天津市科技发展战略研究计划项目(033801211)
- 作品数：5 被引量：39H指数：4
- 相关作者：张晓东叶丽虹乔玲徐治立蔡娜更多>>
- 相关机构：南开大学天津生物医学工程研究所中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：天津市科技发展战略研究计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 间充质干细胞释放Dkk-1抑制乳腺癌细胞Wnt/β-catenin途径的实验研究被引量：18
- 2007年
- 研究表明,间充质干细胞具有向肿瘤细胞定向迁移并且抑制肿瘤细胞的特性,然而其分子机理目前尚不清楚.为了探讨间充质干细胞抑制肿瘤细胞作用的分子机制,应用BMMS-03人间充质干细胞的条件培养液作用于MCF-7乳腺癌细胞,通过软琼脂克隆形成实验、MTT实验、免疫印迹和免疫荧光染色等技术观察细胞克隆形成、增殖和基因表达的变化.结果显示:在BMMS-03细胞条件培养液作用下,MCF-7细胞的克隆形成和增殖受到了明显的抑制,β-catenin及其下游靶蛋白c-Myc、Bcl-2、PCNA和survivin的表达被明显下调,MCF-7细胞浆和细胞核内β-catenin的表达被明显抑制.BMMS-03细胞中Dkk-1的表达水平与MCF-7细胞相比较高.利用抗Dkk-1的抗体中和BMMS-03细胞条件培养液中的Dkk-1后,可明显拮抗BMMS-03细胞条件培养液对MCF-7细胞中β-catenin及c-Myc表达的抑制作用,基因转染使MCF-7细胞过表达Dkk-1后,MCF-7细胞的β-catenin及c-Myc的表达明显下调.同样经基因转染使BMMS-03细胞过表达Dkk-1后,其条件培养液可进一步下调MCF-7细胞β-catenin及c-Myc的表达.上述结果表明,间充质干细胞BMMS-03对乳腺癌MCF-7细胞的恶性表型具有明显抑制作用,其分子机制与间充质干细胞释放Dkk-1抑制乳腺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径有关.
- 乔玲徐治立谭旭叶丽虹张晓东
- 关键词：间充质干细胞乳腺癌细胞DKK-1
- 人胎儿骨髓间充质干细胞的分离及生物学鉴定被引量：3
- 2006年
- 通过原代细胞培养,从引产胎儿骨髓组织中分离干细胞,然后进行生物学鉴定,旨在体外建立培养胎儿骨髓干细胞的有效方法,为进一步研究干细胞奠定基础．本研究对四个月的引产胎儿骨髓组织进行原代细胞培养,采用贴壁筛选法,在含有15％胎牛血清的L-DMEM／IMDM(1:1)混和培养液中培养,7 d后细胞可长满瓶底．显微镜下观察,细胞形态均一,呈长梭形．传代后,在8代以内的细胞贴壁能力较强,生长速度较快．将其命名为BMMS-03．在第3代时,对培养的细胞进行了于细胞标志物的生物学鉴定,采用流式细胞仪对经免疫荧光染色的细胞进行检测．结果显示:97．2％的细胞呈CD105阳性反应,66．0％的细胞呈CD106阳性反应, 9．2％的细胞呈CD34阳性反应．阴性对照组阳性反应为0．5％．生物学鉴定的初步结果提示,从胎儿骨髓组织中分离培养成功的细胞为骨髓间充质干细胞,其细胞形态学特征、CD105+、CD106+和CD34-的检测结果均符合间充质干细胞的特征．本研究成功地建立了体外培养胎儿骨髓间充质干细胞的有效方法,所获得的间充质干细胞纯度较高,增殖较快,适用于干细胞生物学和组织工程学的研究．
- 张晓东徐治立叶丽虹东楠赵春华蔡兵王洪辉吴晶辉王长晔蔡娜
- 关键词：骨髓间充质干细胞胎儿流式细胞术干细胞标志物
- 肝癌细胞条件培养液诱导新生儿脐带血贴壁细胞的转化被引量：4
- 2006年
