广东省自然科学基金(04020404)
- 作品数：14 被引量：54H指数：6
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- 小鼠骨髓耐受性树突状细胞的体外培养与鉴定被引量：13
- 2005年
- 目的建立一种简单经济的小鼠骨髓耐受性树突状细胞(DC)的培养方法,为进一步研究耐受性DC在自身免疫性疾病治疗中的运用打下基础。方法取小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞,加入细胞因子rmGM-CSF和IL-4,分成磷酸酯多糖(LPS)-DC和单纯DC两组,前者在培养结束前18h加入LPS,后者不加;培养6d后收集疏松贴壁细胞进行形态、细胞表面标记以及免疫功能的鉴定。结果用此方法培养的细胞其表面CD11c的表达率超过76%,具有典型的DC形态。单纯组DC的细胞中度表达MHCⅡ类分子,低水平表达共刺激分子,刺激T细胞增殖的能力较弱;LPS-DC组细胞高水平表达MHCII类分子和共刺激分子,能够诱导T细胞大量增殖。结论利用此法能在体外培养出大量的未成熟DC,具有耐受性,为其在治疗自身免疫性疾病的应用奠定了基础。
- 顾春瑜王前郑磊裘宇容
- 关键词：树突状细胞骨髓细胞培养
- 致耐受DC及其诱导方法研究进展被引量：8
- 2006年
- 致耐受树突状细胞(tolerogenic dendritic cell,Tol DC)可以诱导T细胞免疫耐受,近年来在移植耐受诱导、自身免疫病和变态反应治疗等方面展示出独特的应用价值。体外大量获取致耐受DC是其应用的前提,本文就目前体外诱导致耐受DC的常用方法及其机制作一综述。
- 郑磊包杰王前
- 关键词：树突状细胞免疫耐受体外诱导
- 基于手法筛选的小鼠骨髓树突状细胞的体外培养方法被引量：6
- 2005年
- 目的：通过建立简单经济的小鼠骨髓树突状细胞的体外培养方法，比较不同成熟状态下树突状细胞生物免疫学特性的变化。 方法：实验于2004-07／2005-06在南方医院检验医学中心完成。①取C57B／L小鼠骨髓细胞作为树突状细胞的前体细胞。将培养的树突状细胞分成两组，未成熟树突状细胞组(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4诱导)；成熟树突状细胞组(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4+脂多糖)，每天光镜观察各组细胞生长情况。第6天收集细胞，其形态采用电镜观察。②两组树突状细胞表型分析采用流式细胞仪分析。③取BALB／c小鼠脾脏细胞，分离T细胞作为反应细胞。用两组树突状细胞作为刺激细胞。按刺激细胞与反应细胞1∶5，1∶10，1∶20，1∶40的比例混合培养，并用T细胞悬液作阴性对照，观察混合淋巴细胞反应情况。 结果：①树突状细胞培养的光镜观察：未成熟树突状细胞多为圆形，少量菌幕样突起；脂多糖刺激后，树突状细胞呈悬浮状态，表面较多细长突起。②树突状细胞电镜观察结果：扫描电镜示未成熟树突状细胞表面皱褶和较少的毛刺；成熟树突状细胞表面大量树枝状细长突起。透射电镜示未成熟树突状细胞形态较规则，突起较少，胞浆内有许多吞饮泡及多泡体；成熟树突状细胞形态不规则，胞内囊泡结构减少，细胞器较丰富，细胞核偏向一侧，表面有细长树枝状突起。③各组树突状细胞表型分析：未成熟树突状细胞表面中度表达主要组织相容性复合体Ⅱ类分子，低水平表达CD40，CD86和CD25；成熟树突状细胞表面高度表达主要组织相容性复合体Ⅱ类分子，高水平表达共刺激分子。④混合淋巴细胞反应：未成熟树突状细胞只能轻度刺激同种T细胞增殖；成熟树突状细胞能够刺激T细胞大量增殖。 结论：采�
- 郑磊顾春瑜王前包杰裘宇容
- 关键词：树突细胞骨髓小鼠
- 利用小干扰RNA表达框鉴定小鼠骨髓树突状细胞有效沉默RelB基因的实验研究被引量：4
- 2006年
- 目的构建靶向小鼠RelB基因的小干扰RNA(siRNA)表达框,鉴定针对小鼠骨髓树突状细胞(DC)的RelB基因最有效的siRNA序列。方法利用PCR方法构建3个不同位点的表达框,R1/siRNA、R2/siRNA和R3/siRNA分别位于1027、302和1121位点。利用阳离子脂质体AdvantGene转染小鼠骨髓DC,转染24h后,脂多糖(LPS)刺激DC,用RT-PCR和免疫荧光方法检测DC RelB基因表达的变化。结果经LPS刺激后DC成熟,RelB基因表达显著高于未成熟DC;R1/siRNA和R3/siRNA转染DC后,LPS刺激仍然可以增强RelB基因表达,而R2/siRNA转染DC后,LPS刺激不能增加RelB基因表达。结论R2/siRNA可有效抑制RelB基因表达,有望用于构建新的耐受性DC应用于临床免疫耐受的诱导。
- 郑磊包杰王前杨红玲裘宇容
- 关键词：树突状细胞RELB免疫耐受
- 构建体外树突状细胞诱导淋巴细胞的调节模型被引量：1
- 2006年
