定碱预处理组与槐定碱预混合组RAW264.7细胞TLR4、JNK、c-jun mRNA及c-jun蛋白表达均显著低于LPS组(P<0.01或P<0.05),但各指标显著降低的时间点有所不同。结论:槐定碱可通过调控TLR4-JNK信号转导通路发挥抗LPS作用,其不同加药方式显示的效应表明其作用可能是多环节的。
- 刘静李宾周娅
- 关键词：槐定碱C-JUN氨基末端激酶
- 槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞表达NF-κB的影响被引量：2
- 2011年
- 目的观察槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65、TNF-α表达的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW264.7细胞,分为空白对照组、槐定碱预处理对照组、LPS模型组、槐定碱预处理+LPS组。各组处理完毕后5、30、60、120min,分别获取细胞与细胞培养液。Western Blot和RT-PCR分别检测细胞NF-κB p65蛋白与mRNA表达,放免法检测细胞培养液TNF-α含量。结果单独槐定碱对NF-κB p65以及TNF-α表达无影响;LPS模型组各时间点NF-κB p65 mRNA与蛋白以及TNF-α表达均显著高于空白对照组(P<0.01),且随LPS刺激时间延长而持续升高,至120min未见下降;槐定碱预处理+LPS组NF-κB p65mRNA与蛋白及其下游TNF-α表达均较同时间点LPS模型组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论槐定碱预处理可通过抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的NF-κB p65表达及TNF-α分泌发挥抗炎作用。
- 杨峰王艳荣周娅
- 关键词：槐定碱RAW264.7巨噬细胞NF-ΚBP65
- 内毒素致肝损伤小鼠模型相关指标的动态变化被引量：4
- 2007年
- 目的动态观察内毒素致小鼠肝损伤后不同时间点相关指标的变化特点。方法以腹腔注射内毒素(E.coli O55:B5)10mg/kg制备内毒素肝损伤小鼠模型,分别在给予LPS后2、6、12、24小时记录一般状况并取材,肉眼及光镜观察肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,放射免疫分析法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果内毒素肝损伤模型组小鼠在给予LPS后30分钟即有症状出现;6小时光镜观察出现明显肝组织病理损伤,12小时损害加重并延至24小时;血清ALT值在12小时达到高峰;血清TNF-α在2小时即达高峰,6小时开始缓慢下降,但直至24小时仍较同时间点正常对照组显著增高(P<0.01);血清IL-1β则在给予LPS后6小时明显升高(P<0.05),12小时达高峰(P<0.01),至24小时即与对照组无显著性差异。结论本模型的肝损伤指标及相关炎症因子的动态变化数据可用于抗内毒素肝损伤药物研究。
- 梁锦屏王琳琳周娅
- 关键词：内毒素脂多糖肝损伤ALTIL-1Β
- 槐定碱与TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响被引量：5
- 2012年
- 目的:研究槐定碱及TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响,探讨其抗内毒素的药理机制。方法:培养RAW264.7巨噬细胞,分为5组:空白对照组,LPS模型组,槐定碱+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组,各组分别于处理完毕后120 min时收集细胞及细胞培养液。West-ern blot检测TLR4蛋白表达,免疫细胞化学检测NF-κB蛋白的分布与表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB,TNF-αmRNA表达,放射免疫分析法检测细胞培养液中TNF-α含量。结果:与LPS模型组比较,槐定碱+LPS组TLR4蛋白,NF-κBmRNA与NF-κB入核率,TNF-αmRNA及培养液中TNF-α含量均显著降低(P<0.01);TLR4/MD-2阻断剂+LPS组与TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组NF-κB mRNA及NF-κB入核率,TNF-αmRNA及培养液中TNF-α含量均低于LPS模型组(P<0.01),接近空白对照组,但2组之间上述各值的差异均无统计学意义。结论:TLR4/MD-2可能是槐定碱作用的靶位之一,槐定碱抑制TLR4-NF-κB-TNF-α通路活化可能是其抗内毒素机制之一。
- 王艳荣杨峰刘静周娅
- 关键词：槐定碱LPS
- 槐定碱抑制内毒素血症小鼠肺组织LPS模式识别受体的表达被引量：7
- 2012年
