国家杰出青年科学基金(39525001)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：田淑芳王志云楚雍烈阮力魏博更多>>
- 相关机构：西安交通大学中国预防医学科学院中国疾病预防控制中心更多>>
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- 二氢叶酸还原酶缺陷型中华仓鼠卵巢细胞偏爱密码子的研究
- 2006年
- 目的研究二氢叶酸还原酶缺陷型中华仓鼠卵巢细胞(CHOdhfr-)的偏爱密码子。方法建立CHOdhfr-细胞高丰度mRNA的cDNA文库,对该文库进行签定以获得合格的编码蛋白质的cDNA序列,统计密码子使用频率并与CUTG数据库中的中华仓鼠比较,同时对所获得的cDNA序列进行对应统计分析。结果获得了50个合格的CHOdhfr-细胞高丰度蛋白的cDNA序列,与中华仓鼠密码子使用频率比较,除了Pro,Arg外,其余氨基酸的最高使用频率的密码子在CHOdhfr-细胞和中华仓鼠中都相同。同时根据对应分析确定了能解释最多变量(14.7%)的第一主成分,确定了22个同义密码子为CHOdhfr-细胞偏爱密码子。结论CHOdhfr-细胞存在自身偏爱的密码子,提示密码子的偏爱性是不同哺乳动物细胞功能差异的因素之一,也为外源基因在CHOdhfr-细胞中通过优化密码子而获得高表达提供了新思路。
- 王志云田淑芳王秀平王世峰李仁清楚雍烈阮力
- 关键词：卵巢密码子
- 二氢叶酸还原酶和谷氨酰胺合成酶双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响被引量：6
- 2002年
- 目的 研究二氢叶酸还原酶 (DHFR ,D)与谷氨酰胺合成酶 (GS ,G)单基因和二氢叶酸还原酶与谷氨酰胺合成酶 (DHFR +GS ,DG)双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。方法 选择N端部分TPO基因 (T1 84)作为靶基因 ,以DHFR和GS基因作为筛选及扩增基因构建重组质粒pDCT1 84与pGCT1 84,将两种质粒分别转染CHOdhfr- 细胞形成单基因筛选扩增系统 ,两种质粒共转染CHOdhfr-细胞形成双基因筛选扩增系统。在双基因筛选扩增系统中设计三种药物加压方式。第一种为DG方式 :先用DHFR系统压力 (MTX)筛选 ,再用GS系统压力 (MSX)筛选 ;第二种为GD方式 :先用GS系统压力筛选 (MSX) ,再用DHFR系统压力筛选 (MTX) ;第三种为共加压方式 :同时利用DHFR与GS系统压力筛选 (MTX +MSX)。通过比较T1 84基因拷贝数及表达水平来研究DHFR和GS双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响。结果 T1 84基因拷贝数及表达水平在DG双基因筛选扩增系统不同药物加压方式中 ,均比DHFR或GS单基因筛选扩增系统高 ,但不同药物选择方式没有明显差异。结论 采用DHFR +GS双基因筛选扩增系统共加压方式是提高CHOdhfr-
- 王志云魏博田淑芳张玉倩王秀平楚雍烈阮力
- 关键词：谷氨酰胺合成酶基因扩增甲氨喋呤
