陕西省“13115”科技创新工程(2007ZDKG-01)
- 作品数：11 被引量：65H指数：5
- 相关作者：高翔董剑陈其皎赵万春李敏更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省“13115”科技创新工程国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小麦“陕253”低分子量谷蛋白基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 为了挖掘和有效利用陕253中的优良基因,根据LMW-GS编码基因5′和3′端的保守序列设计引物,采用PCR方法以陕253的基因组DNA为模板进行扩增,分别回收并克隆到载体上,测序后得到11个新LMW-GS基因。GenBank登录号分别为GQ892576~GQ892580和GQ892583~GQ892588,其长度为903~1 081 bp。其中,GQ892576、GQ892585、GQ892586、GQ892587和GQ892588具有完整编码区,可分别编码305、351、298、351和307个氨基酸残基的成熟蛋白。而GQ892577、GQ892578、GQ892579、GQ892580、GQ892583和GQ892584由于在编码区内出现提前终止密码子,推测为假基因。推导的氨基酸序列结果显示：它们都具有LMW-m型低分子量谷蛋白亚基的典型结构特征。
- 李艳亮高翔陈其皎董剑赵万春王明霞李敏陈瑞佶庞红喜李哲清刘俊
- 关键词：小麦陕253基因克隆
- 小麦品种陕253新型avenin-like的克隆与原核表达分析被引量：3
- 2010年
- 【目的】克隆小麦品种陕253中的新型avenin-like(类燕麦储藏蛋白),并构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。【方法】利用PCR方法从小麦品种陕253中克隆新型avenin-like,将克隆的avenin-like亚克隆至表达载体,经酶切及测序鉴定后,转化宿主菌Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,并利用Western blot进行检测。【结果】从小麦品种陕253克隆获得3个新avenin-like,GenBank登录号分别为GQ903577、GQ903578和GQ903579。序列分析表明,其中GQ903579为假基因,利用所构建的大肠杆菌表达载体,经IPTG诱导,实现了对登录号为GQ903578的基因在原核系统的特异性表达。【结论】新型avenin-like的克隆及原核表达的成功,为小麦品质改良提供了研究基础。
- 陈瑞佶高翔陈其皎董剑赵万春李艳亮王明霞李敏庞红喜李哲清刘俊
- 关键词：基因克隆融合蛋白原核表达
- 减源对不同穗型小麦品种干物质积累及其运转的影响被引量：19
- 2008年
- 为给小麦育种在源、流、库性状改良方面提供理论依据，以三种穗型的6个小麦品种为材料，研究了减源对不同穗型小麦干物质积累及其运转的影响。结果表明：（1）叶源亏缺导致干物质累积量和穗粒重降低，减源越多、减源叶位越高，二者降低幅度越大；（2）叶源亏缺可以大幅度提高剩余叶源的光合速率和营养器官花前储藏物质对籽粒的贡献率，但其效应不能完全补偿叶源亏缺造成的光合损失；（3）小麦籽粒产量的80％（中穗型和多穗型）～90％（大穗型）来自花后光合产物的积累，叶源是小麦籽粒库扩建的核心光合源；（4）营养器官花前储存物质可以大幅度被调运用于籽粒库的扩建，小麦生育后期叶源的光合速率不但可以被提高，而且随生育期推进而下降的速度也可以减缓；（5）三种穗型小麦比较，在相同减源条件下，大穗型小麦的光合积累量和穗粒重的降低幅度及光合速率随生育期推进的降低幅度远小于中穗型和多穗型小麦，大穗型小麦营养器官花前储存物质对籽粒库的贡献率远小于中穗型和多穗型小麦，且花后光合产物的分配也不够合理，说明大穗型小麦源、流、库性状改良的产量潜力远高于中穗型和多穗型小麦。适当减小叶面积、提高分蘖成穗率、增加群体穗数，以及在群体水平上增源、畅流、扩库，可能是大穗型小麦源、流、库性状改良的方向。
