国家高技术研究发展计划(2007AA02Z110)
- 作品数：9 被引量：5H指数：1
- 相关作者：李校堃刘彦隆吴晓萍曾耀英黄志锋更多>>
- 相关机构：温州医学院暨南大学南京理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省科技厅新苗人才计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组hFGF-7腺病毒对角质形成细胞的生物学效应
- 2009年
- 目的:研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子7(hFGF-7)对人皮肤角质形成细胞(HaCat)的生物学效应。方法:通过倍比稀释和感染实验,测定重组腺病毒rAd-hFGF-7的滴度;流式细胞术检测重组腺病毒感染HaCat细胞的感染效率;MTT法检测rAd-hFGF-7对HaCat细胞增殖的影响;重组腺病毒对HaCat细胞周期的影响通过流式细胞术进行检测。结果:高滴度重组腺病毒可高效感染HaCat细胞,其促细胞增殖作用随着重组腺病毒MO I值的增加而增强,当MO I值为50时,感染细胞进入S期和G2期的细胞比率显著增加。结论:重组腺病毒rAd-hFGF-7可促进HaCat细胞的增殖,改变HaCat细胞周期。
- 吴晓萍曾耀英
- 关键词：腺病毒细胞增殖细胞周期
- 重组hFGF-10腺病毒对HaCat细胞影响的蛋白质组学研究
- 2010年
- 研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)对HaCat细胞蛋白质组的影响,由鉴定的差异蛋白质推测hFGF-10对HaCat细胞作用的可能机制。采用双向凝胶电泳结合串联飞行时间质谱技术,对空载体腺病毒Ad感染细胞和重组腺病毒rAd-hFGF-10感染细胞的总蛋白图谱上的差异蛋白点进行鉴定,并通过半定量RT-PCR和Westernblotting在转录和翻译水平对差异蛋白进行确证。结果显示,获得了蛋白质分离效果较好的双向凝胶电泳图谱,鉴定了4种与细胞凋亡、细胞骨架调控、蛋白质降解等相关的差异蛋白质,并在转录和翻译水平确证了差异蛋白质VDAC2在导入目的基因hFGF-10的HaCat细胞中表达上调,提示VDAC2可能在hFGF-10的生物学功能中发挥作用。
- 吴晓萍曾耀英
- 关键词：腺病毒蛋白质组学细胞凋亡
- 角质细胞生长因子对1C6细胞和4C18细胞的促增殖作用
- 2010年
- 目的观察角质细胞生长因子(KGF)对胸腺上皮来源1C6细胞和4C18细胞的促增殖作用。方法鼠胸腺上皮髓质和皮质来源的1C6细胞、4C18细胞和鼠腹腔巨噬细胞来源的RAW细胞,分别经含不同浓度(25、50、100、200、400、800ng/ml)的KGF和不含KGF的完全培养液(对照组)作用24、48和72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,并绘制细胞增殖率曲线。结果 MTT法检测显示,在低浓度(<200ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度增加不断升高;KGF浓度为200ng/ml时,1C6细胞增殖率达最高值;在高浓度(>200ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加逐渐下降;与对照组比较,浓度为100、200、400ng/ml的KGF分别作用24、48和72h对1C6细胞均具有明显的促增殖作用(均P<0.05)。在低浓度(<100ng/ml)时,4C18细胞增殖率随KGF浓度增加不断升高;KGF浓度为100ng/ml时,4C18细胞增殖率达最高值;在高浓度(>100ng/ml)时,4C18细胞增殖率随KGF浓度的增加逐渐下降;与对照组比较,浓度为50、100、200、400ng/ml的KGF分别作用24、48和72h对4C18细胞均具有明显的促增殖作用(均P<0.05)。但不同浓度的KGF对RAW细胞均未见促增殖作用。结论 KGF对胸腺上皮来源的1C6细胞和4C18细胞均具有明显的促增殖作用。
- 张卫星刘彦隆于洋龚琦李校堃林绍强
- 关键词：细胞增殖动物实验
- 体外培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响
- 2010年
- 目的:探讨体外长期培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响。方法:制备原代和第7代体外培养的人皮肤角质形成细胞的总蛋白样品进行双向凝胶电泳。采用PDQuest图像分析软件对获得的双向凝胶电泳图谱进行分析。串联飞行时间质谱鉴定选取的差异表达蛋白质点。半定量RT-PCR对差异表达蛋白质的mRNA水平进行确证。结果:获得了蛋白质分离效果较好的双向凝胶电泳图谱,串联飞行时间质谱鉴定选取的2个在第7代角质形成细胞中表达显著下调的蛋白质分别为PA-FABP(psoriasis-associated fatty acidbinding protein5)和Galectin-7,半定量RT-PCR确证第7代角质形成细胞中PA-FABP和Galectin-7的基因转录水平较原代角质形成细胞相应的基因转录水平显著降低。结论:体外长期培养人皮肤角质形成细胞可能影响一些与细胞的脂肪酸代谢及细胞凋亡相关蛋白的表达。
- 吴晓萍曾耀英聂燕芳刘钧澄
- 关键词：人皮肤角质形成细胞质谱RT-PCR
- 乳糖诱导角质细胞生长因子-2在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2010年
