教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0245)
- 作品数：12 被引量：71H指数：3
- 相关作者：杨洁姚智邵洁东莉洁葛林更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津中医药大学中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人类U5·116 ku蛋白基因片段的克隆
- 2007年
- 目的:构建人类U5·116 ku基因全长真核表达质粒。方法:从HeLa细胞中提取总体RNA,一步法合成单链cDNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,扩增出人类U5·116 ku基因两段连续的序列,首先分别克隆至pTZ57R/T载体,两段序列连接成全长后再定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒。结果:RT-PCR法获得U5·116 ku基因两段连续的序列,长度分别为1672bp和1246bp,分别与pTZ57R/T载体连接后,选择合适的酶切位点再连接成全长序列,然后将全长序列和pcDNA3.1(-)真核表达载体进行连接、转化、酶切鉴定及序列分析后,证实pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒构建成功。结论:成功克隆了人类U5·116 ku的编码基因,并构建了其真核表达质粒pcDNA3.1(-)-U5·116 ku。
- 洪敬欣邵洁史雪彬姚智杨洁
- 关键词：HELA细胞质粒逆转录聚合酶链反应
- 新型转录共激活因子人类p100蛋白的抗体制备
- 2006年
- 目的:制备抗p100蛋白的特异性抗体。方法:利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白的方法纯化人类p100蛋白Tudor片段作为抗原,经免疫动物获得多克隆抗血清,并利用Westernblot的方法检测抗体的特异性。结果:获得的抗p100蛋白抗体,经体内和体外试验验证的确可与其相应抗原特异性结合。结论:制备的抗p100蛋白的抗体通过与其抗原即人类p100蛋白在体内和体外试验中的特异性结合,为进一步探讨生理条件下p100蛋白在细胞内信号传导通路的作用提供了可靠工具。
- 东莉洁邢冬红白虹步天栩姚智杨洁
- 关键词：DNA结合蛋白质类抗体特异性
- U5 snRNP在前体mRNA剪接加工中的作用
- 2008年
- 前体mRNA的剪接是基因表达过程中的关键一步,发生在基因的转录之后与蛋白合成之前。在由前体mRNA剪接加工而形成成熟mRNA时,需要将转录本中的内含子切除,因为它会干扰基因的表达。前体mRNA的剪接发生在细胞核中,是在一个大的RNA与蛋白质的复合体即剪接体的催化下完成的。复合体中含有U1、U2、U5,二聚体形式的U4/U6小核RNA(snRNA)和一些小核核糖核蛋白(snRNP)。U5snRNP特异蛋白包括hPrp8,hSnu114(aGTPase),hBrr2(aDExH/Dboxhelicase)和Prp28等。Prp8构成剪接体的催化核心,hSnu114可避免剪接复合体过早的活化。因此,U5snRNP在剪接体聚集过程和前体mRNA的剪接反应中发挥重要作用。
- 李晓冬杨洁
- 关键词：前体MRNA剪接
- pEGFP-C2-人类p100蛋白SN和TD片段质粒构建
- 2007年
- 目的:分别构建含有人类p100蛋白SN片段和TD片段基因的真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2-p100-SN和pEGFP-C2-p100-TD。方法:利用EcoRI和BamHI限制性内切酶对已构建好的质粒PSG5-p100-SN和PSG5-p100-TD进行双酶切以获得目的片段p100-SN和p100-TD基因片段,回收纯化后连接到质粒pEGFP-C2上。结果:通过对重组质粒进行菌落PCR鉴定以及酶切鉴定均能从PCR产物和酶切产物中观察到p100-SN和p100-TD片段。结论:成功构建了可以在真核细胞内表达绿色荧光蛋白和目的蛋白的融合蛋白的重组质粒pEGFP-C2-p100-SN和pEGFP-C2-p100-TD,可为有关人类p100蛋白功能及作用机制研究奠定基础。
- 步天栩葛林洪敬欣姚智杨洁
- 关键词：绿色荧光蛋白质粒
