天津市社会发展科技计划项目(043111211)
- 作品数：8 被引量：51H指数：5
- 相关作者：范英昌郭茂娟徐秀梅华声瑜赵旭更多>>
- 相关机构：天津中医药大学天津市塘沽区杭州道医院天津市永久医院更多>>
- 发文基金：天津市社会发展科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丹酚酸B对大鼠骨髓间充质干细胞分化过程中Desmin、α-actinmRNA表达的影响被引量：16
- 2009年
- [目的]探讨丹参单体丹酚酸B(SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Desmin和α-actin mRNA的表达,确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点。[方法]选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增。免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)及250μg/LSalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24h,于诱导后第4周,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Desmin、α-actin mRNA的表达。[结果]1)第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达。2)诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构。5-aza组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比,5-aza+SalB组的Desmin和α-actin mRNA表达明显增强。[结论]SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用。
- 华声瑜范英昌马轶文王强
- 关键词：丹酚酸B骨髓间充质干细胞5-氮胞苷心肌样细胞
- 5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化被引量：9
- 2007年
- 目的:目前在5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化领域中,对用于诱导的细胞代次选择不一。实验选择第2,9代骨髓间充质干细胞,观察比较经5-氮胞苷体外诱导后其各自向心肌细胞分化过程中心肌特异性肌钙蛋白cTnT和早期分化基因的表达。方法:实验于2005-07/2007-07在天津中医药大学病理三级实验室完成。①实验方法:清洁级Wistar雄性大鼠,脱颈处死后取双侧股骨、胫骨,采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞进行原代培养。去掉原代细胞瓶内的培养液,D-Hank’s液冲洗去除血清,胰蛋白酶+乙二胺四乙酸消化,制备单细胞悬液,按1∶3传代。用10μmol/L的5-氮胞苷分别诱导第2,9代骨髓间充质干细胞,诱导4周,并设立未加诱导剂的阴性对照。②实验评估:倒置相差显微镜下观察细胞的生长情况及形态变化;免疫组织细胞化学法检测心肌特异性肌钙蛋白cTnT的表达,胞浆出现棕黄色颗粒状物质为阳性;嵌合荧光法检测心肌早期基因NKx2.5、GATA-4、Desmin、α-actin的相对表达量。结果:①细胞形态学观察:5-氮胞苷诱导前细胞生长较快,诱导后死亡细胞较多且生长较慢。诱导后2,3,4周,第9代骨髓间充质干细胞无论在形态和细胞活力方面均优于第2代。②心肌特异性肌钙蛋白cTnT的表达:5-氮胞苷诱导4周后,第9代骨髓间充质干细胞心肌特异性肌钙蛋白cTnT阳性表达率明显高于第2代(22.42±9.97),(11.22±5.62)%,P<0.05,阴性对照无阳性表达。③心肌早期基因的表达:反转录-聚合酶链反应结果显示,5-氮胞苷诱导4周后,第9代骨髓间充质干细胞心肌早期基因NKx2.5、GATA-4、Desmin、α-actin的相对表达量均明显高于第2代(P<0.05)。结论:经5-氮胞苷诱导后,骨髓间充质干细胞表达心肌特异性肌钙蛋白cTnT及4种心肌早期基因,证实其能够向心肌细胞分化,且传至第9代时向心肌细胞分化的能力要强于第2代。
- 郭茂娟范英昌徐秀梅赵旭
- 关键词：5-氮胞苷诱导分化骨髓间充质干细胞
- 丹酚酸B体外干预骨髓间充质干细胞分化过程中cTnT的表达被引量：6
- 2007年
- [目的]观察丹酚酸B(SalB)体外干预骨髓间充质干细胞(MSCs)后细胞形态及心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[方法]培养、纯化及鉴定MSCs,用SalB、5-氮胞苷组(5-aza)、SalB联合5-aza(SalB+5-aza)分别定向诱导分化,观察此过程中MSCs的形态学变化并采用免疫细胞化学法鉴定诱导后MSCs心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达。[结果]诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示诱导后MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT。[结论]SalB在体外定向诱导MSCs分化为心肌细胞的过程中发挥了一定的作用。
- 孙连胜徐秀梅郭茂娟赵旭苏金玲
- 关键词：丹酚酸B骨髓间充质干细胞心肌肌钙蛋白T
- 条件培养液体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究被引量：3
- 2009年
- [目的]观察乳鼠心室肌成纤维细胞条件培养液干预体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制。[方法]分离培养及鉴定大鼠MSCs,对其进行分组诱导:单纯条件培养液组(TJ)、条件培养液1组(TJ-ZY)、条件培养液2组(TJ-XFK),诱导,24h后继续培养4周,免疫细胞化学法鉴定心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌早期基因NKX2.5、GATA-4、Desmin和α-actinmRNA的表达。[结果]免疫细胞化学结果显示单纯条件培养液诱导后的MSCs不表达心肌特异性蛋白cTnT,心复康参与组则表达。实时荧光定量(RT-PCR)结果显示各组均表达心肌分化早期基因,心复康参与组诱导后的MSCs的心肌分化早期基因表达明显高于单纯条件培养液组。[结论]微环境在MSCs向心肌样细胞的分化过程中起了重要作用,心复康能够提高MSCs向心肌样细胞的分化和特化作用。
- 徐秀梅姜希娟周冰郭茂娟马志刚范英昌
