博士科研启动基金(B297)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：韩增胜李青旺李健高大威葛玮更多>>
- 相关机构：燕山大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 人乳铁蛋白腺病毒载体的构建及细胞表达被引量：1
- 2008年
- 将人乳铁蛋白基因与腺病毒基因组骨架质粒重组,在293细胞中包装重组腺病毒颗粒,获得真核细胞表达的载体pAd-hLTF。以pcDNA3X为模板,PCR扩增hLTF基因,腺病毒穿梭载体pshuttle-cmv与hLTF重组为pshuttle-cmv-hLTF;再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组为pAd-hLTF质粒;脂质体法将重组pAd-hLTF质粒转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒颗粒。Western blot和ELISA法测定细胞中hLTF基因的表达。结果表明,pAd-hLTF质粒转染293细胞后,7～10d后,获得细胞裂解液,将细胞裂解产物再次接种新鲜的293细胞,3～5d后,80%以上的细胞变圆、膨胀、漂浮。Western blot和ELISA结果显示,上清液中有hLTF基因的表达,为重组人乳铁蛋白的体外表达及其功能分析奠定了基础。
- 韩增胜李健高大威李青旺
- 关键词：腺病毒载体重组蛋白质
- Dmrt7基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
- 2010年
- 为了研究Dmrt7基因与GFP基因复制缺陷型腺病毒载体的构建,试验将购得的pReceiver-M01-Dmrt7质粒酶切、纯化后,与IRES-EGFP片段共同插到pShuttle-CMV载体中,经测序验证后,利用Adeasy-1系统细菌内同源重组原理构建Dmrt7基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-Dmrt7,再经PmeⅠ酶切线性化,转染HEK293细胞,观察GFP表达并检测重组腺病毒的效价。结果表明:重组腺病毒载体Ad-Dmrt7经PacⅠ酶切得到23 kb和2.9 kb 2个特异性片段,表明同源重组成功;将此种重组腺病毒经脂质体介导转染293细胞24 h后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,表明Dmrt7重组腺病毒包装成功,效价为0.95×108pfu/mL。
- 葛玮李青旺韩增胜刘维平
- 关键词：基因克隆腺病毒
