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转基因生物新品种培育专项(2009ZX08008-010B): 作品数：17 被引量：57H指数：6; 相关作者：景志忠贾怀杰何小兵房永祥曾爽更多>>; 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学西北农林科技大学更多>>; 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

Toll样受体2、4对病毒囊膜蛋白的识别被引量：6: 2011年; TLR2、4是TLRs家族中重要的成员,通过识别囊膜病毒的PAMPs/DAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导促炎性细胞因子和趋化因子等的释放,介导先天性抗病毒免疫反应。本文就TLR2、4的基本概况、结构特征、抗病毒信号通路以及对不同囊膜病毒的天然免疫反应等相关研究进展进行简要综述。; 何小兵房永祥贾怀杰陈国华曾爽景志忠; 关键词：TOLL样受体先天性免疫囊膜蛋白抗病毒免疫

猪TLR3胞外区片段重组载体的构建、表达和多克隆抗体的制备被引量：1: 2012年; 为制备猪TLR3(poTLR3)胞外区蛋白的多克隆抗体,从poTLR3克隆载体扩增胞外区基因序列连接到pGEX-4T-1载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下,表达GST-poTLR3融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化,免疫家兔制备抗体,并以间接ELISA法测定抗体效价,利用Western-blot和细胞免疫荧光验证抗体与真核表达蛋结合的白特异性.结果表明:制备的多克隆抗体的效价可达1∶128 000,poTLR3胞外区蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并且制备的多克隆抗体特异性好、滴度高.; 管齐赛房永祥贾怀杰何小兵周涛杨孝朴景志忠; 关键词：胞外区原核表达多克隆抗体

DNA识别受体在天然免疫反应中的作用被引量：1: 2012年; 近年来，随着人们对哺乳动物模式识别受体（Patternrecognition receptors，PRRs）的发现和研究的不断深入，PRRs对病原，尤其是对病原生命物质基础——DNA和RNA的识别成为天然免疫学研究的热点和重点领域^[1]。PRRs主要包括Toll样受体（TLRs）家族、RIG-I样受体（RLRs）家族和蛋白激酶R（RNA-ativated protein kinase R，; 何小兵房永祥贾怀杰陈国华曾爽景志忠; 关键词：TOLL样受体免疫反应 KINASE PRRS 哺乳动物

抗菌肽Shiva-1a基因真核表达载体的构建及序列分析: 抗菌肽是生物体与生俱来的抗病原微生物感染的小分子多肽,在先天性免疫抗感染的过程中起着十分重要的作用。天蚕素类(Cecropins)抗菌肽是由单基因编码的、细胞核糖体翻译的碱性小分子蛋白,具有分子量小、热稳定性强、无免疫性...; 宫晓炜郑福英蔺国珍曹小安王光华周继章才学鹏; 文献传递

正痘病毒干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径被引量：3: 2011年; 正痘病毒属的牛痘病毒、痘苗病毒以及猴痘病毒等成员是最重要的动物源性人兽共患病病原。作者围绕这些正痘病毒编码的干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径,重点介绍了病毒阻断宿主干扰素反应、抑制宿主TNF诱导的反应以及失活宿主防御反应的免疫成分等策略,以加深对痘病毒感染的宿主特异性、免疫逃避以及致病的分子机制的理解。; 景志忠贾怀杰周涛何小兵; 关键词：病毒感染宿主免疫反应分子机制

痘病毒病:值得高度重视的一类人兽共患病被引量：6: 2011年; 痘病毒（poxvirus）是已知的病毒粒子中基因组最大、最复杂的以及宿主范围最广和成员最多的病毒家族,其大部分成员又都能引起动物源性人兽共患病。目前猴痘、羊口疮、禽痘、鼠痘及羊痘在国内外普遍流行、危害严重。本文通过对动物源性人兽共患痘病毒病的介绍,来促进我国加强对痘病毒病的基础理论研究以及防控技术战略储备,以保障人类、动物健康和国家安全。; 景志忠贾怀杰周涛; 关键词：痘病毒公共卫生

