天津市自然科学基金(033605311)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：杨东靖李力陈锦英徐昭王志锐更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津市卫生防病中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中的克隆及表达被引量：4
- 2006年
- 目的:在大肠埃希菌中克隆和表达汉坦病毒SEO型及HTN型S基因。方法:PCR扩增汉坦病毒SEO型L99株及HTN型Z10株S基因读码区,前者经EcoRI及XhoI双酶切,后者经SacI及XhoI双酶切,将两者定向克隆入pET32a(+),转入感受态E.coliTop10。获取重组质粒,经PCR、双酶切及序列分析鉴定后,转入E.coliBL21感受态,经IPTG诱导表达,其产物经SDS-PAGE和Western-blot检测。结果:SEO型L99株及HTN型Z10株S基因正确克隆于pET32a(+),目的蛋白的分子质量约为67.1ku,表达量占菌体总蛋白的40%以上,Western-blot有特异性条带。结论:SEO型及HTN型汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中获得表达,为其后的应用奠定了基础。
- 徐昭陈锦英李力杨东靖
- 关键词：汉坦病毒大肠杆菌克隆基因表达
- 汉坦病毒S基因毕赤酵母表达系统的构建被引量：2
- 2006年
- 目的构建汉坦病毒HTN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统。方法应用RT-PCR法扩增汉坦病毒Z10株和L99株编码核蛋白的S基因,将扩增产物分别与pGEM-T-Easy载体连接,经序列分析后双酶切,分别定向克隆入载体pPICZαΑ和pPICZαC,继而将重组质粒以SacⅠ线性化并电转化入毕赤酵母X33感受态细胞,用Zeocin筛选高拷贝转化子进行鉴定。结果PCR扩增产物约为1290bp,与T载体相连测序结果与Genbank相应序列比较,核苷酸序列同源性分别为99.84%和99.92%,其编码蛋白质二级结构均无改变。定向克隆获得pPICZα-ΑZ10S和pPICZ-αL99S,分别电转化得到巴氏毕赤酵母重组菌株PpX33-Z10S和PpX33-L99S,提取其基因组DNA经PCR鉴定与预期相符。结论成功构建汉坦病毒HIN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统,为进一步研究奠定基础。
- 魏骏飞徐昭李力王志锐杨东靖陈锦英
- 关键词：汉坦病毒S基因毕赤酵母