- 魏艳丽王辉冯毅张玲丽闵东红李学军孙道杰
- 关键词：小麦穗型
- 陕253γ-醇溶蛋白基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2010年
- 针对γ-醇溶蛋白基因家族成员,设计了覆盖其启动子及全长编码区的3对特异引物,从强筋小麦品种陕253中克隆了8条1000bp左右的片段(GenBank登录号为GQ871770～GQ871777)。该片段群包含典型醇溶蛋白亚基的完整编码序列,并在重复区存在丰富的插入/缺失(InDel);推导的氨基酸序列显示,8个基因均具有γ-醇溶蛋白亚基的典型结构特征,其中GQ871771为假基因,4条序列(GQ871770、GQ871772、GQ871776和GQ87177)具有9个半胱氨酸残基;启动子区序列分析表明,GQ871770、GQ871772、GQ871774和GQ871776在胚乳框存在6处SNP变异,其中两处变异发生于GCN4基序内,利用WebLogo3在线构建了储藏蛋白更具代表意义的30bp保守胚乳盒模式。进化分析证实克隆序列属于γ-醇溶蛋白基因家族成员。
- 王明霞高翔陈其皎董剑赵万春李艳亮李敏陈瑞佶庞红喜李哲清刘俊
- 关键词：普通小麦基因克隆
- 簇毛麦新型低分子量谷蛋白亚基的分子克隆与序列分析被引量：2
- 2011年
- 为发掘低分子量谷蛋白亚基(LMW-GS)新的变异类型,通过设计引物和特异PCR扩增,从簇毛麦TA2127基因组DNA中得到14个LMW-GS基因,GenBank登录号分别为HQ615147～HQ615160。序列分析表明,所有基因具有完整编码区,长度为831bp和846bp,可编码277和282个氨基酸残基,推导的氨基酸序列分析显示,14个基因编码的蛋白序列都缺少一段N-端保守区,且N-端序列是一种新的类型;在14个LMW-GS基因中检测到19个SNPs和1个16bp的缺失。系统进化分析表明,簇毛麦LMW-GS与ω-醇溶蛋白和HMW-GS亲缘关系相对较远,与普通小麦Glu3-的低分子谷蛋白基因进化关系相对较近。
- 王延鹏高翔陈其皎赵万春董剑史红飞臧闻李志业李晓燕
- 关键词：LMW-GS进化关系
- 小麦品种“陕253”PDI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化被引量：2
- 2011年
- 为进一步研究控制小麦蛋白二硫键形成的关键蛋白即蛋白质二硫键异构酶(PDI),运用RT-PCR方法克隆出小麦品种"陕253"PDI基因的cDNA序列,基因登陆号为HQ911363。序列分析表明,HQ911363全长为1 539 bp,编码512个氨基酸,含有PDI典型的异构酶活性的催化位点-CGHC-和内质网驻留信号肽-KDEL-。构建该基因的原核表达载体,在宿主菌E.coliBL21(DE3)中经IPTG诱导表达融合蛋白,并对表达蛋白进行了纯化。SDS-PAGE及Western-blot检测证实融合蛋白诱导表达并纯化成功。
- 臧闻董剑高翔陈其皎王延鹏李志业史红飞
- 关键词：小麦原核表达蛋白纯化
- 普通小麦中α-醇溶蛋白基因(GQ891685)的克隆、表达及品质效应鉴定被引量：12
- 2010年
- 【目的】利用E.coli体外大量高效表达带有1个额外半胱氨酸残基的α-醇溶蛋白,经Ni+-NTA柱纯化获得目标蛋白,通过氧化-还原反应将其整合到基础面粉中,利用粉质仪研究其对面团流变学特性的影响,以确定该基因表达产物的加工品质效应。【方法】根据α-醇溶蛋白基因编码区保守序列设计引物,从小麦品种陕253中克隆到1条含α-醇溶蛋白基因编码区的目的片段,长度为1243bp(GenBank登录号GQ891685),构建了该基因的原核表达载体pET32a-S253-Agli,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中经IPTG诱导表达,对表达的蛋白进行亲和层析及低温冷冻干燥回收、纯化,通过微量掺粉试验,在4g粉质仪上测定其对面团流变学特性的影响。