山东省科技攻关计划(031020101)
- 作品数：9 被引量：45H指数：4
- 相关作者：沈志强李书光王金良唐娜莫玲更多>>
- 相关机构：山东省滨州畜牧兽医研究院山东省农业科学院山东师范大学更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 一步法复合RT-PCR鉴别ND强毒与AI病毒的研究被引量：3
- 2005年
- 根据新城疫病毒(NDV)融合蛋白和禽流感病毒(AIV)核蛋白的核酸序列设计2对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156 bp和219 bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT-PCR。试验中未能检出弱毒力NDV,IBV,IBDV,REV,REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性。经验证,复合引物与单一引物的扩增效率一致,能够检出NDV和H5亚型AIV的最低病毒量分别为103.7EID50和103.9EID50。试验结果表明,此次建立的一步法复合RT-PCR特异、敏感,适用于强毒力NDV和AIV感染的快速鉴别。
- 黄兵马秀丽宋敏训王莉莉李峰陈溥言
- 关键词：新城疫病毒禽流感病毒分子检测
- 一株鸡源猪葡萄球菌的分离与鉴定被引量：4
- 2012年
- 为进一步研究引起蛋鸡产蛋下降的病原菌的致病机理,本研究从患有输卵管炎的蛋鸡输卵管中分离到一株革兰氏阳性球菌,通过培养形态观察和生化试验进行初步鉴定,并采用PCR扩增其16S rRNA基因序列进行测序,与GenBank中登录的已知序列进行比对分析,结果显示该菌与猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)在进化关系上的距离最近,同源性达到99.5%以上,表明该分离株为S.hyicus。并通过小鼠毒力试验和蛋鸡回归试验对该分离株的致病力研究,表明该菌对小鼠无致病性,但可以引起生殖系统病变,导致产蛋能力下降。
- 唐娜莫玲孙翠平李书光苗立中曲光刚沈志强
- 关键词：猪葡萄球菌蛋鸡RRNA毒力试验
- 产肠毒素性大肠埃希菌主要毒力因子及疫苗的研究进展被引量：7
- 2007年
- 产肠毒素性大肠埃希菌是目前幼畜腹泻的主要致病因素。文章综述了在畜牧业中产肠毒素性大肠埃希菌的主要致病因子黏附素和肠毒素、EatA及其生化特性,并介绍了产肠毒素性大肠埃希菌的传统灭活苗及新型基因工程疫苗的研究进展。
- 李书光沈志强肖跃强管宇王金良
- 关键词：黏附素肠毒素灭活疫苗
- 新城疫病毒分离株P基因的分子特性和遗传进化被引量：4
- 2009年
- 【目的】探讨新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）磷蛋白基因（P基因）的分子进化特点，为科学防控新城疫（Newcastle disease，ND）提供依据。【方法】对1997～2007年国内分离的13个NDV毒株的P基因进行扩增测序，与15个已发表的国内外不同时期的NDV毒株P基因进行核苷酸和推导的氨基酸遗传变异分析及分子特性研究。【结果】国内NDV分离株P基因核苷酸和P蛋白氨基酸高度同源，同源性分别为93．9％～99．8％和93．4％～99．2％。国内NDV毒株与LaSota、Clone30和F48E9等P基因核苷酸和P蛋白氨基酸同源性分别为82．2％～87．7％，81．3％～83．8％；与国外毒株则分别为82．1％～90．2％，81．1％～90．7％。氨基酸序列分析表明，我国毒株具有独特的氨基酸位点。分子进化分析表明，NDVP基因中核苷酸同义替代率高于非同义替代率。【结论】国内分离NDV毒株P蛋白遗传距离较近，而与LaSota、Clone30、F48E9以及国外毒株遗传距离较远，有一定的地域性。NDVP基因以净化选择的方式进化。
- 梁俊文田夫林黄兵兰邹然孙圣福庄文忠
- 关键词：新城疫病毒P基因
- 雏鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定和荚膜PCR分型被引量：4
- 2011年
- 本研究从河南某肉鸭养殖场感染鸭肝炎病毒的10日龄病死鸭肝脏中分离到一株致病菌,经菌落形态学观察、培养特性、生化反应、致病性回归试验和SPF鸡攻毒试验,结合多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)kmt1种特异性基因检测方法进行鉴定,并通过16SrRNA序列测定进行同源性分析。结果显示该分离株为Pm,命名为Pm-Y。致病性回归试验表明低浓度的Pm-Y只引起部分10日龄雏鸭发病死亡。SPF鸡攻毒试验显示,Pm-Y与国内标准强毒株C48-1的致病力相近,16SrRNA序列系统发育树分析表明Pm-Y与Pm多杀亚种和杀禽亚种亲缘关系最近。参考荚膜血清特异性基因hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ和fcbD合成引物,扩增荚膜血清型特异性基因,对Pm-Y进行荚膜分型鉴定为A型Pm。本研究是国内首例从感染鸭肝炎病毒10日龄雏鸭肝脏中分离到Pm的报道。
