广东省自然科学基金(06024442)
- 作品数：7 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：南方医科大学山西医科大学第一医院更多>>
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- 脊髓来源神经干细胞分离培养及向雪旺氏细胞的诱导分化
- 2010年
- 目的探讨新生大鼠脊髓来源神经干细胞州SCs）的分离培养及在体外一定条件下向周围神经雪旺氏细胞分化的可行性。方法分离新生大鼠的脊髓组织，在含有B27（终浓度1％）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）（终浓度均为20ug／L）培养基中分离培养出NSCs。用复合诱导因子（10％FBS＋5umol／L血小板凝集抑制剂＋10ng／mLbFGF＋5ng／mL血小板源性生长因子）在体外诱导NSCs分化为雪旺氏细胞。免疫荧光细胞化学方法[一抗为p75、S-100、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）]鉴定体外诱导分化结果。结果培养的新生大鼠脊髓组织细胞nestin染色表达阳性：分离培养的大鼠脊髓来源NSCs经诱导分化后形态类似雪旺氏细胞．免疫荧光细胞化学方法显示诱导后细胞表达雪旺氏细胞的表面标志，GFAP、S-100和P75表达阳性。结论新生大鼠脊髓来源NSCs可以在体外诱导分化为雪旺氏细胞。
- 赵信德柯以铨姜晓丹闫中杰李西锋
- 关键词：雪旺氏细胞神经干细胞细胞分化脊髓
- VEGF165-PE38重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的构建血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物（PE38）基因的真核融合表达载体，研究其在HEK293细胞中的表达情况。方法通过PCR获得实验需要的VEGF165基因片段，通过酶切pRB391质粒获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38基因，再通过适当的酶切及连接反应，构建VEGF165与PE38融合基因的真核表达载体pIRES2-VEGF165-PE38-EGFP，重组质粒经限制性内切酶及DNA序列测定证实构建成功后，用Lipofectamine2000脂质体转染HEK293细胞，然后用RT—PCR及ELISA法检测VEGF165-PE38融合蛋白在HEK293细胞的表达。结果酶切分析及DNA序列测定证实，VEGF165-PE38融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pIRES2-EGFP，RT—PCR及ELISA法检测证实重组基因可在HEK293细胞表达。结论VEGF165-PE38融合基因可在HEK293细胞中表达，为进-步研究其对肿瘤血管内皮细胞的靶向毒性及临床应用奠定基础。
- 胡昌辰柯以铨王斌全周丽媛吕俊张发兵卢建侃蔡颖谦秦玲莎
- 关键词：PE38免疫毒素HEK293细胞真核表达
- 重组免疫毒素治疗实体瘤的研究进展被引量：1
- 2009年
- 胡昌辰柯以铨
- 关键词：重组免疫毒素实体瘤
- 血管内皮细胞生长因子介导的免疫毒素抗胶质瘤的体外实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的构建血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38)基因的真核融合表达载体,并研究其表达产物对U251细胞的影响。方法通过PCR获得本实验需要的VEGF165基因片段,通过酶切pRB391质粒获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建VEGF165与PE38融合基因的真核表达载体pIRES2-VEGF165-PE38-EGFP,经酶切及DNA测序证实构建成功后,用Lipofectamine2000脂质体转染293细胞,然后用RT-PCR及Elisa法检测VEGF165-PE38融合蛋白在293细胞的表达,并利用转染细胞后的培养上清体外测定VEGF165-PE38融合蛋白对U251的选择性细胞毒作用。结果酶切分析及DNA测序证实,VEGF165-PE38融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pIRES2-EGFP,RT-PCR及Elisa法检测证实重组基因可在293细胞表达。细胞转染上清对U251具有较强的细胞抑制效应。结论VEGF165-PE38融合基因构建,表达及其功能的初步研究,为进一步研究其对胶质瘤的靶向毒性及临床应用奠定基础。
- 胡昌辰柯以铨姜晓丹孙新林王育胜陈一招蔡颖谦秦玲莎
- 关键词：PE38重组免疫毒素293细胞U251
- 激光扫描共聚焦显微镜在国内脑胶质瘤研究中的应用被引量：2
- 2008年
- 激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)在形态、荧光定位、定量分析测定以及功能作用的研究中都是强有力的辅助工具,现已广泛应用于生物医学研究的各个领域.对国内LSCM在脑胶质瘤研究中的应用进行了综述.
- 胡昌辰柯以铨
- 关键词：激光扫描共聚焦显微镜脑胶质瘤
- 重组VEGF165-PE38融合基因对裸鼠移植性人胶质瘤血管生成的抑制作用被引量：1
- 2009年
- 目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）和铜绿假单胞菌外毒素A（PE）融合基因的真核表达载体对裸鼠移植性人脑恶性胶质瘤血管生成的影响，探索抗肿瘤血管生成的新方法。方法采用裸鼠背部皮下注射U251细胞建立移植性恶性胶质瘤模型，9d后按随机数字表法将裸鼠分为未治疗组、PBS组、空质粒组、重组质粒组，采用HE染色观察肿瘤组织的形态学变化，免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、CD31、PE的表达，分析肿瘤组织的微血管密度（MVD）。结果注射后第16天重组质粒组裸鼠移植瘤体积明显小于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．05）；重组质粒组裸鼠移植瘤MVD低于其他3组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；重组质粒组裸鼠肿瘤组织PE呈阳性表达，而在空质粒组、PBS组及未治疗组均为阴性表达。结论VEGF165-PE38融合基因的表达产物对人脑恶性胶质瘤有明显的抑制作用，并能抑制肿瘤新生血管生成，可能为一种有效抗肿瘤血管治疗的新策略。
- 柯以铨胡昌辰姜晓丹王育胜孙新林薛杉张发兵姚鹏飞蔡颖谦
- 关键词：融合基因抗血管治疗
- 重组血管内皮生长因子165-PE38融合基因的构建及其对人脐静脉内皮细胞的抑制作用
- 2009年
- 目的构建血管内皮生长因子（VEGF）基因和铜绿假单胞菌外毒素（PE38）基因的真核融合表达载体，观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的影响。方法通过聚合酶链反应（PCR）获得VEGF165基因片段，通过HindⅢ和EcoRⅠ双酶切pRB391质粒获得PE38基因，构建两融合基因的真核表达载体pIRES2-VEGF165-PE38-EGFP，转染293细胞后用逆转录（RT）-PCR及ELISA检测VEGF165-PE38融合蛋白在293细胞的表达，并检测转染细胞的培养上清对HUVECs的选择性细胞毒作用。结果成功构建VEGF165-PE38融合基因真核表达载体，其可在293细胞表达，ELISA检测表明空质粒转染组、无转染组和重组质粒转染组VEGF浓度分别为（269．0±23．6）、（306．0±29．3）和（1390．0±136．6）ng／L。CCK-8和TUNEL检测表明重组质粒细胞转染上清对HUVECs具有较强的细胞抑制效应，凋亡细胞率分别为8．34％、7．69％和39．88％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论VEGF165-PE38融合基因构建，表达及其功能的初步研究，为肿瘤血管内皮细胞的靶向治疗及临床应用奠定了基础。
- 胡昌辰柯以铨姜晓丹王斌全周丽媛陈一招
- 关键词：血管内皮生长因子融合基因脐静脉
