陕西省科技攻关计划(2008K02-05)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：华进联孙军伟张姗姗尚川川刘园园更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 表观遗传学与生殖细胞发育分化研究发展被引量：1
- 2010年
- 从DNA甲基化修饰、组蛋白甲基化和乙酰化修饰、基因印记和RNA干扰等几个方面,综述了表观遗传学的基本机制及其对哺乳动物生殖细胞发育分化的影响。表观遗传学对于动物机体生长、代谢及功能的正常维持具有重要作用,其中任何方面的异常都会导致体细胞和生殖细胞的生长分化调控失常,甚至引发疾病。
- 孙军伟华进联
- 关键词：表观遗传学甲基化组蛋白生殖细胞
- 关中黑猪IL-5 cDNA的克隆表达与多克隆抗体制备被引量：1
- 2013年
- 目的克隆关中黑猪IL-5 cDNA,构建该基因的不同表达质粒,获得表达的IL-5并制备其多克隆抗体。方法提取佛波酯(PHA)刺激的关中黑猪外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR克隆猪IL-5基因(sIL-5),鉴定后将sIL-5基因分别克隆到pQE30、pET-32a和pEGFP-N1中,构建重组表达质粒pQE-sIL-5和pET-sIL-5及pEGFP-sIL-5,将pEGFP-sIL-5瞬时转染PK-15细胞,将pQE-sIL-5和pET-sIL-5分别转化JM109和BL21,用1 mmol/L IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot法鉴定表达蛋白后,通过镍柱纯化目的蛋白。用纯化的BL21表达的IL-5免疫小鼠,制备其多克隆抗体,用纯化的JM109表达的IL-5通过优化的间接ELISA检测抗体效价。结果成功获得关中黑猪的IL-5基因(登录号KC660157),大小405 bp,与GenBank中猪IL-5参考序列同源性99.75%,仅25位的T变成C,但编码的氨基酸完全相同;荧光显微镜观察发现pEGFP-sIL-5在PK-15细胞中得到表达;SDS-PAGE结果显示JM109表达的目的蛋白的相对分子质量(M_r)约15 000,而BL21表达的目的蛋白M_r约30000,Western blot法检测结果表明,表达的目的蛋白均具有良好的反应原性;免疫小鼠后获得了IL-5的多克隆抗体,抗体效价最高可达1:12 800。结论克隆了关中黑猪IL-5基因片段并成功表达,获得了IL-5的多克隆抗体。
- 穆杨刘园园李亮亮刘阳尚川川周恩民
- 关键词：IL-5多克隆抗体
- 关中奶山羊Prm1基因的克隆及真核表达
- 2012年
- 【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达。将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GC1细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况。【结果】Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达。同时扩增得到了关中奶山羊Prm1基因CDS序列,与其它物种比对,发现其与许多物种具有较高的同源性,与牛的同源性高达97.4%,最后在GC1细胞和人的脐带基质细胞中进行了超表达。【结论】得到了关中奶山羊Prm1基因的表达规律及完整的CDS序列。
- 李明昭刘超孙军伟朱海鲸曹晖吕晓仇普斌华进联
- 关键词：关中奶山羊基因克隆
- miRNAs与哺乳动物生殖细胞发生被引量：3
- 2010年
- 随着小RNA组学的兴起，越来越多不曾被关注的小RNA分子，如siRNAs，miRNAs，rasiRNAs和piRNAs等先后被发现。研究显示，相对于基因、蛋白质等具有复杂结构的生物大分子而言，这些结构非常简单的微型RNA对动物正常机能的维持、细胞增殖、分化、凋亡、器官形成、肿瘤形成等各种生命现象都具有极其重要的影响。
- 华进联张姗姗
- 关键词：MIRNAS哺乳动物细胞发生SIRNASRNA分子
