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重组人卵透明带蛋白及其多克隆抗体对精子-透明带结合的影响被引量：1: 2006年; 为了探讨毕赤酵母表达的重组人卵透明带ZP3蛋白(recombinant human zona pellucida-3 protein,rhZP3)及其多克隆抗体对小鼠和人精卵结合的影响,采用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理小鼠精子,然后再与小鼠卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附及体外受精率的影响;用rhZP3以及空白培养液分别处理人精子,然后再与人卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附的影响;用抗rhZP3抗体与阴性血清分别处理小鼠和人卵子,再与精子进行结合实验,观察多克隆抗体对精子粘附以及小鼠体外受精率的影响。实验结果表明,rhZP3和抗rhZP3多克隆抗体既能抑制人的体外精卵结合,也能抑制小鼠体外精卵结合,提示rhZP3具有天然透明带的特性,有发展成避孕疫苗和作为检测透明带抗体检测试剂的可能。; 谢琪璇马丽潘善培张韫张春雪肖銮娟史卫卫李文星; 关键词：卵透明带多克隆抗体避孕疫苗

重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用被引量：1: 2005年; 目的:观察重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用。方法:正常生育力人精子经过获能后,分别用BSA、孕酮和含不同浓度的重组人ZP3蛋白的培养液共孵育,诱导精子顶体反应,对实验组和对照组的精子的顶体发生状态用考马斯亮蓝染色法进行评价。结果:精子与培养液共孵育30 min后,rhZP3组与BSA组之间差异有显著性(P<0.05),顶体反应率随rhZP3质量浓度增加而升高。结论:重组人ZP3蛋白对人精子顶体反应有显著的诱导效应,且在一定范围内与质量浓度成正相关,重组人ZP3蛋白具有发展精子顶体反应试剂盒的潜能。; 谢琪璇史卫卫张韫李文星张春雪肖銮娟潘善培; 关键词：精子顶体反应

蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用被引量：1: 2005年; 目的　建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法　利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果　洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论　该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。; 谢琪璇郑育声彭雅林肖銮娟余巍潘善培; 关键词：层析蛋白纯化

人精子顶体反应3种检测方法的比较与评价被引量：11: 2005年; 目的:寻找简便和准确的精子顶体反应检测方法。方法:正常人精液标本液化后混合,分成6组,分别用金霉素染色法、考马斯亮蓝染色法和酸性磷酸酶检测法对孕酮诱导顶体反应前后的人精子进行形态学观察并且对顶体反应率进行数据统计。结果:经考马斯亮蓝和金霉素染色后,发生顶体反应的精子和没有发生顶体反应的精子均有明显的形态差异;经考马斯亮蓝染色、金霉素荧光染色和酸性磷酸酶测试法检验,孕酮诱导组与阴性对照组的精子顶体反应率均有明显差异(P<0.05)。结论:3种方法均可作为顶体反应的检测手段,但考马斯亮蓝染色更为简便和稳定。; 张韫谢琪璇潘善培张春雪肖銮娟彭雅林; 关键词：精子顶体反应酸性磷酸酶

人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较: 2009年; 目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。; 周文燊熊波李文星谢琪璇肖銮娟张春雪潘善培; 关键词：跨膜区

一种快速筛选巴氏毕赤酵母高表达克隆的新方法被引量：4: 2004年; 　目的:为了准确、快捷地筛选到高表达的毕赤酵母工程菌株。方法:利用毕赤酵母的生理特点和免疫印迹的特异性,将转化子接种到MM板上至形成克隆,贴上NC膜,待NC膜被分泌产物湿润后,揭下NC膜,进行ELISA-dot鉴定,选出高表达克隆进行扩增、培养,并作SDS-PAGE和Westernblotting进一步确定。结果:该法的筛选结果与SDS-PAGE和Westernblotting相符。结论:与传统方法相比,该法具有高通量,快速,简便的优点,适合毕赤酵母工程菌株的筛选。; 谢琪璇肖銮娟潘善培余巍彭雅林张春雪; 关键词：毕赤酵母克隆技术菌株筛选斑点印迹

利用H_2O_2提高GS115rhZP3培养中的溶氧和目的蛋白产量被引量：2: 2004年; 目的:提高毕赤酵母摇瓶培养中的溶氧,从而提高目的蛋白的表达量.方法:在rhZP3工程菌培养过程分别加入不同浓度的H2O2,甲醇诱导培养后,取培养液上清进行SDS-PAGE电泳和Westernblot,并与不加H2O2的对照组比较,分析H2O2对重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)在毕赤酵母中表达量的影响.结果:H2O2可提高培养基的溶氧量.当H2O2浓度为5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高.结论:在rhZP3毕赤酵母工程菌摇瓶培养中,加入H2O2可提高rhZP3的表达量.; 肖銮娟谢琪璇潘善培唐键; 关键词：过氧化氢毕赤酵母溶氧

重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性研究被引量：2: 2005年; 为了研究毕赤酵母表达的重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性,分别用空白培养液,含孕酮或rhZP3的培养液对人精子进行顶体诱发实验,用考马斯亮蓝染色法对顶体状态进行评价;用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理精子,然后再与卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子在精卵结合中的情况;用抗rhZP3抗血清与阴性血清分别处理卵子,再与精子进行结合实验,观察经过不同处理后的卵子在精卵结合中的情况。rhZP3诱发顶体反应实验结果显示,rhZP3处理组与空白对照组之间差异显著(P<0.01);精卵结合实验结果显示,各实验组和对照组之间存在显著性差异(P<0.01),rhZP3、抗rhZP3抗体均能抑制精卵结合。实验结果表明,rhZP3具有天然人卵透明带蛋白相似的活性。; 谢琪璇李文星潘善培张春雪肖銮娟马丽史卫卫; 关键词：重组蛋白生物活性顶体反应精卵结合

不同人群血清中抗透明带抗体的检测被引量：6: 2004年; 为了探讨抗透明带抗体的临床意义 ,本研究用纯化的猪卵透明带ZP3抗原制备抗卵透明带抗体酶联免疫检测试剂盒 ,采用ELISA方法检测不同人群血中抗透明带抗体 ,并用阳性血清与人卵巢组织切片进行免疫组化分析。结果显示不同年龄组妇女抗透明带抗体阳性率差异不显著 (P >0 0 5 ) ,不孕组阳性率 15 % ,与其他组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。ELISA检测到的透明带抗体阳性血清不与人卵巢组织切片中的透明带产生肉眼可见的沉淀反应。除了早孕组和老龄妇女 ,任何年龄阶段的女性均可出现抗透明带自身抗体 ,鉴于这些抗体不引起周期紊乱现象 ,却可能阻止受精。; 谢琪璇肖銮娟张春雪潘善培; 关键词：血清抗透明带抗体不孕避孕疫苗

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广东省自然科学基金(31883)

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