河南省自然科学基金(0511042300)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 相关作者：王天云昝玉玺张俊河王俐杨保胜更多>>
- 相关机构：新乡医学院郑州大学南京医科大学更多>>
- 发文基金：河南省自然科学基金国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 雷公藤多甙抗大鼠原位肝移植急性排斥反应研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨雷公藤多甙的免疫抑制作用，以及其诱导免疫耐受作用。方法该实验应用肝移植120只SD大鼠，分为四组：对照组（A组），TII组（B组），CsA组（C组），TII＋CsA组（D组）。分别于术后1、3、5、7、14d检测外周血的IL-2R的含量和脾脏淋巴细胞IL-2、IL-10的活性表达及脾脏组织CD4^＋、CD25^＋、CD8^＋、CD28^＋的蛋白表达。结果三组治疗组的IL-2活性和IL-2R含量均明显低于对照组。三组治疗组问的比较是D组低于B、C组；三组治疗组的IL-10活性明显高于对照组，三组治疗组也有显著差异。即D组高于C组，C组高于B组，上述均有统计学意义（P〈0．05）。三组治疗组的CD4^＋、CD25^＋、CD8^＋、CD28^＋的蛋白活性表达均高于对照组，而CD28^＋的蛋白活性表达却相反。三组治疗组间的CD4^＋、CD28^＋的比较，均有显著性差异（P〈0．05）。结论雷公藤多甙不但具有免疫抑制作用，而且还能够诱导一定程度的免疫耐受。
- 张业伟孟庆洋王学浩薛涣洲
- 关键词：肝移植雷公藤多甙免疫耐受排斥反应
- 人β-干扰素核基质附着区在CHO细胞中对转基因表达的调控被引量：5
- 2008年
- 背景:核基质附着区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列,不仅可影响邻近内源基因的表达,还能克服转基因沉默,提高外源基因的转录与表达。目的:探讨在CHO细胞中β-干扰素核基质附着区对氯霉素乙酰转移酶转基因表达的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-04在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。材料:CHO细胞株由中国典型培养物保藏中心提供。含氯霉素乙酰转移酶报告基因及G418筛选标记的质粒pCATG载体由本实验室构建。方法:将PCR扩增得到的人β-干扰素核基质附着区分别用SacI/KpnI及BamHI/SalI酶切,连接至用相应内切酶酶切的pCATG载体上,转化E.coliJM109,提取质粒行酶切电泳,将构建好的载体命名为pCAT-MAR,该载体含氯霉素乙酰转移酶报告基因表达盒及两侧的β-干扰素核基质附着区。分别用载体pCATG及pCAT-MAR转化CHO细胞,提取具有G418抗性的细胞株基因组DNA,PCR扩增氯霉素乙酰转移酶基因。主要观察指标:ELISA法分析氯霉素乙酰转移酶报告基因的表达。PCR法检测pCAT-MAR载体是否稳定整合在宿主基因组上。结果:①pCATG转化的CHO细胞共筛选出16个阳性细胞株,pCAT-MAR转化的CHO细胞筛选出17个阳性细胞株。β-干扰素核基质附着区可使氯霉素乙酰转移酶报告基因表达水平提高2.8倍,pCATG转化CHO细胞的变异系数为2.0650,pCAT-MAR转化CHO细胞的变异系数仅为0.8131。②稳定转化的细胞株基因组DNA均扩增出437bp目的片段,证明pCAT-MAR载体已经稳定整合到基因组上。结论:β-干扰素核基质附着区能提高转基因在CHO细胞的表达水平,并且可降低不同转化细胞株之间转基因表达的差异性。
- 昝玉玺王天云张俊河王俐
- 关键词：核基质结合区基因沉默报告基因