- 目的:探讨槐定碱对内毒素血症小鼠肺组织LPS识别受体LBP、CD14、TLR4及下游炎症介质TNF-α的影响及意义。方法:BALB/c小鼠尾静脉注射LPS制备内毒素血症小鼠模型,注射LPS后30分钟给予槐定碱高(12 mg/kg)、中(6mg/kg)、低(3 mg/kg)三个剂量干预,并分别在2、6、12、24小时各时间点取血液和肺组织,肉眼及光镜观察肺组织的病理变化;以肺湿/干重(W/D)比检测肺水含量;用RT-PCR检测肺组织中LBP、CD14、TLR4的mRNA表达;Western blot检测肺组织TLR4蛋白的表达;放免法检测血清TNF-α含量。结果:与内毒素血症模型组小鼠肺组织比较,槐定碱三个剂量干预组均不同程度减轻内毒素血症小鼠肺组织病理损伤,降低肺组织W/D值,并且显著下调同时间点模型小鼠肺组织LBP、CD14、TLR4的mRNA表达及TLR4蛋白的表达;槐定碱高、中剂量干预可显著抑制模型小鼠血清TNF-α水平(P<0.01或P<0.05)。结论:槐定碱对内毒素血症小鼠肺组织的保护作用机制可能与下调LPS识别受体LBP、CD14、TLR4表达,抑制下游炎症因子TNF-α的释放有关。
- 梁锦屏谢建宁王大军周娅
- 关键词：槐定碱内毒素LBPCD14
- 槐定碱对内毒素肺损伤小鼠p38MAPK的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨内毒素(细菌脂多糖,LPS)肺损伤小鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的变化以及槐定碱对其影响。方法 60只BALB/c小鼠,除正常对照组、槐定碱对照组外,内毒素肺损伤模型组(LPS模型组)、槐定碱治疗高(12mg.kg-1)、中(6mg.kg-1)、低(3mg.kg-1)剂量组的BALB/c小鼠均尾静脉注射LPS制备急性肺损伤模型,注射后30min再分别腹腔注射生理盐水或槐定碱12、6、3mg.kg-1,各组均处理后6h取材,肉眼及光镜观察肺组织的病理变化,免疫组化SP法检测肺组织中总p38、磷酸化p38的表达,硝酸还原酶法检测血清NO含量。结果 LPS模型组肺脏病理改变明显加重,肺组织总P38和磷酸化p38的表达均增多和增强(P<0.01);血清NO显著升高(P<0.01);槐定碱三个剂量治疗组病理损伤均不同程度改善,总P38表达与LPS组比较差异无统计学意义,但磷酸化p38表达均显著小于模型组(P<0.01),血清NO含量显著低于LPS模型组(P<0.01)。结论 p38MAPK参与了内毒素肺损伤的发病过程,槐定碱的抗内毒素肺损伤机制可能与下调p38MAPK的表达,抑制NO的释放有关。
- 韩怀钦梁锦屏周娅
- 关键词：槐定碱内毒素急性肺损伤P38MAPK
- 槐定碱抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子分泌及机制被引量：19
- 2015年
- 目的观察槐定碱对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)时,对Toll样受体4(TLR4)、c-Jun表达的影响,探讨槐定碱抗LPS分子机制。方法培养RAW264.7细胞,实验分为4组:巨噬细胞对照组,以无血清DMEM孵育细胞;槐定碱处理组,以含31.25 mg/L槐定碱DMEM孵育细胞;LPS组及LPS刺激后槐定碱处理组,分别以浓度为100μg/L LPS DMEM孵育细胞60 min后弃去LPS,而后分别加入无血清DMEM或31.25 mg/L槐定碱DMEM继续培养。以上4组分别于处理完毕后5、30、60、120 min收集细胞及培养液。采用反转录PCR检测RAW264.7细胞TLR4、c-Jun mRNA的表达,Western blot法及免疫细胞化学技术检测RAW264.7细胞c-Jun蛋白的表达;ELISA检测培养液中TNF-α、IL-1β分泌量。结果槐定碱处理组与巨噬细胞对照组各指标间未见显著性差异;LPS组各时间点RAW264.7细胞的TLR4、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白表达,培养液中TNF-α、IL-1β分泌量均显著高于巨噬细胞对照组,并维持至120 min未见下降;LPS刺激后槐定碱处理组显著抑制LPS刺激的RAW264.7细胞TLR4、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白表达,并减少TNF-α、IL-1β分泌。结论槐定碱通过抑制TLR4及c-Jun表达,下调LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β的分泌。
- 刘静刘瑛李宾周娅
- 关键词：槐定碱脂多糖RAW264.7细胞C-JUN
- 槐定碱对内毒素血症小鼠肺组织p38MAPK/AP-1表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的观察槐定碱对内毒素血症小鼠p38MAPK信号分子、转录因子激活蛋白1(AP-1)及下游炎症因子TNF-α影响,探讨槐定碱抗内毒素的药理机制。方法 BALB/c小鼠尾静脉注射LPS(7mg.kg-1)制备内毒素血症小鼠模型,30min后腹腔注射槐定碱,剂量分别为12、6和3mg.kg-1,6h后取血和肺组织。免疫印迹法(Western-blot)检测肺组织总p38MAPK、磷酸化p38 MAPK蛋白表达,RT-PCR检测肺组织c-jun和c-fos mRNA表达,放免法检测血清中TNF-α含量。结果与内毒素血症模型组比较,三个剂量槐定碱干预组肺组织中磷酸化p38蛋白表达显著降低(P<0.01或P<0.05),c-jun和c-fos mRNA表达显著减少(P<0.01或P<0.05),血清中TNF-α含量明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论槐定碱可抑制肺组织中p38MAPK的磷酸化,下调c-jun和c-fos mRNA的表达,抑制下游炎症因子TNF-α表达。
- 梁锦屏韩怀钦周娅
- 关键词：槐定碱P38MAPKC-JUNC-FOS