- 背景与目的:脐带血干细胞为早期未分化细胞,对外界环境的影响十分敏感,在致癌因素作用下脐带血干细胞可能发生恶性转化。本研究旨在探讨脐带血干细胞对致癌因子的敏感性。方法:应用淋巴细胞分离液从新生儿脐带血中分离出有核细胞后进行细胞培养,当细胞贴壁后,应用含有10%HepG2肝癌细胞条件培养液的培养液继续培养,获得了一个新的细胞系,将其命名为H-UCB。应用电镜、流式细胞仪和Westernblot等检测其特征,应用软琼脂实验检测其克隆形成率。结果:在培养到第三代以后H-UCB细胞增殖能力明显增强。形态学观察显示,细胞形态呈成纤维细胞样和肝细胞样,核浆比例增大。电镜观察,细胞表面有较多微绒毛,核大并且形态不规则,胞浆内有空泡,有胞吞胞饮现象。染色体分析显示,细胞的染色体众数在50～70条之间,为异倍体。流式细胞仪检测显示,细胞增殖周期为22.9h,染色体数目为二倍体和四倍体之间。Westernblot检测结果显示,c-Myc蛋白、核增殖相关蛋白(PCNA)的表达水平较高。经免疫荧光染色后进行流式细胞仪检测,显示H-UCB细胞表面标志物CD105、CD34、CD106阳性率分别为79.0%、1.2%、12.2%,而对照组HepG2细胞的CD105、CD34、CD106的阳性反应率分别为15.0%、9.8%、1.4%。软琼脂克隆形成率为(13.2±2.6)%。结论:从新生儿脐带血分离获得的有核细胞在肝癌细胞条件培养液作用下发生了恶性转化,具有肿瘤细胞的特征,属内皮细胞来源。
- 张晓东蔡娜王洪辉郭世宜叶丽虹
- 关键词：细胞转化肝癌细胞条件培养液致癌因子
- 人间充质干细胞抑制肝癌细胞增殖的作用及其基因表达谱分析被引量：10
- 2007年
- 干细胞移植治疗肿瘤具有重要的临床价值.应用人间充质干细胞条件培养液作用H7402肝癌细胞,拟探讨间充质干细胞对肿瘤细胞的抑制作用,为今后应用人间充质干细胞进行肿瘤细胞治疗奠定理论基础.应用胎儿真皮来源的Z3间充质干细胞和胎儿骨髓来源的BMMS-03间充质干细胞的条件培养液作用于H7402肝癌细胞,采用软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪技术、基因芯片技术和免疫印迹技术观察H7402细胞的克隆形成、增殖和基因表达谱变化.结果显示,H7402细胞在间充质干细胞条件培养液作用下,克隆形成和增殖受到了明显抑制;基因芯片检测结果显示,H7402细胞在间充质干细胞条件培养液作用下有23个基因上调表达,17个基因下调表达,这些差异表达的基因与细胞的转录调控、新陈代谢、信号转导、细胞周期、应激反应和细胞粘附等功能相关.本实验结果表明,人间充质干细胞对H7402肝癌细胞的克隆形成和增殖具有抑制作用,并有多种基因的表达发生改变,这些基因表达的改变可能参与了对上述肿瘤细胞的抑制.
- 乔玲赵铁军山长亮叶丽虹张晓东
- 关键词：间充质干细胞肝癌细胞克隆形成增殖基因表达
- 人间充质干细胞抑制乳腺癌细胞增殖作用的实验研究被引量：5
- 2007年
- 应用人间充质干细胞作用肿瘤细胞,拟揭示间充质干细胞对肿瘤细胞的作用,为今后应用人间充质干细胞进行肿瘤细胞治疗奠定理论基础.应用胎儿真皮来源的 Z3间充质干细胞和胎儿骨髓来源的 BMMS-03间充质干细胞的条件培养液作用于乳腺癌 MCF-7细胞,观察 MCF-7细胞增殖和迁移能力的变化.结果显示,应用 BrdU 掺入分析和流式细胞仪测定等方法发现,在间充质干细胞条件培养液的作用下,MCF-7细胞的增殖受到了明显抑制;应用划痕实验和琼脂糖滴实验发现,MCF-7细胞的迁移能力也受到明显抑制.结果表明,人间充质干细胞对乳腺癌细胞的增殖和迁移具有抑制作用。
- 乔玲叶丽虹张晓东
- 关键词：间充质干细胞乳腺癌细胞增殖迁移