口蹄疫病毒3C基因与增强型绿色荧光蛋白基因的真核共表达: 2011年; 为验证siRNAs对口蹄疫病毒(FMDV)复制的抑制效果,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Asia 1型口蹄疫病毒Jiangsu/China/2005株的3C基因,克隆入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-N1中,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染PK-15细胞,检测EGFP的表达和3C基因转录水平。结果显示,经PCR及双酶切鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与Jiangsu/China/2005株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内有EGFP表达,实时荧光定量PCR检测到细胞内有3C基因的转录。证实,成功构建了FMDV 3C基因与EGFP共表达质粒并在PK-15细胞中获得了表达。; 魏衍全田宏吴锦艳陈妍尚佑军窦永喜刘湘涛才学鹏; 关键词：口蹄疫病毒增强型绿色荧光蛋白

抗菌肽Shiva 1a基因真核表达载体的构建及序列分析: 2011年; 为了探讨天蚕类抗菌肽在动物早期抗感染过程中的作用机理,本研究以Shiva1a基因的成熟肽为模板设计4条引物,利用重叠延伸PCR技术获得目的基因,并在C端添加6×His的标签。将此序列与真核表达载体pIRES2-EGFP进行重组,构建pIRES2-EGFP-Shiva 1a重组表达质粒,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染将重组质粒转染到CHO-K1细胞,荧光显微镜观察其表达情况。通过生物信息学软件对抗菌肽Shiva 1a的二级结构和三级结构进行预测分析。其结果为进一步研究Shiva 1a的抗菌活性和在动物抗病育种方面的应用奠定了基础。; 宫晓炜郑福英蔺国珍曹小安王光华周继章才学鹏; 关键词：抗菌肽真核表达

ROS对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响被引量：3: 2011年; 【目的】研究周期依赖性蛋白激酶抑制剂(Roscovitine,ROS)对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。【方法】将山羊卵母细胞置于含不同浓度(0(对照),20,40,80,120,160,200μmol/L)ROS的成熟液中培养24h统计第一极体排出率,初步筛选山羊卵母细胞成熟培养液中添加ROS的有效浓度;将山羊卵母细胞在含不同浓度(0(对照),40,80,120,160,200μmol/L)ROS的抑制培养液中培养8或16h,再转入常规培养液中培养至24h,统计第一极体排出率,确定ROS适宜的浓度和作用时间。将卵母细胞放入添加40μmol/L ROS的培养液微滴中进行抑制培养,抑制培养8h后分别再常规培养0,2,4,6,8,10,12,14,16h,统计各处理第一极体排出率。将山羊卵母细胞在最佳ROS处理方案下抑制培养后进行孤雌激活,观察孤雌胚的发育情况。【结果】成熟培养液中加入40μmol/LROS抑制培养山羊卵母细胞8h后再转入常规培养液中培养至24h,是比较理想的ROS处理方案。山羊卵母细胞成熟培养的16h以前,全程抑制和抑制8h再常规培养2个试验组第一极体排出率与常规对照组无显著差异;分别培养18,20,22h时,2个试验组第一极体排出率均极显著低于对照组;24h时,抑制8h再常规培养组第一极体排出率(58.76%)与对照组(63.13%)接近,无显著差异。试验组成熟卵母细胞孤雌激活胚的囊胚率(46.75%)显著高于对照组(36.04%,P<0.05)。【结论】山羊COCs成熟培养液中加入40μmol/L ROS培养8h再转入常规培养液培养至24h,是山羊卵母细胞核质同步成熟较适宜的方案,此方案可以有效抑制18～22h核成熟卵母细胞的减数分裂恢复,推迟4～6h成熟,达到培养24h核质同步成熟的目的,提高了体外培养卵母细胞的质量。; 潘瑞屈晓君赵晓鹏马保华赵晓娥; 关键词：ROSCOVITINE 卵母细胞体外成熟山羊

机体识别病毒核酸的几种分子模式及途径被引量：13: 2011年; 近些年机体病原相关模式受体及其识别分子机制的研究,极大地促进了先天性分子免疫学的发展,并成为现代免疫学研究的重点和热点领域。作者通过机体识别病毒核酸的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)、NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)和DAI(DNA-dependent activatorof interferon-regulatory factors,DAI)等模式识别分子的细胞定位、分子结构及其识别病毒核酸途径的介绍,系统、全面地探讨了宿主机体如何全方位识别和消除入侵病毒的分子免疫防御途径,为抗病毒药物和疫苗的设计以及抗病育种提供了理论依据。; 景志忠何小兵房永祥陈国华曾爽贾怀杰; 关键词：病原相关分子模式模式识别受体病毒核酸先天性免疫

转基因生物新品种培育专项(2009ZX08008-010B)

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