上海市科学技术委员会资助项目(06DZ19504)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 相关作者：邵志敏翟羽杨银龙张强鸽王福宾更多>>
- 相关机构：复旦大学附属肿瘤医院复旦大学温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目全球变化研究国家重大科学研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人BRMS1干扰质粒的构建及其有效性的鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:构建针对人BRMS1基因的RNA干扰表达载体并检测其有效性,为后续研究提供基础。方法:设计合成针对人BRMS1的特异性si RNA前体寡核苷酸,依次通过退火,连接,构建含前体si RNA的重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-BRMS1-si-RNA。经测序鉴定后,通过脂质体介导将其与pDsRed2-N1-BRMS1质粒(包含BRMS1红色荧光融合蛋白的载体)共转染人胚肾293细胞。分别用倒置荧光显微镜和流式细胞术观察转染细胞中红色荧光蛋白的强度,检测干扰效果。结果:确定了两对针对人BRMS1的si RNA片段。经测序鉴定,两种含前体si RNA的质粒均构建成功。共转染后,倒置荧光显微镜下观察可见,两种si R-NA均能明显降低细胞中BRMS1的表达;用流式细胞仪检测证实,si RNA1及si RNA2分别使BRMS1表达下降67.33%和76.67%,与阴性对照组比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:成功构建了针对人BRMS1基因的si RNA表达质粒,为进一步利用RNA干扰技术研究BRMS1功能与作用机制奠定了基础。
- 杨银龙王福宾张强鸽翟羽邵志敏
- 关键词：乳腺癌转移抑制基因1RNA干扰
- 乳腺癌转移抑制基因1对乳腺癌细胞运动能力的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:研究乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor gene1,BRMS1)对人乳腺癌细胞运动能力的影响。方法:构建BRMS1真核表达载体,利用Lipofectin2000转染肺高转移潜能乳腺癌细胞MDA-MB-231-HM,荧光实时定量PCR检测目的基因表达,Transwell实验检测细胞运动能力。同时,设计3对针对BRMS1的特异小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),通过荧光实时定量PCR筛选出最有效的siRNA,干扰人乳腺癌细胞MDA-MB-231,观察干扰后细胞运动能力的变化。结果:与转染空载体的细胞相比,稳定转染BRMS1的MDA-MB-231-HM细胞穿过膜的数量减少51.9%。筛选出1对有效siRNA能明显下调BRMS1,用此siRNA干扰MDA-MB-231细胞后,其穿过膜的细胞数量增加17.9%。结论:BRMS1能抑制人乳腺癌细胞的运动,提示其可能通过抑制人乳腺癌细胞运动而抑制肿瘤远处转移。
- 杨银龙翟羽邵志敏
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移乳腺癌转移抑制基因1