- 孙翠平王金良李书光赵蕾贾娟莫玲沈志强
- 关键词：多杀性巴氏杆菌
- 兔F型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其致病性被引量：15
- 2012年
- 对从山东某獭兔养殖场病死仔兔肺中分离的1株疑为巴氏杆菌菌株进行了菌落形态学观察及培养特性、革兰氏染色、生化反应、仔兔致病性回归试验、小鼠毒力试验,并采用PCR方法对该分离株进行了种属及荚膜血清型鉴定。结果显示,该分离菌株革兰氏染色阴性,生化试验及PCR鉴定结果显示为F型多杀性巴氏杆菌,能引起獭兔仔兔肺出血、坏死,并致部分仔兔死亡。表明该分离菌株为比较少见的兔F型多杀性巴氏杆菌。
- 张娜李书光陈金龙王金良胡琳琳沈志强
- 关键词：多杀性巴氏杆菌
- 大肠杆菌K_(99)-ST_1双价基因工程菌株的构建及其免疫原性被引量：2
- 2009年
- 为了有效预防肠毒素性大肠杆菌引起的犊牛和羔羊腹泻,利用基因工程技术构建了融合基因K99-ST1及其原核表达载体,并对融合蛋白进行了初步免疫原性分析。结果显示,将PCR获得的K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段借助pUCm-T载体,成功构建重组质粒pUCm-K99-ST1,从而获得融合基因K99-ST1;使用EcoRⅠ+SalⅠ双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET30a中,成功构建表达载体pET-K99-ST1;将该表达载体转入表达菌株BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到大小约31000的蛋白;Western blotting显示,融合蛋白可以特异的与K99阳性血清反应;将BL21(DE3,pET-K99-ST1)诱导表达后免疫兔,ELISA检测K99抗体水平较高,乳鼠灌胃试验显示该菌株免疫后产生ST1抗体。这表明本试验已成功构建大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株BL21(DE3,pET-K99-ST1),该菌株具有良好的免疫原性,为大肠杆菌K99-ST1双价基因工程疫苗开发奠定了基础。
- 李书光管宇肖跃强王金良沈志强
- 关键词：大肠杆菌融合蛋白免疫原性
- 猪胸膜肺炎放线杆菌分子生物学研究进展被引量：7
- 2011年
- 猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuro—pneumoniae，APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（Porcine infectious pleuropneumonia）的致病菌，属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属。猪胸膜肺炎放线杆菌是一种革兰氏阴性杆菌，具有很高的致病性，由本菌引起的猪接触性传染性胸膜肺炎是猪的呼吸道传染病，各种年龄的猪均易感，本病在临床上常见，一旦发生感染则很难从猪场中根除。
- 吕素芳郭广君唐娜魏凤沈志强
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌分子生物学革兰氏阴性杆菌呼吸道传染病嗜血杆菌属
- 肠毒素性大肠杆菌K_(99)-ST_1融合基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2008年
- 为有效预防肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起的犊牛和羔羊腹泻,将PCR扩增获得的ETEC K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段,借助pUCm-T载体,构建了重组质粒pUCm-K99-ST1,从而获得了融合基因K99-ST1;使用EcoRⅠ+SalⅠ双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET-30a中,成功构建了表达载体pET-K99-ST1,将其转入表达菌株BL21(DE3)中,经IPTG诱导,获得31 ku的蛋白;Western-blot-ting结果显示,该融合蛋白可与K99阳性血清发生特异性反应。
- 李书光管宇肖跃强王金良沈志强
- 关键词：大肠杆菌融合蛋白
