国家自然科学基金(30572160)
- 作品数：3 被引量：23H指数：2
- 相关作者：张志谦赵威韩海勃纪素娟更多>>
- 相关机构：北京大学肿瘤医院北京肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RKIP蛋白在多个人肺癌细胞系中的表达下调被引量：19
- 2007年
- 目的检测肺癌细胞系中RKIP的表达情况,探讨其与肺癌细胞侵袭、转移的关系。方法RT-PCR法检测多个人肺癌细胞系中RKIP的表达情况,构建表达人RKIP的融合蛋白,纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。ELISA鉴定血清特异抗体效价,Western blot鉴定血清特异抗体并检测肺癌细胞系中RKIP表达。结果成功构建表达人RKIP的融合蛋白,制备的多抗效价达到106,可特异检测细胞内RKIP表达;有转移性的3个肺癌细胞系中RKIP表达明显下调,且在转移性较高的A549细胞中下调更明显。结论获得了效价和特异性都良好的RKIP多抗,适合应用于RKIP的检测。RKIP表达下调与肺癌细胞侵袭、转移有关,有可能成为肺癌治疗的靶点。
- 韩海勃张志谦赵威
- 关键词：RKIP多克隆抗体肺癌
- 抗人RKIP单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:制备抗人RKIP(hRKIP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:自行构建表达人RKIP重组蛋白(reRKIP),纯化的reRKIP免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用免疫荧光和Western blot鉴定mAb的特异性。结果:成功构建RKIP原核表达载体,转化BL21后可高效表达reRKIP,成功地获得4株(EC1,ED2,ED5和8B3)分泌抗人reRKIP mAb的杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在免疫荧光和Westernblot试验中均可与细胞中RKIP蛋白反应。结论:成功地制备了4株抗hRKIP mAb,为进一步研究RKIP生物学功能奠定了基础。
- 韩海勃张志谦赵威
- 关键词：RKIP单克隆抗体
- 含MMP-9信号肽、人MMP-2PEX片段腺病毒载体的构建及其生物学活性被引量：1
- 2006年
- 目的:构建含MMP-9信号肽、人MMP-2PEX片段融合蛋白的重组腺病毒(ET-M9-PEX),通过基因治疗策略建立患者体内药物生物反应器,以期利用抗血管因子的体内表达实现肿瘤的有效治疗。方法:利用PCR、基因重组等技术,构建含M9-PEX融合蛋白的腺病毒载体,经L293细胞包装、扩增后得到有感染力的ET-M9-PEX重组腺病毒。用Westernblotting和免疫荧光检测其感染细胞后PEX的表达和分泌,通过生长曲线观察其感染内皮细胞(endothelialcell,EC)的培养上清对EC增殖的影响,利用鸡胚绒毛尿囊膜(chickenchorioallantoicmembrane,CAM)实验检测其对血管发生和种植瘤生长的影响。结果:ET-M9-PEX构建成功,感染细胞后有PEX的表达和分泌。体外实验表明,ET-M9-PEX感染细胞的培养上清能抑制EC增殖。体内实验证实,ET-M9-PEX感染后的PG细胞接种于CAM,与E-T相比,对瘤重的抑制率为57.57%(P<0.01),对一级血管的抑制率为33.52%(P<0.01);而E-T和PBS组之间瘤重和一级血管数均无显著性差异。结论:构建的ET-M9-PEX重组腺病毒能显著抑制EC细胞增殖,抑制CAM种植瘤生长和血管发生,ET-M9-PEX有望成为肿瘤基因治疗的有效药物。
- 纪素娟张志谦
- 关键词：PEXMMP-2信号肽重组腺病毒
