中国博士后科学基金(2003033547)
- 作品数：19 被引量：51H指数：3
- 相关作者：范钰周永静钟锡明郑树张尤历更多>>
- 相关机构：江苏大学附属人民医院浙江大学复旦大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金镇江市科技计划项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNAi沉默Polo-like kinase-1基因表达对大肠癌细胞端粒酶活性的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨polo-like kinase-1(PLK1)基因对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法根据PLK1基因序列特点,设计并用化学方法合成小干扰核糖核酸分子(small interfering RNA,si RNA),转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因mRNA和蛋白表达水平。分别采用MTT法和TRAP-ELISA方法检测PLK1基因转染对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。结果所设计的5个si RNA均能明显抑制大肠癌SW480细胞PLK1 mRNA水平,以P4效果最好。以P4转染处理大肠癌细胞后,PLK1 mRNA水平和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。MTT和TRAP-ELISA方法检测发现,P4si RNA转染组细胞增殖和端粒酶活性明显受到抑制,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.05)。结论PLK1基因对大肠癌细胞增殖具有重要的调控作用;以PLK1 si RNA转染处理大肠癌细胞,可明显抑制大肠癌细胞的恶性增殖,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。
- 倪国华范钰陈坚钱立平林庚金陈功星丁佳逸郑树
- 关键词：大肠肿瘤小干扰RNA端粒酶
- RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭的影响
- 2008年
- 目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将Bcl-xL小干扰RNA(siRNA)转染食管癌EC109细胞,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot方法检测食管癌细胞Bcl-xL mRNA和蛋白,采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型检测癌细胞增殖和侵袭力。结果与对照组相比,siRNA转染组细胞Bcl-xL mRNA和蛋白水平明显下调(P均<0.05),所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少(P均<0.05),并均呈浓度依赖性。结论采用RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达,可抑制食管癌细胞的增殖和侵袭能力。
- 钟锡明范钰王崇强
- 关键词：食管肿瘤RNA干扰BCL-XL基因
- 特异性小干扰RNA下调中期因子基因表达对黑素瘤细胞黏附和侵袭的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨中期因子（midkine，MK）基因小干扰RNA（siRNA）对黑素瘤细胞侵袭的影响。方法根据MK基因mRNA序列特点，设计并用化学方法合成3个siRNA，转染人黑素瘤A375细胞后，以荧光实时定量PCR方法筛选出效果最好的siRNA，以此siRNA转染人黑素瘤A375细胞。同时设空白对照组（不予任何处理）和空载对照组（仅用脂质体转染）。分别以荧光实时定量PCR和Western印迹方法观察MK基因mRNA和蛋白水平，然后以噻唑蓝法检测细胞黏附率，以Boyden小室模型方法检测细胞侵袭力。结果所设计的siRNA均能有效下调MK基因mRNA表达水平，以s3号作用最强。以该siRNA转染A375细胞后，荧光实时定量PCR结果显示，转染组A375细胞MK基因mRNA水平明显下降，且呈浓度（24h时r=-0．906；48h时r=-0．922；72h时r=-0．939，P均〈0．01）和时间（3．125nmol／L r：-0．889；6．25nmol／L r=-0．935；12．5nmol／L r=-0．928，P均〈0．01）依赖性。细胞黏附试验显示，3．125、6．25和12．5nmol／L siRNA组黏附率分别为73．66％±2．25％、49．36％±2．16％和28．35％±1．68％，呈浓度依赖性下降（r=一0．936，P〈0．01）。Boyden小室试验结果显示，3．125、6．25和12．5nmol／LsiRNA组穿过滤膜的细胞数分别为23．9±1．6、12．1±1．5、5．6±1．2，而空白对照组为36．8±1．5，穿膜细胞数呈浓度依赖性下降（r=-0．915，P〈0．05）。结论MK基因在黑素瘤细胞黏附、侵袭中发挥重要作用；以siRNA转染黑素瘤细胞抑制该基因表达可抑制黑素瘤细胞黏附、侵袭能力。