- 目的:观察体外培养条件下,不同成熟状态的树突状细胞在调节机体Th1/Th2免疫应答的不同作用,建立体外淋巴细胞反应的调节模型。方法:实验于2004-10/2005-04在南方医科大学南方医院完成。利用小鼠的骨髓细胞体外培养树突状细胞,将培养的树突状细胞分成两组,一组在培养结束前18h加入脂多糖刺激其成熟(以下称成熟树突状细胞组);一组不加入脂多糖刺激,使其保留未成熟树突状细胞特性(以下称未成熟树突状组)。两组分别与同种异型T细胞混合培养,检测各组体外培养上清中白细胞介素12的水平,以及混合培养上清中干扰素γ、白细胞介素2、白细胞介素4以及白细胞介素10的水平。结果:①树突状细胞培养的情况:在倒置显微镜下观察骨髓前体细胞在培养板中的生长情况良好,细胞大量增殖,到第6天收获,每2只小鼠的骨髓细胞可得到(1.0～2.0)×107个树突状细胞,完全能够满足实验的要求。②白细胞介素的水平随着培养天数的增加而升高(P<0.01)。在加入脂多糖刺激后,成熟组树突状细胞培养上清中白细胞介素12的水平高于未成熟组[(903.07±29.47)ng/L,(238±23.56)ng/L]。③在混合淋巴细胞反应上清中,未成熟组树突状细胞的培养上清中干扰素γ和白细胞介素2含量低于成熟组树突状细胞的培养上清[(763.12±101.67),(1421.06±182.95)ng/L;(133.15±13.55),(236.15±14.22)ng/L],两组比较差异有显著性(P<0.01)。未成熟组树突状细胞培养上清中白细胞介素4和白细胞介素10的含量略高于成熟组[(90.65±11.31),(78.76±10.78)ng/L;(97.34±7.33),(93.13±8.60)ng/L),两组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:不同成熟状态的树突状细胞通过分泌不同水平的细胞因子来调节机体Th1/Th2免疫应答,未成熟树突状细胞少量分泌白细胞介素12,诱导机体向Th2型反应偏倚;成熟树突状细胞分泌大量的白细胞介素12,诱导机体向Th1型反应偏倚。
- 顾春瑜郑磊裘宇容包杰王前
- 关键词：树突细胞TH1细胞TH2细胞白细胞介素12淋巴细胞
- RNAi RelB DC对CD4^+CD25^+双阳性T细胞诱导效应的实验研究
- 2009年
- 目的:探讨核转录因子NF-κB/RelB基因沉默的树突状细胞(RNAiRelB dendritic cell,RNAiRelBDC)诱导异基因CD4+CD25+双阳性T细胞生成的生物效应。方法:实验分为Control-DC组、LPS-DC组、RNAiRelBDC组和LPS-RNAiRelBDC组,各组DC均与同种异基因T淋巴细胞混合反应后,采用流式细胞术(FCM)分析各组CD4+CD25+双阳性T细胞生成比例。结果:Control-DC组DC较LPS-DC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞的增高幅度更显著,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。RNAiRelBDC组和LPS-RNAiRelBDC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成比例与LPS-DC组相比均存在显著差异(P<0.01),RNAiRelBDC组DC诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成能力较Control-DC组强,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RelB基因被沉默后DC具有较强的诱导CD4+CD25+双阳性T细胞生成的能力,表现出未成熟DC的特点,这种RNAiRelBDC有望成为一种新型的致耐受DC用于免疫耐受的诱导研究。
- 郑磊颜晓慧王前包杰裘宇容
- 关键词：RELB基因沉默树突状细胞生物学效应
- 小鼠骨髓成熟与不成熟树突状细胞中RelB基因的表达被引量：9
- 2006年
- 目的:探讨体外分离培养的小鼠骨髓来源的成熟与未成熟DC中核转录因子RelB(avianreticuloendotheliosisviral(v-rel)oncogenerelatedB)基因的表达。方法:无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导骨髓前体细胞产生未成熟的DC,未成熟的DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的DC,用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟与未成熟DC中,RelBmRNA和其蛋白的表达。结果:流式细胞术分析显示未成熟的DC中MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子(CD86和CD40)呈低水平表达;而成熟的DC则呈高水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的DC中呈低水平表达;而在成熟的DC中呈高水平表达,两者比较具有统计学意义(P<0.01)。结论:RelB基因的表达与小鼠骨髓来源的DC的成熟状态密切相关。抑制DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。
