陕西省科技攻关计划(2004K10-G4)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：苏明权李立文于文彬张惠中郝晓柯更多>>
- 相关机构：第四军医大学唐都医院第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鼠高迁移率族蛋白1A盒基因的克隆和原核表达被引量：1
- 2007年
- 目的:克隆小鼠高迁移率族蛋白1A盒(HMGB1 A box)cDNA,并在大肠杆菌中表达GST-A盒融合蛋白。方法:从鼠肺提取总RNA,经RT-PCR获得HMGB1 A盒基因。将该基因插入pGEX-4T-2载体的BamHI和EcoRI位点之间并测序鉴定,转化BL21(DE3)后30℃IPTG诱导表达5h,进行SDS-PAGE分析。结果:DNA测序证明,获得了HMGB1 A盒基因,其序列与GenBank中报道序列基本一致。SDS-PAGE分析表明,HMGB1 A盒与GST融合蛋白获得成功表达,分子质量约36KD,表达量约占菌体总蛋白的15%,结论:通过RT-PCR成功克隆和表达了鼠HMGB1 A盒基因。
- 姜南艳于文彬张惠中郝晓柯苏明权李斌李立文
- 关键词：聚合酶链反应基因表达
- HMGB1 A盒与LBPK95A融合基因的构建和原核表达
- 2008年
- 目的克隆、表达高迁移率族蛋白1A盒(HMGB1A box)与LBPK95A的融合基因。方法经加端-PCR获得HMGB1A盒与LBPK95A的融合基因。该基因克隆到pGEX-4T-2载体中转化TOP10感受态细胞,测序鉴定。将A-LBP质粒转化E.coliBL21,30℃诱导表达4h,超声裂解后经GSTrapFF蛋白纯化柱纯化,进行SDS-PAGE分析。结果DNA测序证明,获得了HMGB1A盒与LBPK95A的融合基因。SDS-PAGE分析表明,A-LBP融合蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的28,GSTrapFF纯化后获得目的蛋白。结论成功表达和纯化了HMGB1A盒与LBPK95A的融合蛋白。
- 姜南艳于文彬苏明权沈建军李立文郝晓柯张惠中
- 关键词：HMGB1基因表达纯化