- 周永静龚丹丹邱志远彭辉勇范钰
- 关键词：黑色素瘤细胞系小分子干扰
- 沉默畸胎瘤衍生生长因子-1基因对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨TDGF-1基因沉默对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响.方法 设计并合成3个（S1、S2、S3）靶向TDGF-1基因的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）,筛选出沉默效果最好的siRNA.以该siRNA的不同浓度（3.125、6.25、12.5 nmol/L）转染PANC1细胞,并设对照组和脂质体组.采用实时定量PCR和Western blotting检测TDGF-1 mRNA和蛋白表达,以软琼脂集落培养试验和Boyden小室检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,并将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察癌细胞的体内侵袭.结果 siRNA转染组细胞的TDGF-1 mRNA和蛋白表达水平呈浓度和时间依赖性下降,且较脂质体组明显降低（P值均＜0.01）.对照组细胞集落形成数和穿膜细胞数分别为19.8±2.2和49.8±2.6;siRNA组呈浓度依赖性明显减少,12.5 nmol/L转染组分别为5.6±1.2和8.1±1.1.对照组、脂质体组和12.5 nmol/L转染组接种4周后裸鼠种植瘤体积分别为（2.228±0.026）cm3、（2.186±0.028）cm3和（0.728±0.023）cm3.对照组和脂质体组种植瘤侵犯周围肌层组织,转染细胞组未见侵犯.结论 采用RNA干扰技术沉默PANC 1细胞的TDGF-1基因表达可抑制癌细胞的侵袭力.
- 范钰吴莺徐军钟锡明
- 关键词：胰腺肿瘤肿瘤侵袭小分子干扰RNA
- 特异性小干扰RNA沉默Polo样激酶1基因表达对恶性胶质瘤细胞增殖的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨Polo样激酶I（PLK1）基因对胶质瘤细胞增殖的影响和可能机制。方法根据PLKl基因特点，设计并用化学方法合成了5个小干扰核糖核酸分子（siRNA）（P1、P2、P3、P4和P51。以这5个siRNA转染人胶质瘤TJ905细胞后，分别采用荧光实时定量RT—PCR和Westernblot检测儿KJmRNA和蛋白表达水平。分别采用MTT法和Westernblot方法检测癌细胞增殖和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白水平，用TRAP—ELISA方法检测胶质瘤细胞端粒酶活性。结果所设计的5个siRNA均能明显抑制胶质瘤TJ905细胞PLKImRNA水平，以P4效果最好。以P4转染处理胶质瘤细胞后与脂质体对照组比较，PLKI基因mRNA水平和蛋白水平明显下调．差异有统计学意义（P均=0．000）。MTT结果显示，与脂质体对照组比较P4siRNA转染组癌细胞生长明显受到抑制．且呈浓度依赖性（r=0．868，P=0．000）。Western blot结果显示，与脂质体对照组比较P4siRNA转染组PCNA蛋白水平明显下降，差异有统计学意义（F=181．36，P=0．000）。TRAP．ELISA结果显示，与脂质体对照组比较P4siRNA转染组胶质瘤细胞端粒酶活性明显受到抑制，且呈浓度和时间依赖性（p=0．000）。结论PLKI基因对胶质瘤细胞增殖具有重要的调控作用：以PLKI siRNA转染处理胶质瘤细胞，可明显抑制胶质瘤细胞的恶性增殖，其机制可能与抑制端粒酶活性有关。
- 范钰朱夫史德刚
- 关键词：神经胶质瘤POLO样激酶1小干扰RNA
- 靶向cripto siRNA转染对裸鼠实验性大肠癌细胞肝转移的影响
- 2010年