- 包杰郑磊王前顾春瑜裘宇容李娟
- 关键词：小鼠骨髓树突状细胞
- RNAi DC在移植免疫耐受诱导研究中的应用进展被引量：2
- 2006年
- 致耐受树突状细胞(Tol DC)可以诱导T细胞免疫耐受,近年来在移植免疫耐受诱导及自身免疫病治疗等方面展示出独特的应用价值。利用近年来发展的RNA干扰(RNAi)技术可以特异性沉默DC某些基因表达构建出RNAi DC,是诱导致耐受性DC产生的又一新方法。
- 包杰郑磊王前
- 关键词：RNA干扰树突状细胞器官移植免疫耐受
- 小鼠骨髓源性树突状细胞和DC2.4中RelB基因表达水平的比较研究被引量：2
- 2006年
- 目的比较研究体外分离培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(bonemarrow-deriveddendriticcells,BM-DC)和DC2.4中核转录因子RelB基因的表达水平。方法无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导体系扩增骨髓前体细胞的方法产生未成熟的BM-DC,未成熟的BM-DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的BM-DC;DC2.4细胞系用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液于37℃,5%CO2条件孵箱中培养。用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟的BM-DC、未成熟的BM-DC和DC2.4,RelBmRNA和其蛋白的表达。结果流式细胞术分析显示MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达,在成熟的BM-DC中则呈高水平表达;共刺激分子CD86在成熟的BM-DC和DC2.4中均呈高水平表达,而在未成熟的BM-DC中呈低水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达;而在成熟的BM-DC中呈高水平表达,成熟的BM-DC与未成熟BM-DC及DC2.4均存在显著差异(P<0.01)。结论RelB基因的表达与小鼠BM-DC的成熟状态密切相关。RelB基因在DC2.4中呈低水平表达,提示DC2.4是一种不成熟的DC细胞系。DC2.4具有的未成熟DC的特点可能与RelB基因的低水平表达有一定关系。抑制骨髓DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。
- 郑磊包杰王前顾春瑜裘宇容李娟
- 关键词：小鼠DC2.4RELB基因表达
- SLE患者T细胞亚群及CD4^+CD25^+T细胞的检测及意义被引量：5
- 2006年
- 目的探讨T淋巴细胞亚群及CD4+CD25+T细胞在SLE病人发病中的临床意义。方法采用流式细胞术检测了68例SLE患者(其中活动期病人38例,稳定期病人30例)以及30例健康体检者外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD45RA+、CD8+CD28+、CD8+CD28-T细胞亚群以及CD4+CD25+T细胞水平。结果与正常对照组相比,活动期SLE病人CD3+CD4+、CD4+CD45RA+细胞亚群的百分率明显降低(P=0.000,P=0.001),CD3+CD8+、CD8+CD28-细胞亚群的百分率明显升高(P=0.000,P=0.000)。稳定期患者CD8+CD28+细胞水平明显高于活动期和对照组(P=0.011,P=0.435),CD3+CD4+、CD4+CD45RA+水平高于活动期,但无显著性差异(P=0.067,P=0.081),CD8+CD28-T细胞亚群无明显变化(P=0.997)。活动期病人CD4+CD25+T细胞百分率明显低于正常对照组及稳定期病人(P=0.000,P=0.000),稳定期病人与对照组之间无显著性差异(P=0.572)。结论SLE患者T淋巴细胞亚群的水平是异常的。病人外周血CD8+CD28-T细胞亚群的比例升高与疾病的病程和临床表现相关联,它的升高在疾病的稳定中起重要作用。CD4+CD25+T细胞水平降低可能是导致机体抑制自身免疫反应的功能减弱并引发SLE发生发展的重要因素。
- 裘宇容杨春莉李娟郑磊王春燕包杰
- 关键词：T淋巴细胞亚群调节性T细胞SLE
