国家高技术研究发展计划(2007AA02Z402)
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 相关作者：严家新明平刚黄思佳扈荣良唐青更多>>
- 相关机构：武汉生物制品研究所中国疾病预防控制中心军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 1例特殊的疑似狂犬病死亡病例的实验室检测和确诊被引量：1
- 2008年
- 目的采用实验室检测方法确诊一例特殊的疑似狂犬病病例。方法利用荧光抗体(FA)试验、双抗体夹心ELISA和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对一例死亡的疑似狂犬病人的脑组织和此脑组织经乳鼠脑内接种传代后的鼠脑组织分别进行检测和分析。结果死亡病人脑组织的直接FA试验和双抗体夹心ELISA检测为阴性,但RT-PCR检测结果为阳性。将该病人脑组织经乳鼠传代后对鼠脑组织用上述三种方法检测的结果均为阳性。对该街毒株的RT-PCR产物中的核蛋白基因序列进行测定,用Mega3.1软件进行分子进化关系分析,证实所分离的街毒株为基因Ⅰ型狂犬病病毒,与以往在该地区所分离的街毒株有较近的遗传关系。结论该病例可确诊为狂犬病死亡病例,其主要和决定性的死因为狂犬病,但并发的肺部感染可能加速了死亡的进程。WHO认为FA技术是狂犬病诊断的金标准,但本病例说明,在某些复杂情况下,只有将多种实验室检测方法联合运用才能确诊狂犬病,而且病毒分离和RT-PCR可能比FA试验更敏感。
- 明平刚徐葛林严家新吴杰任长庆董平国
- 关键词：狂犬病病毒RT-PCR
- 现代狂犬病疫苗生产用细胞和毒种：现状和前景被引量：5
- 2012年
- 对全球狂犬病预防控制的一个主要挑战是不能充分供应廉价优质的狂犬病疫苗。基于神经组织生产狂犬病疫苗的技术早已过时，现代细胞培养技术提供了适当的病毒培养基质，可以获得高滴度病毒和大规模生产高质量的现代狂犬病疫苗。目前人用疫苗仅使用灭活疫苗，用高度适应细胞的稳定的减毒狂犬病病毒生产的疫苗将是未来的理想疫苗。
- 王月黄思佳严家新
- 关键词：狂犬病狂犬病疫苗VERO细胞
- 狂犬病毒街毒株全长基因cDNA克隆的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 利用分子克隆的方法,将狂犬病毒街毒株的全基因组分为4个片段按照它们基因组上的顺序克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(GFP)的核苷酸,构建出表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组狂犬病毒HN10株全长基因组cDNA真核表达质粒,同时,在全长cDNA的两侧嵌入锤头状核酶(HamRz)和丁型肝炎病毒核酶(HdvRz)的序列,并置于CMV启动子的控制下,为下一步拯救出该嵌合病毒提供了可直接使用的全长cDNA真核表达质粒。
- 明平刚黄莹唐青杜加亮陶小燕严家新扈荣良
- 关键词：狂犬病毒全长CDNA克隆
- 狂犬病减毒活疫苗的研究进展被引量：1
- 2008年
- 减毒活疫苗是新一代狂犬病疫苗的发展方向,应用最近十余年发展起来的反向遗传学技术,有可能在不久的将来,研制出高效、安全、廉价且使用方便的狂犬病减毒活疫苗。本文就反向遗传系统及4种类型的狂犬病减毒活疫苗的研究进展作一简要综述。
- 明平刚罗静严家新
- 关键词：狂犬病减毒活疫苗反向遗传学
- 我国分离的10株狂犬病病毒P和M蛋白基因序列分析被引量：2
- 2012年
- 目的探讨我国狂犬病病毒P、M蛋白基因序列的结构特点及变异情况。方法用RT-PCR方法从分离的10株具有代表性的狂犬病病毒中获得目的基因片段,测定核苷酸序列后,利用生物信息学软件分析核苷酸、氨基酸序列及其相关的功能位点并构建P、M蛋白基因的系统发育树。结果 10株病毒P和M基因核苷酸序列同源性分别为85.9%～99.4%和89.5%～99.5%,推导出的氨基酸同源性分别为92.3%～100%和96.0%～99.5%。在核苷酸及氨基酸水平上,10株病毒与我国分离的街毒株HN10及CTN疫苗株的P、M基因同源性均明显高于国外其它疫苗株、标准攻击毒CVS株相应的同源性。系统发育分析表明,10株病毒与我国湖南街毒株、CTN疫苗株进化关系最近,而与研究中选取的其他毒株进化关系较远。氨基酸对位分析表明,与其它基因1型毒株相比,本研究中10株狂犬病病毒的P、M基因出现多处变异,但很少在功能区发生变异。结论分离的10株病毒属基因l型狂犬病病毒,与我国分离的街毒株及CTN疫苗株关系较近。
- 解庭波黄思佳明平刚吴杰徐葛林严家新
- 关键词：狂犬病病毒P基因M基因
- HEP-Flury株病毒辅助质粒包装CTN株病毒基因组拯救狂犬病病毒
- 2009年
- 目的以CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒（pCTN-GFP）和HEP-Flury株病毒N、P、L辅助质粒共转染拯救具有活性的CTN株重组狂犬病病毒（CTN-GFP）。方法将CTN株狂犬病病毒全长基因组分4段进行扩增，体外连接扩增片段并克隆人表达载体中，构建CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒，基因组ψ基因被标识基因GFP取代，通过与HEP-Flury株病毒N、P、L3个辅助质粒共转染BHK-21细胞，拯救能够稳定表达GFP的重组病毒CTN-GFP。结果成功扩增全长基因组的4个基因片段，并将其克隆入表达载体，构建了CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒pCTN-GFP，经酶切鉴定和序列测定证明pCTN-GFP为正确克隆，可直接用于病毒拯救。将pCTN-GFP与HEP-Flury株病毒辅助质粒共转染BHK-21细胞4d后，成功拯救出CTN株重组狂犬病病毒，重组病毒能够表达标识基因GFP，荧光显微镜下可直接观察到标识基因GFP的表达，设计跨GFP和L基因的特性引物对重组病毒进行RT-PCR检测，结果证明此病毒是从克隆的质粒中拯救的重组病毒。结论HEP-Flury株病毒的结构蛋白能够包装并转录CTN株病毒的基因组RNA。
- 黄莹唐青扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒结构蛋白病毒拯救