- GST-G3BP Domain 1～5原核表达质粒的构建及其表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建GST-G3BP Domain1～5的融合表达质粒,并在大肠杆菌中稳定表达。方法:PCR扩增G3BP Domain1～5片段,利用限制性内切酶EcoRI和NotI将其连接至载体pGEX-4T-1,将连接产物转化大肠杆菌,挑取单菌落,提取质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序。将转化正确的大肠杆菌过夜培养,IPTG诱导融合蛋白表达,immobilized Glutathione beads钓取目的蛋白。结果:G3BP Domain1～5片段均成功连接至载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的融合蛋白。结论:GST-G3BP Domain1～5的融合表达质粒构建成功。
- 葛林何津岩邵洁东莉洁方建飞李晓东杨洁
- 关键词：G3BP质粒构建DOWN
- 重组pEGFP-C2-p100质粒构建及表达被引量：2
- 2008年
- 目的:将人类p100基因定向连入pEGFP-C2质粒,使p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究p100蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoRI和BamHI双酶切方法,从pSG5-p100质粒中获得p100蛋白的cDNA全长;将该cDNA连接入pEGFP-C2质粒。将构建成功的pEGFP-C2-p100质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见p100片段。(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:(1)p100 cDNA全长成功载入pEGFP-C2质粒。(2)p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。
- 何津岩东莉洁葛林赵钢邵洁陆燕欣李晓冬姚智杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒融合蛋白
- Prp8蛋白在前体mRNA剪接中的作用
- 2007年
- 前体mRNA的剪接是基因表达的关键一步,发生在蛋白质的转录之后与合成之前。在前体mR- NA剪接加工过程中需要将转录本中的内含子切除,因为它会干扰基因的转录。前体mRNA的剪接发生在细胞核中,是在一个大的RNA与蛋白质的复合物即剪接体的催化下完成的。Prp8(precursor mRNA process- ing)是参与前体mRNA剪接的最大的蛋白,其序列从酵母到人类是高度保守的。Prp8同时也是细胞核内一个最重要的剪接因子。在剪接过程中,Prp8组成剪接体的催化中心。有人推断Prp8是剪接体的支架蛋白,很可能在催化中心起到锚定RNA的作用,同时也调节着激活剪接体所必需的构象变化。Prp8还与色素性视网膜炎的发生密切相关。
- 洪敬欣姚智杨洁
- 关键词：前体MRNA支架蛋白
- 四妙勇安汤的有效成分对血管内皮细胞增殖的影响被引量：34
- 2008年
- 目的:研究四妙勇安汤的有效成分对脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖的影响,以探讨其促血管新生的可能机制。方法:体外培养ECV304,单体进行干预,利用MTT及BrdU-ELISA法检测其对ECV304增殖的影响。结果:绿原酸101ng/ml^102ng/ml,阿魏酸102ng/ml^104ng/ml浓度组为促细胞增殖的优选浓度。结论:绿原酸、阿魏酸促内皮细胞增殖能力与血清有协同作用。
- 袁卓张军平张仁岗
- 关键词：四妙勇安汤内皮细胞增殖绿原酸阿魏酸
- 顽固性高血压从热毒论治被引量：29
- 2008年
- 从热毒立论,探讨顽固性高血压的中医治疗。结合现代医学研究,阐明热毒是贯穿于本病的主线,从热毒论治本病有其客观依据,提出解毒泄热为其基本治法,治疗当从热与毒的偏重施治。
- 彭立张军平
- 关键词：顽固性高血压热毒
- 高通量筛选JAK-STAT6信号传导通路抑制剂方法的初步建立被引量：5
- 2006年
- 目的构建可用于高通量筛选JAK/STAT6信号传导通路抑制剂的工程细胞株,建立稳定可靠的筛选方法。方法利用基因重组和转染技术,将STAT6特异性识别启动子IgE基因序列和虫荧光素酶报告基因联合插入pCMV质粒,脂质体法转染至HeLa细胞,经潮红霉素B抗性筛选及报告基因检测,得到稳定表达虫荧光素酶的工程细胞株。通过优化溶剂DMSO浓度,IL4作用浓度及孵育时间等筛选条件,建立了可靠的筛选方法,并在此基础上对1600种化合物进行了筛选。结果建立的筛选方法稳定可靠,系统Z′因子达到0.64。通过对1600种化合物的筛选,得到3个抑制效果较理想的化合物并测得其IC50值。结论所建立的高通量筛选方法可用于JAK/STAT6信号传导通路抑制剂的筛选。
- 笪宇蓉姚智李静雅邵洁沈强东莉洁李佳杨洁
- 关键词：高通量筛选工程细胞株抑制剂
