国家自然科学基金(30270843)
- 作品数：12 被引量：84H指数：6
- 相关作者：张金文白斌郭志鸿王蒂龙凤更多>>
- 相关机构：甘肃农业大学兰州商学院延安大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 马铃薯块茎RNA提取及RT-PCR法克隆酸性转化酶基因被引量：6
- 2005年
- 马铃薯块茎由于富含多糖和酚类物质造成RNA提取难度大。通过在SDS-phenol提取缓冲液中加入2%PVP及10mmol/L半胱氨酸以除去大量的酚类物质,利用改进后的SDS-酚法提取的马铃薯块茎总RNA电泳结果表明,总RNA质量高于未经改进的方法。并进行RT-PCR克隆与马铃薯块茎低温糖化反应过程密切相关的块茎酸性转化酶(acidinvertase)基因,经核酸序列对比分析,与公布的已知序列具有98.96%的同源性,为利用反义技术抑制酸性转化酶活性进行马铃薯块茎抗低温糖化研究作好了准备工作。
- 白斌张金文
- 关键词：马铃薯块茎RNA提取RT-PCR法低温糖化酸性转化酶PCR克隆
- RNAi技术在作物品质改良中的应用被引量：6
- 2008年
- RNA干涉(RNAi)是由同源性内源或外源dsRNA引起的序列特异性基因沉默现象,在动、植物和真菌中广泛存在并被证实。目前已应用RNAi技术在改善油脂的品质、改良淀粉品质、提高营养物质或降低有害物质含量、提高抗褐化能力、提高果实耐贮性、进行代谢调控以获得目的次生代谢物等方面进行了作物品质改良研究。作为一种下调表达技术,该技术在研究植物基因功能和改良作物品质等领域有良好的应用前景。重点从上述六个方面对近年来应用RNAi技术在作物品质改良研究方面进行了回顾并对其存在的问题作了初步探讨。
- 陈国梁张金文梁慧光张向前王蒂
- 关键词：RNA干扰作物品质
- 辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建立被引量：31
- 2005年
- 采用 9 个辣椒品种(Capsicum annuum L.)的子叶和下胚轴,分别离体培养在附加不同激素及化合物的MB5培养基上,对苗龄、基因型、不同外植体、激素组合和 AgNO3等对外植体不定芽诱导分化和芽伸长的影响进行研究。结果表明,苗龄对外植体不定芽分化的方式有直接影响;AgNO3的加入可使芽分化率平均提高 20 %～30 %,并缩短外植体再生时间;子叶的不定芽分化率高于下胚轴;B5维生素有利于芽的生长和芽伸长率的提高。通过结果比较,筛选出了辣椒子叶和下胚轴离体再生的较好芽分化培养基为 MB5+5 mg/L、6-BA+0.5 mg/L、IAA+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;芽伸长培养基为 MB5+3 mg/L、6-BA+1 mg/L、IAA+2 mg/L、GA3+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;生根培养基为 1/2 MS+0.2 mg/L、IAA+0.1 mg/L NAA。
- 龙凤张金文
- 关键词：辣椒离体培养外植体植株再生
- rd29A启动子克隆及对低温响应的研究被引量：9
- 2004年
- 研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA克隆了rd29A基因启动子,序列分析表明该启动子具有两个干旱、高盐和低温响应顺式作用元件(DRE),在851～856 bp碱基处为TATA box,其它主要调控区域也存在。然后,分别用rd29A启动子和CaMV 35S启动子,构建了具有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体pBIG和pBIRG。通过基因枪导入法转化洋葱表皮细胞,在25 ℃和4 ℃条件下培养16 h后,用荧光显微镜观察GFP基因的表达水平。结果表明,在低温条件下,rd29A启动子的活性明显高于CaMV 35S启动子,说明rd29A启动子是一低温诱导型启动子,可满足在低温条件下使目的基因在转基因植物中进行表达的目的。
- 白斌张金文郭志鸿陈正华
- 关键词：RD29A启动子绿色荧光蛋白基因基因枪法表达活性
- 低温条件下转AcInv反义基因马铃薯品系的干物质、淀粉和还原糖含量变化被引量：4
