“十五”国家科技攻关计划(2003BA712A03-05)
- 作品数：4 被引量：60H指数：3
- 相关作者：唐家琪王长军潘秀珍赵华梅徐公义更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京师范大学聊城职业技术学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪链球菌毒力因子和鉴定方法的研究进展被引量：35
- 2006年
- 猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人畜共患病病原体,能够引起猪疫病,人类感染该菌可导致脑膜炎、败血症甚至死亡。鉴于其对养猪业的巨大经济影响和对公共卫生事业的威胁,关于猪链球菌的研究日益深入,即对其毒力相关蛋白和鉴定方法的研究进展做一综述。
- 赵华梅潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌猪链球菌病毒力因子
- 猪链球菌2型人源分离株MRP单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2008年
- 为建立一种针对猪链球菌2型（SS2）毒力因子的特异性检测方法，研制了抗SS2溶菌酶释放蛋白（MRP）单克隆抗体（McAb），并对其生物学活性进行了分析。将表达、纯化的SS2菌株MRP免疫BALB／c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，以纯化的MRP蛋白作为包被抗原，通过间接ELISA方法筛选获得了6株能稳定分泌抗MRPMcAb的杂交瘤细胞系288、3G5、1G1、3G9、186和2C3。经用间接ELISA方法测定，单抗腹水的抗体效价均超过1：10^5，杂交瘤细胞培养上清液的效价为1：128～1：1024。Western-blotting鉴定结果表明，6株单抗均具有特异的生物学活性；以288单抗腹水和SS2多克隆抗血清建立的夹心ELISA方法可特异地检测MRP。
- 王海丽徐公义王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白单克隆抗体
- 猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定被引量：24
- 2006年
- 目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成。结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH。
- 赵华梅潘秀珍王长军郭恒彬李先富唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶
- SS2人源分离株ZYH24EF的表达纯化及其单克隆抗体的制备被引量：1
- 2009年
- 目的建立猪链球菌2型(SS2)胞外因子(EF)的免疫学检测方法。方法将SS2四川人源分离株ZYH24EF抗原性强的区域进行克隆、原核表达,对表达的融合蛋白(rEF-GST)采用亲和层析法纯化、经凝血酶作用去除标签蛋白获得纯化的EF目的蛋白。以纯化的EF免疫BALB/c小鼠,间接ELISA方法筛选阳性克隆,对获得的抗EF单克隆抗体(McAbs)进行特异性分析,并建立猪链球菌EF检测方法。结果得到rEF-GST和EF相对分子量分别为62000和35000;建立了4株稳定分泌抗EFMcAbs的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2;腹水的特异性鉴定结果表明4株McAbs能特异性的识别EF;以2G1单抗腹水和抗EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。结论4株抗EFMcAbs的制备对猪链球菌检测试剂盒的研制以及该病的防治有重要意义。
- 徐公义王海丽葛长城王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型单克隆抗体
