国家自然科学基金(81000357)
- 作品数：6 被引量：34H指数：3
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- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院重庆医科大学附属第一医院更多>>
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- 内质网应激通过SCAP/SREBP-1c调控L02肝细胞脂质合成代谢被引量：16
- 2015年
- 目的在内质网应激状态下,观察SCAP/SREBP-1c对肝细胞脂质合成代谢的影响。方法用毒胡萝卜素(Tg)诱导人L02正常肝细胞株建立内质网应激模型,Western blot检测GRP78的蛋白表达。甘油三酯(TG)试剂盒和油红O染色检测肝细胞内脂变程度;实时荧光定量PCR检测SREBP-1c下游脂代谢相关基因FAS、ACC1的mRNA表达情况,Western blot检测n SREBP-1c、FAS、ACC1的蛋白表达情况。通过miRNA瞬时转染沉默SCAP基因的表达,观察上述指标的变化情况。结果实验组GRP78蛋白的相对表达量与对照组比较,均显著增加(P<0.05),Tg在体外成功建立肝细胞内质网应激模型。与空白对照组相比,Tg组肝细胞内甘油三酯含量明显增加(P<0.05),脂滴明显增多;n SREBP-1c的蛋白水平明显升高(P<0.05);下游靶基因FAS和ACC1的基因和蛋白水平均明显上调(P<0.05),与n SREBP-1c的升高趋势一致。转染SCAP-3 miRNA载体后,以上指标均明显下调(P<0.05)。结论内质网应激通过SCAP/SREBP-1c调控肝细胞脂质合成代谢,促进脂质沉积,是NAFLD重要的发病机制之一。靶向干扰SCAP,能减轻内质网应激所致的肝细胞脂肪变程度,成为安全有效的NAFLD防治新靶点。
- 刘佳李传飞宁波杨朝霞
- 关键词：内质网应激SCAPSREBP-1C
- 干扰SREBP-1c对内质网应激状态下L02和HepG2肝细胞脂质沉积的影响被引量：4
- 2013年
- 目的构建SREBP-1c基因的miRNA真核表达载体,观察其对内质网应激状态下L02和HepG2肝细胞脂质沉积的影响。方法设计并构建SREBP-1c基因的3个miRNA干扰载体,经测序鉴定miRNA载体构建成功后转染肝细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。Western blot检测转染后SREBP-1c的表达;甘油三酯测定和油红O染色检测细胞内脂质沉积;Western blot检测SREBP-1c下游脂代谢相关基因脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC1)的表达。结果靶向干扰SREBP-1c的miRNA真核表达载体构建成功。Westernblot结果显示,转染SREBP-1c-1miRNA和SREBP-1c-3miRNA载体后,L02和HepG2细胞内SREBP-1c蛋白水平表达均明显减低(P<0.05),SREBP-1c-1miRNA的干扰效果最好(P<0.05)。与对照组相比,转染SREBP-1c-1miRNA载体后L02和HepG2肝细胞内甘油三酯含量均明显降低(P<0.05),细胞内脂滴明显减少;FAS和ACC1蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 SREBP-1c基因沉默通过FAS/ACC1降低了内质网应激状态下肝细胞脂质合成。
- 房殿亮宁波沈薇万颖
- 关键词：SREBP-1CFAS
- 辣椒素对体外肝细胞脂质代谢的影响研究被引量：3
- 2017年
- 目的探讨辣椒素对脂肪变肝细胞内脂质沉积的影响及自噬表达情况,为脂肪性肝病防治的研究提供新的思路和靶点。方法用油酸(40μg/mL)诱导肝原代细胞LO2细胞株建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型。实验分为空白对照组、油酸组、辣椒素组[油酸+辣椒素(100μmol/L)]。油红O染色和三酰甘油试剂盒检测肝细胞内脂肪变程度;Western blot检测自噬体标记分子p62和LC3的表达水平并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果 40μg/mL油酸处理LO2细胞24h后,油红O染色观察,油酸组肝细胞中可见大小不等的橘红色脂滴,而空白对照组无明显橘红色脂滴形成,油酸在体外成功建立NAFLD模型。与油酸组相比,辣椒素组肝细胞内三酰甘油水平显著降低(P<0.05),脂滴明显减少,p62蛋白水平明显降低(P<0.05),而LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显上调(P<0.05)。结论在体外利用油酸诱导LO2细胞株建立NAFLD模型,辣椒素刺激NAFLD细胞,上调NAFLD细胞自噬水平,减少细胞内脂质沉积,但具体机制还需进一步研究。