- CHO细胞MAR片段的克隆及其逆转录载体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的构建重组人促红素(CHO)细胞核基质结合区MAR的逆转录载体。方法以CHO细胞DNA为模板,采用PCR扩增CHO细胞的MAR序列,克隆入逆转录表达载体PLXSN-CAT中,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析鉴定目的基因。结果PCR扩增的特异性片段长度为476 bp,以此构建的重组质粒PLXSN-CAT-MAR经BamHⅠ酶切后显示为5.9 kb和476 bp左右的两条片段,测序结果与Gen-bank中的CHO细胞MAR基因(Genbank序列号M62716)序列一致。结论成功构建了CHO细胞MAR片段PLXSN-CAT-MAR重组逆转录表达载体。
- 昝玉玺张俊河王天云
- 关键词：核基质结合区基因克隆
- 构建人csp-B核基质结合区克隆及其介导的反转录载体
- 2010年
- 背景:核基质结合区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列。大量实验表明,核基质结合区可以作为DNA复制的起始点或调控基因的转录,构建核基质结合区表达载体能提高外源基因表达水平,增强外源基因表达的稳定性及提高转化细胞稳定株的频率等。目的:通过克隆人基因组不同的核基质结合区片段,构建核基质结合区介导的包含氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因的反转录病毒载体pLXSN-MAR,以探索核基质结合区对基因表达的影响。方法:开放性实验于2007-01/12在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。自行构建含氯霉素乙酰转移酶报告基因的质粒PLXSN-CAT载体。TaqDNA聚合酶、T4DNA连接酶、DNAMarker、限制性内切酶BamHⅠ、凝胶纯化试剂盒、质粒提取试剂盒均购于大连TaKaRa公司;引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。以人基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应扩增csp-B核基质结合区序列,克隆入反转录载体PLXSN-CAT中,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析鉴定目的基因。结果与结论:聚合酶链反应扩增的特异性片段长度为931bp,以此构建的重组质粒命名为PLXSN-CAT-MAR,经BamHⅠ酶切后显示5.9kb和931bp左右的两条片段,测序结果与Gen-bank中的人csp-B核基质结合区(Genbank序列号M62716)序列一致,证明人核基质结合区片段已成功克隆到了反转录载体PLXSN-CAT中。提示成功构建了PLXSN-CAT-MAR反转录表达载体。
- 昝玉玺王俐张俊河王天云
- 关键词：核基质结合区基因克隆
- 人珠蛋白MAR序列的克隆与表达载体pCAT-MAR的构建被引量：4
- 2006年
- 目的克隆人β-珠蛋白核基质结合区(matrix attachment regions,MAR),构建包含MAR及报告基因CAT的哺乳动物载体pCAT-MAR。方法酚/氯仿抽提、乙醇沉淀提取人基因组DNA,根据GenBank报道的序列设计引物PCR扩增人β-MAR,琼脂糖凝胶电泳鉴定,测序,软件分析其序列特征。限制酶酶切,连接至pCAT3-control载体上构建pCAT-MAR载体。结果琼脂糖凝胶电泳PCR扩增出770bp条带,序列和报道的序列相似性为99.9%,克隆的DNA片段具备典型的MAR特征。酶切及琼脂糖凝胶电泳证明所构建的pCAT-MAR载体正确。结论PCR克隆了人-β珠蛋白MAR序列,成功构建了包含MAR的表达载体pCAT-MAR。
- 王天云张慧珍
- 关键词：核基质结合区基因沉默报告基因
- 人14-3-3蛋白家族的生物信息学分析被引量：5
- 2007年
- 目的:分析人14-3-3蛋白家族的同源性及分子进化关系。方法:利用已公布的人基因组数据库,采用BLASTN程序检索人14-3-3蛋白家族各成员的编码基因和假基因,并利用DNAMAN软件进行序列联配,绘制其分子进化树。结果:该家族半数成员具有多个假基因序列,为返转座类型假基因。进化分析表明该家族有共同的祖先,可归为3个亚类。结论:人14-3-3蛋白家族每个成员长期进化所形成的多样性提示其功能具有独特性。
- 袁保梅昝玉玺王天云张俊河杨保胜
- 关键词：基因家族进化生物信息学
