湖南省科技计划项目(2009FJ3180)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：卢光琇彭琳王建更多>>
- 相关机构：中南大学国家工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人羊膜上皮细胞的分离培养及其免疫原性初步研究被引量：2
- 2011年
- 目的:分离培养人羊膜上皮细胞(HAEC),通过与同种异体淋巴细胞混合培养探讨HAEC的免疫原性,为进一步的临床研究提供指导。方法:体外分离培养HAEC,透射电镜观察细胞超微结构,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞免疫荧光方法检测上皮细胞相关基因及细胞表面标记细胞角蛋白CK18表达情况。与同种异体外周血来源淋巴细胞建立混合淋巴细胞(the mixed lymphocyte reaction,MLR)反应体系,通过MTT法检测细胞增殖率。结果:分离得到的HAEC具有上皮细胞特异性的微绒毛结构,表达上皮细胞相关基因CDH1,claudin 3和claudin 4,并表现为细胞角蛋白CK18阳性。MTT分析检测OD值结果显示,在HAEC细胞与淋巴细胞浓度分别为1∶2 000,1∶200和1∶20时各组的OD值分别为0.074±0.022,0.049±0.012和0.019±0.011。结论:从羊膜中分离得到的HAEC表达CK18,且免疫原性较低。
- 彭琳王建卢光琇
- 关键词：细胞培养技术上皮细胞羊膜逆转录聚合酶链反应荧光免疫测定
- 人羊膜间充质细胞的分离培养及向胰岛样细胞诱导分化被引量：8
- 2011年
- 目的分离培养人羊膜间质细胞(hAMCs),初步探讨其向胰岛样细胞的诱导分化。方法羊膜组织经胰蛋白酶消化去除上皮细胞后,采用胶原酶I联合中性蛋白酶的方法分离hAMCs。细胞免疫荧光检测分离得到细胞表面标记Vimen-tin+,SSEA-4+表达;流式细胞仪检测CD29,CD90及CD34,CD45表达;RT-PCR检测ACTG2、ACTA2、MMP2、Cripto、Sox2、LEFTYA、nanog、Oct-4基因表达;添加诱导因子诱导hAMCs向胰岛样细胞分化。结果分离得到的hAMCs可体外长期传代,并保持稳定的遗传学特性;细胞表现vimentin+、SSEA-4+;CD29、CD90表达量分别为91.5%±9.93%和48.7%±9.47%;不表达CD34,CD45;表达ACTG2、ACTA2、MMP2和Cripto、Sox2、LEFTYA、nanog、Oct-4等基因。诱导后的细胞表达insulin、PDX1、ngn3、glucagon等基因,并表现insulin+。结论建立了人羊膜间充质细胞的分离培养方法;在体外可诱导分化为胰岛样细胞。
- 彭琳王建卢光琇
- 关键词：干细胞特性胰岛样细胞诱导分化
- 人羊膜上皮细胞干细胞特性及向胰岛素分泌细胞分化的研究被引量：6
- 2011年
- 目的建立人羊膜上皮细胞(hAECs)的分离及培养方法,探讨其向胰岛素分泌细胞分化的能力。方法观察不同培养方法对hAECs生长倍增时间的影响以优化其培养体系;通过细胞免疫荧光法检测不同培养代数细胞多能干细胞的表面标记;通过体外添加诱导因子的方法,探讨诱导hAECs向胰岛素分泌细胞分化的潜能。结果在10 ng表皮生长因子培养下,hAECs可长期传代。hAECs表达胚胎干细胞表面标记如阶段特异性胚胎抗原4等;采用悬浮培养法诱导分化,可检测到胰岛发育、胰岛功能基因如胰腺十二指肠同源盒、神经源素3、同源异形盒转录因子6、胰岛素、胰高糖素的表达,免疫组化检测细胞可以表达胰岛素,并且随着外界葡萄糖浓度升高,胰岛素分泌显著增加。结论建立了人羊膜上皮细胞的分离和培养方法(不添加动物血清);在体外可诱导分化为胰岛素分泌细胞。
- 王建彭琳卢光琇
- 关键词：人羊膜上皮细胞胰岛素分泌细胞横向分化