【结果】该基因片段包含900bp的完整编码序列及部分5′-调控元件;Uniq domainⅡ区第6位氨基酸密码子C→G的转换,导致丝氨酸Ser→半胱氨酸Cys的变化,这1额外的半胱氨酸将有可能参与形成1个分子间二硫键;用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE及Western blotting检测,证实融合蛋白表达成功并主要以包涵体形式存在;粉质结果表明,添加S253-Agli蛋白虽然能够增加面团的带宽及机械耐力系数,却因显著缩短面团稳定时间及形成时间而对面团的粉质参数产生了总体的负面效应。【结论】具有1个额外半胱氨酸残基的α-醇溶蛋白GQ891685增强了面筋弹性,但降低了面筋强度。
- 李敏高翔陈其皎董剑赵万春王明霞
- 关键词：陕253融合蛋白原核表达
- GW3-1和IND109标记对普通小麦粒重的QTL定位分析(英文)被引量：8
- 2008年
- 应用一个由115个系组成的W7984/Opata85的重组自交系(RIL)群体,建立了一个由394个(292个RFLP、94个SSR和8个特殊的基因杂交探针)DNA分子标记组成的遗传连锁图,对小麦千粒重进行了单个标记的回归分析和复合区间作图的QTL定位,在单个标记的回归分析中检测到11个千粒重的QTLs(P<0.01);复合区间作图分析结果表明,其中4个标记bcd348a、GW3-1、IND109和Rz2的遗传效应较大,其贡献率分别为9.1%、19.0%、8.07%和8.14%,分别位于小麦的2BS、4AL、5BL和7DS上,特别是在水稻第3条染色体上控制籽粒大小的GW3-1和IND109分别位于小麦4A和5B染色体的长臂端.研究结果对小麦应用分子标记辅助选择或分子克隆基因有重要的参考价值.
- 李学军李立群王辉Mark E.Sorrells
- 关键词：小麦数量性状位点重组自交系千粒重
- 小麦品种陕253低分子量谷蛋白亚基基因的克隆及原核表达被引量：11
- 2009年
- 利用LMW-GS特异引物,从强筋小麦品种陕253中克隆了1个1498bp的片段(GenBank登录号为FJ172533),该片段包含全长为912bp的低分子量谷蛋白亚基的完整编码序列。经比较推导氨基酸序列的同源性,发现该基因属于Glu-D3位点编码低分子量谷蛋白亚基的基因,编码产物N-端具有LMW-m型低分子量谷蛋白亚基的典型特征,系统演化分析也支持这一结果。构建了该基因的表达载体pET32a-GluD3-S253,在宿主菌E.coli Rosetta-gami B(DE3)中经IPTG诱导表达融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,证实融合蛋白表达成功。
- 吴丹高翔于旭董剑赵万春陈其皎庞红喜李哲清
- 关键词：小麦低分子量谷蛋白亚基融合蛋白原核表达
- 小麦品种陕253γ-醇溶蛋白基因的克隆、原核表达与功能鉴定被引量：5
- 2011年
- 利用设计合成的特异γ-醇溶蛋白基因引物,采用PCR方法从小麦品种陕253克隆获得一个γ-醇溶蛋白基因(GenBank登录号为GQ857626)。序列分析表明,该基因编码产物的II区由于碱基转换产生一个额外的半胱氨酸残基。构建了GQ857626的原核表达载体并转入表达菌株E.coli Rosetta gami B(DE3),IPTG诱导其成功表达。使用HisTrap HP组氨酸标记亲和层析柱纯化该基因的表达产物,并使用4 g粉质仪分析其功能。结果显示,将此纯化蛋白通过氧化还原反应整合到基础面粉后,面团的形成时间缩短,稳定时间减少,弱化度增加,导致主要的粉质指数明显下降,说明该亚基对面团流变学性质整体表现不利。
- 王明霞高翔陈其皎董剑赵万春李艳亮李敏
- 关键词：普通小麦粉质参数
