国家自然科学基金(81100296)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 相关作者：虢灿杰马雄盛黎卞兆连魏本娟更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市青年科技启明星计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- miR-126报告基因载体的构建及其功能鉴定
- 2014年
- 目的:根据miR-126的预测靶点构建荧光素酶报告基因重组质粒,并进行功能鉴定。方法:利用sanger数据库提供的miR-126靶序列设计引物,PCR扩增目的微小RNA(microRNAs,miRNAs)靶基因3'非编码区(three-prime untranslated regions,3'UTRs)序列,PCR产物双酶切,后连入经过同样双酶切的pGL3-control载体中,连接产物转化大肠杆菌DH5α,进行阳性克隆鉴定。同样,将候选靶基因3'UTRs突变,突变型3'UTR克隆入pGL3-control报告载体,构建野生型和突变型的报告基因重组质粒。将野生型和突变型的报告基因载体分别和化学合成的microRNA以及内参质粒共转染293TN细胞,进行双荧光素酶检测。结果:成功构建miR-126报告基因野生型和突变型重组质粒pGL3-VEGF-A-3'UTR和pGL3-VEGF-A-3'UTR,质粒测序及酶切结果完全正确。瞬时转染实验显示,过表达miR-126能直接抑制VEGF-A-3'UTRs报告基因活性。结论:miR-126对VEGF-A具有靶向调节功能。
- 虢灿杰卞兆连盛黎马雄
- 关键词：MIR-126荧光素酶报告基因靶基因
- 胃幽门螺杆菌感染与口臭的相关性研究被引量：7
- 2015年
- 目的:探讨胃幽门螺杆菌感染与口臭发生的相关性。方法:选取48例口臭患者为研究对象,另选取96例无口臭的健康志愿者为无口臭组,通过13C呼气试验检测所有研究对象幽门螺杆菌的感染情况,比较两组幽门螺杆菌的感染率。根据是否感染幽门螺杆菌分为感染组和无感染组,比较两组口臭的发生率,分析幽门螺杆菌感染与口臭发生的相关性。结果:口臭组和非口臭组患者幽门螺杆菌的感染率分别为79.17%,27.08%,口臭组显著高于无口臭组,差异有统计学意义(x2=35.16,P<0.05)。口臭与幽门螺杆菌的感染显著相关(r=0.4)。幽门螺杆菌感染组患者和未感染组口臭的发生率分别为70.31%和3.75%,感染组显著高于未感染组,差异有统计学意义(x2=70.89,P<0.05)。幽门螺杆菌的感染与口臭的发生率显著相关(r=0.69)。结论:幽门螺杆菌感染与口臭的发生有密切的相关性,是引起口臭的一个重要因素。
- 龚宇华潘炜娟魏本娟郁利虢灿杰
- 关键词：口臭幽门螺杆菌
- 大鼠miR-126慢病毒表达载体的构建及其在肝星状细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活并发生表型改变是肝纤维化形成的关键,本实验期待通过构建慢病毒rno-miR-126,并体外转染HSC,为研究miR-126在肝纤维化中的作用奠定实验基础。方法:PCR扩增miR-126的前体,构建miR-126的重组表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-miR-126,脂质体法转染包装细胞293TN细胞,包装产生慢病毒,以293TN细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达水平测定病毒滴度,构建重组慢病毒(Lentivirus,LV)载体(Lv-miR-126),体外转染活化的HSC-T6,荧光显微镜观察荧光阳性细胞百分率,real-time PCR检测miR-126转入水平。结果:经PCR扩增检测阳性菌落和测序证实,成功构建携带大鼠miR-126基因重组慢病毒载体。倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293TN呈绿色荧光,并测得滴度108>ifu/ml。荧光显微镜下HSC的荧光阳性率在95%以上。Real-time PCR检测证实miR-126转染后获得了较高的表达。结论:成功构建大鼠慢病毒载体Lv-miR-126,并可在体外高效稳定表达,为本研究后续对miR-126靶点验证和功能研究奠定实验基础。
- 虢灿杰卞兆连盛黎马雄
- 关键词：MIRNA慢病毒