- 2006年
- 检测低温(4℃)贮藏条件下转AcInv反义基因与否的马铃薯品系块茎中干物质、淀粉和还原糖含量变化的结果表明:随着低温贮藏时间的延长,各转基因品系块茎中干物质含量变化不大,淀粉含量虽有下降但较为平缓;转基因品系中的还原糖含量增加幅度比受体品种的明显降低,转AcInv反义基因的‘甘农薯1号’和‘大西洋’块茎抗低温糖化能力明显高于未转AcInv反义基因的品系。
- 成娟张金文王蒂
- 关键词：马铃薯低温贮藏干物质淀粉还原糖
- 利用ihpRNA介导的基因沉默培育抗冷糖化马铃薯被引量：4
- 2007年
- 为培育抗冷糖化的转基因马铃薯材料,克隆了368 bp的马铃薯酸性转化酶(AcInv)基因3′端非翻译区(3′UTR)和281 bp的马铃薯VP1-ABI3-like protein基因的第一内含子,构建了内含子连接的马铃薯AcInv基因3′UTR的发夹型RNA(ihpRNA)载体pBIV;采用微束激光穿刺技术转化马铃薯品种,得到了149个转基因株系,其中139个转基因株系在低温贮藏35 d时块茎还原糖含量低于亲本材料。RT-PCR分析表明还原糖含量降低的转基因植株中检测不到AcInv基因mRNA的积累。本研究结果表明以3′UTR作为RNAi载体的干涉片段可以有效地抑制靶标基因mRNA的积累,通过对AcInv沉默可获得抗低温糖化的马铃薯育种材料。
- 郭志鸿张金文王蒂陈正华
- 关键词：马铃薯酸性转化酶
- 不同染色剂及培养条件对马铃薯花粉育性测定结果被引量：3
- 2007年
- 采用花粉染色、花粉萌发方法对6个马铃薯品种（系）花粉的育性进行了测定,结果表明,染色剂间、染色剂与品种互作间差异不显著,而马铃薯品种（系）间花粉育性差异极显著,其中以四倍体栽培品种甘农薯3号花粉育性最强,体细胞杂种C-1-4、C-1-12和四倍体栽培品种甘农薯1号次之,体细胞杂种P-1-12和P-2-118育性最差.研究还表明,马铃薯花粉培养以液体萌发培养基（8%蔗糖＋1.5 mg/L硼酸＋100 mg/kg氯化钙溶液）效果最佳,其培养条件为在28～30 ℃黑暗条件下培养5 h.通过比较,马铃薯花粉生活力测定方法以发芽法较染色法结果更理想.
- 王旺田孟亚雄张金文马静芳司怀军
- 关键词：马铃薯花粉育性花粉萌发
- 基因工程技术在马铃薯育种中的应用研究被引量：7
- 2006年
- 综述了国内外近20年来基因工程技术在马铃薯抗病毒病、抗菌、抗虫、抗除草剂及品质改良育种中的应用研究进展。
- 白斌
- 关键词：基因工程马铃薯育种
- 维管特异表达启动子BSP的克隆与活性检测被引量：1
- 2012年
- 为了研究维管特异表达启动子BSP的活性和组织特异性,从杨树基因组中克隆得到维管特异表达启动子BSP,利用该启动子与绿色荧光蛋白(GFP)报告基因构建植物表达载体,采用基因枪法转化烟草叶片,并在高渗培养基上培养过夜,后转移到诱导培养基上(MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+Kan100mg/L)培养生根并长到一定高度后,剪下已形成维管组织的叶脉和根,制成切片,然后在OLYPUSBX51/BX52型荧光显微镜下用蓝光激发,观察各个组织细胞中的绿色荧光,同时以未转化的烟草材料做为对照。结果表明:BSP启动子所驱动的GFP基因在烟草的维管组织细胞中得到了高水平的表达,而在烟草的其他组织及对照的任何组织中几乎不表达。通过GFP在烟草维管组织中的瞬时表达,表明了该启动子具有维管组织特异性表达活性特点。
- 刘玲玲张金文
- 关键词：报告基因
- 一种快速检测启动子调控基因表达活性方法的探讨被引量：4
- 2005年
- 启动子活性检测是基因工程实验的重要组成部分,利用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对rd29A启动子在受体细胞中调控基因表达的活性进行检测,采用基因枪法进行对洋葱表皮细胞的遗传转化,培养24h后在荧光显微镜下观察GFP基因的表达情况,并通过软件测定不同培养条件下GFP基因表达后的荧光强度,能较为准确的鉴定该启动子的活性大小,并达到量化目的。方法简单、省时、可靠,可以作为一种有效的检测启动子活性的方法。
- 白斌张金文郭志鸿
- 关键词：表达活性RD29A启动子调控基因表达GFP基因基因枪法镜下观察
