广东省自然科学基金(7300180)
- 作品数：3 被引量：3H指数：2
- 相关作者：汪艳高毅康玉占王忠潘明新更多>>
- 相关机构：南方医科大学解放军第458医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脱细胞化肝脏生物衍生支架的制备及鉴定被引量：3
- 2009年
- 背景:肝细胞在体外迅速失去极性及合成代谢障碍成为肝脏组织工程研究需要克服的一个难题,在体外寻找一个有利于肝细胞生长与功能维持的细胞外基质微环境成为目前研究的焦点。目的:制备肝脏去细胞化细胞外基质生物衍生支架,并对该生物衍生支架进行初步鉴定。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-02-15/05-01在广东省脑功能修复与再生研究所完成。材料:10只雄性SD大鼠用于制备去细胞肝脏细胞外基质支架。10只雄性SD大鼠用于制备原代肝细胞。方法:将SD大鼠肝脏切成10mm×5mm的组织片后,经过胰酶-乙二胺四乙酸作用24h、去垢剂曲拉通×10072h后得到肝脏去细胞化生物衍生支架。每只大鼠获取2×108个肝细胞,将所得原代细胞与肝脏去细胞化生物衍生支架放入含DMEM-F12,体积分数为10%胎牛血清,胰岛素0.5U/mL,地塞米松1×10-7mmol/L,表皮生长因子10μg/L的培养基中共培养,并与单纯原代细胞培养相比较。主要观察指标:培养14d时组织块行苏木精-伊红染色,Masson染色进行组织学分析。并行扫描电镜观察。对培养1,3,5,7,9,14d上清液进行白蛋白及尿素水平检测。结果:组织学检查未见明显细胞核残存,大量胶原纤维得到保留,扫描电镜示纤维成网状排列。支架与原代肝细胞共培养上清液白蛋白和尿素水平高于单纯原代肝细胞培养(P<0.05)。结论:利用去垢剂与胰酶-乙二胺四乙酸低渗溶液处理可以有效完整去除肝脏组织块的细胞成分,较完整地保留细胞外基质;该生物衍生支架有利于肝细胞的生长及功能维持。
- 康玉占汪艳高毅
- 关键词：细胞外基质肝组织工程
- 输注自体骨髓间充质干细胞对小型猪异基因移植肝的保护作用研究
- 2009年
- 目的观察经门静脉输注的自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)在移植肝脏中的分布情况和对移植肝脏的保护作用。方法版纳小型猪(供体)和西藏小型猪(受体)各16只配对行肝移植。受体随机分成对照组和处理组,每组8只。对照组只做原位肝移植,处理组在原位肝移植的基础上于术中经门静脉注射1×109个预先经BrdU标记的受体自身BMSCs,术后第3、7、10天静脉采血检测肝功能,术后检测标记的间充质干细胞在肝脏局部的分布状况,同时检测其在脾、肺组织中的分布状况。结果BrdU标记的间充质干细胞主要聚集在移植的肝脏中,脾、肺组织中几乎没有分布。术前两组血清谷氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)比较无明显差异(P>0.05),术后处理组受体血清中AST和ALT总体水平明显低于对照组(P<0.01)。术后第7天,处理组肝组织轻度淤血,血管周围有少量炎性细胞浸润,肝细胞点状坏死,中性粒细胞浸润。而对照组术后第3天,移植的肝脏中可见汇管区大量炎症细胞聚集、肝细胞浑浊、气球样变性,并出现不同程度的点状、灶状坏死。结论肝移植术导致移植肝脏的微环境变化,BrdU标记受体自身BMSCs在肝组织中聚集分布,对移植肝脏有保护作用。
- 王忠汪艳潘明新孔凡东高毅
- 关键词：间质干细胞骨髓移植物排斥
- 去细胞化技术在全肝生物支架建立中的应用被引量：2
- 2009年
- 目的通过去细胞化技术建立保留细胞外基质的完整肝脏支架，并对支架进行形态结构和保留成分鉴定。方法通过门静脉插管，依次灌注去垢剂曲拉通X-100（Triton X-100），十二烷基硫酸钠（SDS），并用磷酸盐缓冲液（PBS）洗脱残留去垢剂，对所得支架进行HE染色、门静脉及胆道铸型、扫描电镜、纤维成分染色鉴定等形态学观察。并将支架切成50μm的厚度后与C3A细胞系共培养，进行生物相容性验证。结果经本实验方案得到肝脏生物支架的成功率为75％。肝脏生物支架包膜完整，肉眼可见肝脏内Gllisson管道结构。HE染色示无细胞及胞核残存。管道铸型见胆道、门静脉完整，无铸型液溢出。扫描电镜示大量纤维网状结构存在。纤维成分染色见大量胶原纤维、弹力纤维存在。生物相容性实验初步显示该支架具备较好的生物相容性，可以作为生物支架材料应用。结论经本实验去细胞化过程，肝组织细胞可从细胞外基质中完全洗脱下来，并保留比较完整的肝脏管道系统。本研究获得全肝生物支架可以作为肝脏器官培养的基础支架。
- 康玉占汪艳高毅
- 关键词：肝脏生物支架