- 孙玉刘佳宁波杨朝霞
- 关键词：油酸辣椒辣素非酒精性脂肪性肝病
- 胃癌组织中THBS2基因水平与MVD、MMP-2表达的相关性
- 2014年
- 目的探讨胃癌组织中血小板反应蛋白2(THBS2)基因表达水平微血管密度(MVD)、基质金属蛋白酶(MMP)-2表达的相关性。方法应用免疫组化EnVision二步法染色检测MMP-2表达水平。应用CD34免疫组化染色评价MVD的表达。通过PCR技术定量分析80例胃癌组织和30例正常胃黏膜组织中THBS2基因的表达,分析胃癌组织中THBS2基因的表达与MVD、MMP-2表达的相关性。结果胃癌组织中THBS2基因表达为(-1.2±0.05),正常的胃黏膜组中为(-1.82±0.12),两组之间的差异显著(P<0.05)。THBS2基因高表达与低表达与MMP-2蛋白表达具有密切的关系(P<0.05);胃癌组织中MVD 45.34±12.35,与THBS2基因水平呈正相关(r=0.432,P=0.001)。结论胃癌组织中THBS2基因的表达水平于MVD、MMP-2表达存在一定的相关关系,THBS2基因的变化可能是通过促进MVD、MMP-2表达实现的。
- 聂娜吴小翎宁波罗红春刘波刘倩
- 关键词：胃癌组织
- SCAP-SREBP-1c-ACC1在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用。方法以人肝细胞L02及人肝肿瘤细胞HepG2为研究对象,利用1μmol/L毒胡萝卜素(Thapsigargin)诱导肝细胞建立内质网应激模型,设未处理细胞作为对照;采用酶比色法检测细胞内甘油三酯含量,Real-time PCR法检测固醇调节元件结合蛋白-1c裂解激活蛋白[sterol regulatory element binding protein-1c(SREBP-1c)cleavage-activating protein,SCAP]基因mRNA水平,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白-78(glucose-regulated protein-78,GRP-78)、SCAP、SREBP-1c、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl-CoA carboxylase 1,ACC1)蛋白的表达水平。结果在内质网应激状态下,实验组两种细胞中甘油三酯水平、SCAP基因mRNA水平以及GRP-78、SCAP、SREBP-1c、ACC1蛋白的表达水平较对照组均明显增加(P均<0.01)。结论已成功建立内质网应激脂肪变性细胞模型。SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路可能介导内质网应激状态下肝细胞脂肪变性。
- 房殿亮宁波沈薇万颖
- 关键词：脂肪变性内质网固醇调节元件结合蛋白
- 内质网应激诱导肝细胞脂肪沉积及可能机制被引量：10
- 2012年
- 目的利用毒胡萝卜素诱导肝细胞内质网应激模型,观察在内质网应激状态下肝细胞脂肪沉积情况,并初步探讨其分子机制。方法以人L02、HepG2肝细胞株为研究靶细胞,将两种细胞均分为正常对照组和实验组(培养液内含毒胡萝卜素1μmol/L),采用三酰甘油(TG)试剂盒、油红O染色检测肝细胞脂肪沉积情况,实时荧光定量PCR法检测SREBP-1c、LXRs的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测GRP78、SREBP-1c、LXRs的蛋白表达情况。结果蛋白质印迹结果显示,实验组GRP78的表达较对照组升高(P<0.05),表明肝细胞内质网应激模型建立成功。在内质网应激状态下,毒胡萝卜素作用48h后实验组L02与HepG2细胞脂肪沉积均较对照组增加(P<0.01)。与对照组相比,实验组L02和HepG2细胞SREBP-1c在基因水平和蛋白水平表达均升高(P<0.05),而LXRs在基因水平和蛋白水平的表达均无变化。结论内质网应激可能通过上调SREBP-1c诱导肝细胞脂肪沉积,而LXRs未参与该过程。
- 万颖房殿亮沈薇宁波
- 关键词：内质网应激脂肪沉积固醇调节元件结合蛋白1C肝X受体
