甘肃省自然科学基金(096RJZA035)
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
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- 大豆过氧化物酶基因在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2010年
- 大豆过氧化物酶(Soybean peroxidase,SBP)是一类主要催化过氧化氢的氧化还原酶,具有耐热性高和pH适用范围宽等优点。利用已构建好的重组表达载体pPICZα-A-sbp,通过氯化锂化学转化法将重组质粒转化进入毕赤酵母GS115中,并在甲醇诱导下进行表达。利用SDS-PAGE法和愈创木酚法测定了重组菌株的SBP表达活性。结果显示,重组毕赤酵母表达了分子量约为40 KD的SBP蛋白,同时发酵24 h后SBP表达活性开始迅速增高,发酵72 h SBP表达活性达到最大,并筛选出表达活性高的菌株。
- 曾家豫刘芙蓉廖世奇王黎袁红霞王宇仙张渭波
- 关键词：大豆过氧化物酶毕赤酵母基因表达
- 大豆过氧化物酶基因的克隆及其表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 大豆过氧化物酶(soy bean peroxidase,sbp)基因的克隆及其表达载体的构建将有利于人们更深入的从分子生物学角度研究sbp基因的结构与功能。首先从大豆根中获取总RNA,通过RT-PCR获得sbp基因。再将sbp基因与表达载体pPICZα-A双酶切后连接,构建重组表达载体pPICZα-A-sbp。将pPICZα-A-sbp转化大肠杆菌筛选阳性克隆体并测序。结果表明:获得的sbp基因序列与已报道的sbp[U51191(GmEpa1)]基因序列有92%的同源性。重组表达载体pPICZα-A-sbp的成功构建为其在毕赤酵母中表达奠定了基础。
- 曾家豫袁红霞廖世奇周思彤梁琼
- 关键词：大豆过氧化物酶基因克隆
- 大豆过氧化物酶基因随机突变文库的构建被引量：2
- 2011年
- 为提高大豆过氧化物酶(soybean peroxidase,SBP)的活性及研究该酶一级结构与酶活性间的关系,采用连续易错PCR方法对大豆过氧化物酶基因(sbp)进行了2轮随机突变,将第二轮易错PCR产物与质粒载体pPICZα-A分别进行双酶切,经T4DNA连接酶催化连接后,CaCl2法转化重组质粒pPICZα-A-sbp至大肠杆菌DH5α中,成功构建出sbp随机突变文库,库容量约为1.77×106 cfu。
- 曾家豫郑群廖世奇王黎袁红霞杨海棠张丽琼张宁
- 关键词：大豆过氧化物酶易错PCR基因文库随机突变酶定向进化
