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云南宾川脐橙蔗糖转运基因的克隆和表达分析被引量：1: 2015年; 蔗糖不仅是植物光合作用的主要产物,也是植物体内运输的主要物质和许多果实中糖积累的主要形式,对果实品质的形成有重要影响.在蔗糖合成的路径中,蔗糖合成酶(Sucrose Synthase)和蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate Synthase)是蔗糖代谢的关键酶.在前人报道苹果蔗糖转运基因的基础上,对云南宾川脐橙蔗糖转运基因进行克隆和表达分析,并对其相关的生理生化指标(蔗糖等糖含量、蔗糖合成代谢相关酶活性等)进行测定.研究结果显示,在宾川脐橙果实接近成熟时蔗糖转运基因的表达量最高,成熟脐橙中果肉的蔗糖含量比果皮中高,而成熟脐橙果肉和果皮中蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶的活性差异不显著.; 乔璞陈秭君靳子安卢文成宋玉竹张金阳韩芹芹; 关键词：脐橙基因克隆基因表达

猴B病毒gG蛋白的主要特性与B细胞表位预测被引量：4: 2014年; 为了探讨猴B病毒gG基因编码蛋白作为疫苗候选抗原和ELISA试剂盒研制所需检测用抗原的可能性,本研究从Genbank数据库中获得猴B病毒gG基因序列,采用IEDB、SOSUI等在线分析系统对该基因序列的编码区进行生物信息学分析,并预测gG基因编码蛋白的理化性质、可溶性和表面可及性、跨膜区、抗原表位以及线性B细胞表位等.分析结果表明,B病毒gG蛋白为膜蛋白,具有一个跨膜螺旋,以及较为丰富的β-转角,为可溶性蛋白,蛋白序列中具有多个抗原表位和优势线性B细胞表位,有作为猴B病毒疫苗候选抗原和抗体诊断用抗原的潜力.; 张金阳孙涛杨光文宋玉竹韩芹芹夏雪山; 关键词：生物信息学 B细胞表位抗原疫苗

应用酵母双杂交系统筛选SlNAC3互作蛋白被引量：1: 2014年; SlNAC3是负向调控番茄逆境胁迫的NAC蛋白.本研究应用酵母双杂交系统,以SlNAC3作为诱饵蛋白,通过筛选均一化的番茄cDNA文库,获得与SlNAC3相互作用的蛋白.通过对120个阳性克隆进行验证,最后得到了7个目标蛋白.其中包括细胞壁结构蛋白、转录相关蛋白以及乙烯信号传导途径相关蛋白等.从酵母双杂交的结果来看,SlNAC3在代谢领域,如核受体及其它细胞结构、转录因子的调节及信号传导等方面,可能都发挥非常重要的作用.; 韩芹芹宋玉竹张金阳; 关键词：酵母双杂交逆境胁迫番茄

狂犬病毒磷蛋白的生物信息学分析及其真核表达被引量：2: 2014年; 为了探讨运用蛋白全长和多肽抗原制备抗狂犬病毒磷蛋白抗体的可能性,本研究运用生物信息学专业软件对二级结构、表面可及性、亲水性和抗原指数进行综合分析,并预测出狂犬病毒磷蛋白的抗原表位.分析结果表明,抗原表位主要位于狂犬病毒磷蛋白的区段14-37、39-66、70-91、106-114、134-158、161-173、187-201、207-221、229-234、236-244、249-258、278-297及以上区段附近.同时,本研究构建了狂犬病毒磷蛋白基因的真核表达载体,转染细胞进行真核表达后,能够被抗狂犬病毒阳性血清所识别,说明磷蛋白上存在大量有效的抗原表位.多个参数对狂犬病毒磷蛋白的抗原表位的预测,为进一步开展狂犬病毒磷蛋白的单克隆抗体制备、结构特征以及表位鉴定工作奠定理论基础.; 张金阳李贞景宋玉竹韩芹芹夏雪山; 关键词：狂犬病毒磷蛋白抗原表位真核表达

活性蛋白质表达谱分析与病毒学研究: 2014年; 活性蛋白质表达谱(activity-based protein profiling,ABPP)分析技术是功能蛋白质组学的一种策略,属于化学蛋白质组学的一部分.它借助化学小分子从功能角度直接切入蛋白质组的研究,能够直接对蛋白质组中感兴趣的靶酶蛋白的活性进行检测,为药物的发现提供强有力的支持.因此,ABPP技术被认为是基于功能的新一代蛋白质组学技术.随着ABPP分析技术和方法的不断成熟,其应用领域也不断扩展.最近一系列研究表明,今后ABPP分析技术可能成为病毒学研究的又一重要武器.本文综述了ABPP分析技术的基本原理及其在病毒学研究中的应用.; 张金阳宋玉竹夏雪山; 关键词：病毒相互作用探针

丙型肝炎病毒NS3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：3: 2015年; 提高对丙型肝炎患者实验室检测的灵敏度和特异性,对相关人群进行筛查和早期诊断,是控制丙型肝炎病毒(HCV)流行与传播的有效措施。为了建立更为可靠的HCV诊断方法,通过采用PCR方法从J6/JFH12a型病毒中克隆出HCV ns3基因片段,将其连接到p ET-28a载体上,重组载体p ET-28a-ns3转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,以10%SDS-PAGE进行鉴定,获得表达的NS3重组蛋白分子量为72 k Da。将纯化的NS3蛋白免疫BALB/c小鼠,第4次免疫后采集血液并分离血清进行抗体活性鉴定,小鼠抗体效价为1∶256 000。进一步的Western blotting和间接免疫荧光结果显示,以重组NS3蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体可以很好地识别HCV感染Huh7.5.1细胞中的NS3蛋白,为下一步开展单克隆抗体制备和检测试剂盒研制工作奠定了基础。; 孙涛杨光文张金阳夏雪山; 关键词：丙型肝炎病毒 B细胞表位 NS3蛋白多克隆抗体

α-鹅膏[蕈]毒环肽核酸适配体的筛选和结构分析被引量：6: 2016年; α-鹅膏[蕈]毒环肽(α-amanitin)是从致命鹅膏毒伞子实体中分离的多肽物质。本文采用配体指数富集系统进化(systemic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)技术,以α-鹅膏[蕈]毒环肽为靶蛋白,以亲和填料epoxy-activated sepharose 6B为筛选介质,从体外合成的随机单链DNA文库中筛选其核酸适配体。经过12轮筛选,将第12轮筛选产物克隆测序,对获得的12条核酸适配体进行分析。二级结构预测分析表明,茎环和口袋结构为主要的结构形式,提示其可能是核酸适配体与α-鹅膏[蕈]毒环肽特异性结合的基础。对得到的核酸适配体进行特异性和灵敏度检测,其中E06核酸适配体的特异性最好,为核酸适配体检测蘑菇中α-鹅膏[蕈]毒环肽的残留奠定了基础。; 汪颖乔璞宋玉竹张金阳陈强韩芹芹; 关键词：核酸适配体核苷酸

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云南省应用基础研究基金(KKS0201326002)