- 目的研究cripto基因对人大肠癌细胞迁移、侵袭和肝转移的影响。方法以cripto基因mRNA小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测cripto基因mRNA和蛋白水平,以划痕试验方法评测癌细胞迁移能力;用Boyden模型观察癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立裸鼠大肠癌肝转移模型,以cripto siRNA转染48h后的癌细胞接种裸鼠,观察对大肠癌细胞体内肝转移的影响。结果siRNA转染组cripto基因mRNA水平明显降低,且呈浓度和时间依赖性(P<0.001;P<0.001)。体外实验发现,cripto siRNA转染组癌细胞迁移距离和穿膜细胞数目明显低于对照组,且呈浓度依赖性(P<0.05)。体内实验发现,cripto基因siRNA转染组SW480细胞转移率和肿瘤结节数均明显低于对照组(P<0.05;P<0.05)。结论cripto基因在大肠癌肝转移中起着重要的作用;以siRNA下调cripto基因表达,可抑制大肠癌细胞肝转移。
- 钟锡明范钰周永静陈坚林庚金
- 关键词：大肠肿瘤肝转移小干扰RNA
- RNA干扰下调促肝细胞再生磷酸酶3基因表达对卵巢癌SKOV3细胞侵袭的影响被引量：2
- 2011年
- 卵巢癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一，病死率居妇科恶性肿瘤之首，严重威胁妇女的生命和健康。因卵巢癌发病比较隐蔽，诊断时多已有转移，导致患者生存率较低。因此，从分子水平寻找预测卵巢癌转移的生物学标志物，对采取有效的预防措施、选择新的治疗靶点、制定合理有效的综合治疗方案具有重要意义。
- 周永静龚丹丹陈琳赵松兰范钰
- 关键词：卵巢癌SKOV3RNA干扰细胞侵袭基因表达磷酸酶
- RNA干扰沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因对结直肠癌细胞基质金属蛋白酶2和9表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨促肝细胞再生磷酸酶-3（PRL-3）基因对结直肠癌细胞侵袭的影响和可能机制。方法应用PRL-3基因小干扰RNA（siRNA）转染处理结直肠癌细胞系HCT116后，分别采用实时定量PCR和Western印迹检测PRL-3基因和基质金属蛋白酶家族（MMP）-2、MMP-9的mRNA和蛋白水平：分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力：其次，将转染48h的细胞接种裸鼠，观察其在体内生长情况。结果体外实验结果显示，PRL-3siRNA可有效抑制结直肠癌细胞集落生长和侵袭能力，且与浓度相关（P〈0．05，P〈0．01））；转染组细胞MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白水平明显下调（P〈0．05）。体内实验结果显示，对照组裸鼠组织癌细胞侵袭横纹肌和血管，而转染组未见这些现象。结论采用PRL-3siRNA转染可抑制结直肠癌细胞侵袭，其机制可能与下调MMP表达有关。
- 范钰张尤历郑树
- 关键词：结直肠肿瘤促肝细胞再生磷酸酶-3肿瘤侵袭基质金属蛋白酶
- 大肠癌组织畸胎瘤衍生生长因子1蛋白表达及临床意义被引量：15
- 2007年
- 畸胎瘤衍生生长因子1（teratocarcinoma-derived growth factor-1，TDGF1）基因是表皮生长因子家族重要成员之一。研究发现，TDGF1基因在许多实体瘤中过度表达，而正常组织表达极低或者不表达。TDGF1基因与某些肿瘤如乳腺癌侵袭有关。但国内目前尚无此项研究，也不清楚TDGF1基因与大肠癌细胞侵袭转移的关系。本研究采用免疫组化方法，
- 范钰张尤历吴莺张宇川王崇强郑树
- 关键词：畸胎瘤生长因子1大肠癌组织衍生生长因子生长因子家族
- siRNA沉默S100A4基因表达抑制甲状腺癌细胞侵袭的研究被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨S100A4基因对甲状腺癌细胞侵袭的影响和可能机制.方法 采用S100A4基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染处理人甲状腺癌ARO细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测S100A4基因和基质金属蛋白酶-2mRNA和蛋白水平;分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力.结果 siRNA转染组S100A4基因mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性（P＜0.000 1）.siRNA转染组软琼脂集落形成数和穿过滤膜的细胞数均明显下降,且呈浓度依赖性（P＜0.005;P＜0.005）.S100A4转染组MMP-2基因mRNA和蛋白水平明显下调.结论 采用S100A4 siRNA转染可抑制甲状腺癌细胞侵袭转移,其机制可能与下调MMP-2表达有关.
- 蒋鹏程范钰周永静
- 关键词：甲状腺肿瘤小干扰RNAS100A4