- 关键词：条件培养液骨髓间充质干细胞免疫细胞化学实时荧光定量RT-PCR
- 丹酚酸B干预骨髓间充质干细胞移植对AMI大鼠心梗区血管新生的影响被引量：11
- 2007年
- [目的]探讨丹参单体丹酚酸B(SalB)干预骨髓间充质干细胞(MSCs)心肌移植及其对大鼠心梗区毛细血管新生的影响。[方法]选用成年近交系Wistar大鼠建立心肌缺血模型。将造模成功的75只大鼠随机分为5组。冠脉结扎术后,联合组给于大鼠SalB并移植MSCs(SalB+B组),细胞移植组(B组)移植等量的MSC,中药组给予等量的SalB(SalB组),对照组注射等容积的MSCs完全培养液(S组),模型组(C组)。手术后2周,通过心肌组织CD34免疫组化染色,观察丹酚酸B干预MSCs心肌移植对血管新生的影响。[结果]CD34染色示联合组动物心肌梗死区毛细血管密度高于B组和SalB组,且有少数细胞形成血管样结构。[结论]在急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌移植MSCs,通过参与血管形成,改善梗死区的血液供应,是SalB起效的重要物质基础之一,具有良好的开发和应用前景。
- 范英昌华声瑜郭茂娟徐秀梅
- 关键词：丹酚酸B骨髓间充质干细胞细胞移植血管新生
- 丹酚酸B体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究被引量：15
- 2008年
- 目的观察丹酚酸B(SalB)干预体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制。方法分离培养及鉴定大鼠MSCs,对其进行分组诱导:SalB组(终浓度为250μg/L)、5-氮胞苷组(终浓度为10μmol/L)、SalB联合5-aza组(终浓度分别为250μg/L与10μmol/L),诱导24 h后继续培养4周,观察其形态学变化,免疫细胞化学法鉴定心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测心肌早期基因NKX2.5、GATA-4、Desmin和a-actin mRNA的表达。结果诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示诱导后的MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT,与5-aza组相比,SalB组cTnT表达较低,SalB联合5-aza组cTnT表达升高;实时荧光定量RT-PCR结果显示各组均表达心肌分化早期基因,SalB联合5-aza组诱导后的MSCs的心肌早期分化基因表达明显高于其他两组。结论SalB可在体外诱导大鼠MSCs定向分化为心肌样细胞,其与5-aza联合诱导可明显提高MSCs向心肌细胞分化的能力。
- 徐秀梅郭茂娟赵旭范英昌
- 关键词：丹酚酸B骨髓间充质干细胞体外诱导免疫细胞化学
- 丹酚酸B在大鼠骨髓间充质干细胞分化过程对心肌早期基因mRNA表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的探讨丹参单体丹酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Nkx2.5、GATA-4、Desmin和α-actinmRNA的表达,确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点。方法选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增。免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-aza)及250mg/LSalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24h,于诱导后第4周,用实时荧光定量RT-PCR法检测Nkx2.5、GATA-4、Desmin和α-actin的基因表达。结果①第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达。②诱导4w后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构。5-aza组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因;与5-aza组相比,5-aza+SalB组的Nkx2.5、GATA-4、Desmin和α-actin mRNA的表达明显增强。结论SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用,并且在Nkx2.5基因表达上SalB的优势更加明显。
- 华声瑜赵桂峰郭茂娟范英昌
- 关键词：丹酚酸B骨髓间充质干细胞5-氮胞苷心肌样细胞基因
- 丹酚酸B在大鼠骨髓间充质干细胞分化过程对心肌早期基因Nkx2.5 GATA-4 mRNA表达的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨丹参单体丹酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrowmes-enchymal stem cells,MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Nkx2.5、GATA-4 mRNA的表达,从而确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点。方法:选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增。免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)及250μg/L SalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24h,于诱导后第4周,用实时荧光定量RT-PCR法检测GATA-4和Nkx2.5基因表达。结果:①第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达。②诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构。5-aza组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比,5-aza+SalB组的NKx2.5、GA-TA-4 mRNA表达明显增加。结论:SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用,并且在Nkx2.5基因表达上丹酚酸B的优势更加明显。
- 华声瑜赵桂峰郭茂娟范英昌
- 关键词：丹酚酸B5-氮胞苷心肌样细胞基因
