浙江省教育厅科研计划(SJY03006)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 人IL-6 mRNA的实时定量检测法
- 2008年
- 目的:建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法,并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达。方法:(1)抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,PCR扩增IL-6后纯化PCR产物,与pMD 18-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α。提取重组质粒DNA,作为实时荧光定量检测的标准品。建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法。(2)终浓度分别为0、100、200、400、800和1600mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞,定量检测IL-6 mRNA的表达。结果:(1)酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上。(2)TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广;灵敏度高;特异性好;重复性好。(3)牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6mRNA表达增高。结论:TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA。
- 邹立林郑晓群左江成王震季敬璋吕建新
- 关键词：逆转录聚合酶链反应牛膝多糖
- RT-qPCR检测人IL-6 mRNA的方法建立与运用
- 2006年
- 目的:建立实时定量检测人IL-6mRNA的方法并加以应用。方法:抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用IL-6引物进行实时荧光定量PCR扩增,扩增体系中加入SYBRGreenⅠ。结果:该法检测IL-6mRNA线性范围广,灵敏度高,特异性好,重复性好,方法简单。结论:该法可较为精确地定量IL-6mRNA。
- 邹立林吕建新
- 关键词：白细胞介素-6核糖核酸信使逆转录-聚合酶链反应
- 荧光定量PCR检测人PDGFB mRNA方法的建立与运用
- 2007年
- 目的:克隆人PDGFB mRNA的cDNA,并以此作标准品,建立TaqMan技术实时定量检测人PDGFB mRNA的方法并加以应用。方法:RT-PCR扩增人PDGFB mRNA,将纯化产物与pMD18-T载体连接,转化DH-5 α感受态细胞。提取重组质粒,以PCR扩增、限制性内切酶双酶切、测序进行鉴定,作为标准品,建立实时定量检测人PDGFB mRNA的方法,用以检测HBSAg阴性组和HBSAg阳性组PDGFB mRNA含量。结果:PCR扩增、双酶切鉴定及测序分析均证实PDGFB cDNA重组成功。实时定量检测PDGFB mRNA后发现,HBSAg阴性组和HBSAg阳性组的Ct值分别为(32.185±2.006)和(21.769±5.256),浓度分别为(1.27±0.87)×107拷贝/106PBMC和(1.24±0.58)×109拷贝/106PBMC(P<0.05),后者PDGFB mRNA含量明显高于前者。结论:本研究成功克隆了PDGFB荧光定量PCR标准;荧光定量PCR检测人PDGFB mRNA含量具有快速、准确、简便,特异性强等优点,适用于临床检测。
- 邹立林丁志囡王震吕建新
- 关键词：逆转录-聚合酶链反应乙肝病毒表面抗原
