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环丙沙星偶联物的制备及其产物的鉴定被引量：7: 2008年; 采用碳二亚胺法,制备了环丙沙星-小牛血清蛋白偶联物,评价了pH、环丙沙星和碳二亚胺浓度对偶联结合比率的影响。同时采用红外光谱、紫外光谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱方法对偶联产物的基团、分子量等特征进行分析鉴定。正交试验结果表明,pH对环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联结合比率具有显著性差异,碳二亚胺和环丙沙星浓度差异性不显著。在pH5.0,碳二亚胺和环丙沙星浓度分别为60mg/mL和5mg/mL的条件下,环丙沙星-小牛血清蛋白偶联结合比率为30∶1。该方法条件下的偶联反应成功。结论:该方法可用于环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联,且简便易行。; 黄宣运胡鲲方伟金怡杨先乐; 关键词：环丙沙星偶联

氯霉素单克隆抗体的研制及其特性分析被引量：1: 2010年; 为了研制氯霉素单克隆抗体,建立氯霉素的简便有效的检测方法。采用碳二亚胺(EDC)方法制备氯霉素免疫抗原和包被抗原,经SDS-PAGE凝胶电泳,三硝基苯磺酸(TNBS)法鉴定表明偶联成功。采用制备的抗原CAP-HS-BSA((CAP-HS,氯霉素琥珀酸酯;BSA,牛血清白蛋白)免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株抗氯霉素的杂交瘤细胞株,细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。经体内诱生法产生腹水,ELISA检测纯化腹水的效价为1∶106。抗体的亲和常数分别为:1.13×1010L/mol,1.41×1010L/mol。ELISA检测显示这2株单克隆抗体与氯霉素琥珀酸交叉反应率为300%,与其他抗生素及结构类似物的交叉反应小,表明该单抗可满足建立免疫学检测方法的需要和开发应用的要求。; 方伟姜有声黄宣运胡鲲杨先乐; 关键词：氯霉素单克隆抗体

基于单克隆抗体的酶联免疫法与高效液相色谱法检测水产品中环丙沙星残留的比较被引量：2: 2010年; 为了快速、灵敏地检测禁用药物环丙沙星在水产品中的残留,建立了基于单克隆抗体的间接竞争酶联免疫法(competitive indirect ELISA,ci-ELISA),并比较了其与高效液相色谱法(High Performance LiquidChromatography,HPLC)在灵敏度、准确性和重现性等方法学参数上的差异。实验结果显示,经过浓缩、净化等前处理过程,ci-ELISA与HPLC的检测灵敏度分别可以达到10μg/kg和1μg/kg,回收率分别为79.28%～92.92%和86.27%～97.32%,相对标准偏差分别在3.21%～8.88%和2.66%～5.52%。前者经济、高效,适合作为初筛方法大批量筛选样品;后者灵敏度、重现性更好,适于在实验室条件下作为验证方法。; 胡鲲黄宣运姜有声方伟朱泽闻杨先乐; 关键词：环丙沙星水产品高效液相色谱法

氯霉素人工抗原的合成与鉴定被引量：7: 2009年; 采用重氮化法和碳二亚胺(EDC)法合成了氯霉素人工抗原。经紫外光谱法、电泳鉴定表明偶联成功;采用三硝基苯磺酸法测得载体蛋白-εNH3+残基利用率分别为31.02%、22.27%,偶联物的结合比为18.9、13.6;制备的抗原分别免疫小白鼠获得多克隆抗体,血清效价可达10-6以上。经比较,碳二亚胺法更适于氯霉素人工抗原的制备。; 方伟胡鲲姜有声黄宣运杨先乐; 关键词：氯霉素人工抗原

环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定被引量：7: 2010年; 通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA),用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物。利用制备的CIP-BSA偶联物作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,用杂交瘤技术制备环丙沙星单克隆抗体,并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定。结果表明:CIP-BSA的偶联比为30:1。经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选,共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1、JY-2)。这两株细胞的腹水经纯化后的抗体效价分别为5.12×106、2.56×106,亲和力常数分别为2.88×109、2.46×109L/mol,两抗体均为IgG1a,取亲和力高的JY-1进行竞争抑制测定,IC50值可以达到9.83ng/mL。该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为95%。通过验证得到的JY-1细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测。; 杨先乐黄宣运胡鲲方伟王炼姜有声; 关键词：环丙沙星半抗原抗体免疫

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析被引量：6: 2010年; 目的:制备环丙沙星单克隆抗体,并分析其免疫学特性,为建立环丙沙星残留的免疫学检测方法服务。方法:用人工抗原环丙沙星-小牛血清白蛋白偶联物免疫BALB/c小鼠,产生预期免疫应答后,将小鼠脾细胞与瘤细胞融合,经初筛、复筛和再克隆,筛选得到1C9、3F6、6H2、6A7、6G11和8F56株分泌环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞。对单克隆抗体的亚型、纯度、亲和力、灵敏度及特异性等免疫学特性进行鉴定和分析。结果:1C9、3F6和6A7的抗体亚型为IgG2a;6H2和8F5的抗体亚型为IgG1;6G11的抗体亚型为IgG3。SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50kD,轻链分子量约为25kD。6株细胞产生的单抗均具有良好的特异性和灵敏度。其中,细胞株1C9细胞培养上清和腹水效价分别为1∶6.4×102和1∶5.6×105,亲和力常数可达2.85×109L/mol,IC50值可达245.86ng/ml,最低检测限为45.25ng/ml,对氧氟沙星、双氟沙星、沙拉沙星、左氧氟沙星、孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林等药物几乎不存在交叉反应,与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为84.6%。结论:本方法制备的环丙沙星单克隆抗体具有较好的亲和力和特异性,可用于环丙沙星残留免疫学检测。; 胡鲲黄宣运姜有声方伟杨先乐; 关键词：环丙沙星单克隆抗体

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上海市科技兴农重点攻关项目(6660106477)