- 目的:研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行角质细胞生长因子-2(KGF-2)基因重组蛋白的表达,探讨工程化生产的可能性。方法:分别比较乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度对重组表达产物的影响,并以IPTG诱导作为对照,确定较为优化的乳糖诱导条件。结果:对于重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到良好效果,以乳糖为诱导剂的A600值较IPTG高,诱导产物的表达量与IPTG诱导产物相当。以终浓度为10g.L-1乳糖在33℃下诱导6h,可以达到良好的诱导效果,并且具有较好的可溶性和促细胞生长活性。结论:乳糖可替代IPTG诱导角质细胞生长因子基因表达,并取得良好效果,为工程化生产提供了良好的实验依据。
- 田海山唐禄王晓杰王会岩刘笑菊冯秀萍王一李校堃
- 关键词：角质细胞生长因子-2乳糖诱导IPTG
- 角质细胞生长因子对老龄鼠胸腺细胞增殖作用的研究
- 2008年
- 目的观察角质细胞生长因子(KGF)通过恢复胸腺上皮细胞(TEC)数量促进老龄鼠胸腺细胞增殖的作用。方法①体内实验:BALB/C小鼠10只,随机分为KGF处理组和对照组,每组各5只,连续7d分别给予皮下注射重组人KGF(5mg·kg-1.d-1)和生理盐水,4周后检测小鼠胸腺和脾组织的细胞总数,流式细胞仪分别检测胸腺组织中CD4单阳性(CD4SP)、CD8单阳性(CD8SP)、CD4CD8双阳性(DP)、CD4CD8双阴性(DN)以及脾组织中CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的比例;②体外实验:鼠胸腺上皮来源的1C6细胞,分别经含不同浓度(25、50、100、200、400、800ng/ml)的重组人KGF和不含重组人KGF的完全培养液(对照组)作用24h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率。结果细胞计数和流式细胞仪检测显示,与对照组相比,KGF处理组平均胸腺细胞总数和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T细胞亚群的平均细胞数以及KGF处理组平均脾细胞总数和CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的平均细胞数均有明显增加(均P<0.05)。MTT法检测显示,在低浓度(<200ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加不断升高;当KGF浓度为200ng/ml时,1C6细胞增殖率达到最高值;而在高浓度(>200ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加又逐渐下降;与对照组比较,浓度为100、200、400ng/ml的重组人KGF对1C6细胞具有明显的促增殖作用(均P<0.05)。结论KGF可通过恢复老龄鼠TEC数量以及促进胸腺细胞生成和增加成熟T细胞向外周输出而增强机体的免疫力。
- 刘彦隆赵勇林虹肖健李校堃
- 关键词：胸腺
- 角质细胞生长因子对胸腺作用的研究进展被引量：1
- 2009年
- 角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor，KGF）是1989年Rubin等人从人胚胎肺成纤维细胞的培养上清中分离并纯化的。因这种细胞因子具有促进小鼠角质细胞有丝分裂的作用，故将其命名为角质细胞生长因子。随后的一系列研究表明，KGF的靶细胞为上皮细胞，分泌细胞为各种来源的间质细胞，其作用是促进上皮细胞的增殖和生长。
- 刘彦隆徐龙李校堃
- 关键词：角质细胞生长因子胸腺肺成纤维细胞细胞有丝分裂培养上清间质细胞
- EudragitS-100对蛋白折叠的促进作用被引量：1
- 2009年
- 目的:以重组人角化细胞生长因子(recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)为模型,研究一种对pH较为敏感的多聚化合物聚丙烯酸树脂EudragitS-100对蛋白折叠的促进作用及其作用机制。方法:直接将变性蛋白加入到含有不同浓度Eudragit的蛋白复性缓冲液中,采用MTT法、荧光分光光度法、圆二色光谱法以及高效液相色谱法来比较分析不同浓度EudragitS-100对变性rhKGF-2的复性促进作用。结果:在Eudragit S-100作用下,rhKGF-2的复性产率比普通稀释复性法显著增高且最高达到71%。研究表明Eudragit S-100的促进蛋白折叠的作用是基于Eudragit S-100与rh-KGF-2发生了特异性的结合反应。另外,本研究还发现蛋白复性缓冲液中尿素的浓度对蛋白的复性也存在较大影响。结论:Eudragit S-100能显著提高以rhKGF-2为代表的蛋白的正确折叠和复性收率。
- 黄志锋杨树林张翼冯文科李校堃
- 关键词：S-100蛋白折叠
- Eudragit S-100对人转化生长因子β1(TGF-β1)复性的促进作用及其机制
- 2009年
- 为考察一种对pH较为敏感的多聚化合物聚丙烯酸树脂Eudragit S-100对人转化生长因子β1(transforming growth factor,TGF-β1)复性的作用,将以包涵体形式存在TGF-β1进行变性,并将变性蛋白直接加入到含有不同浓度Eudragit的蛋白复性缓冲液中。采用MTT法、荧光分光光度法、圆二色谱以及高效液相色谱法等方法来比较分析不同浓度Eudragit S-100对变性TGF-β1的复性促进作用。实验结果表明,在Eudragit S-100作用下TGF-β1的复性产率比普通稀释复性法显著增高,且最高达到53%,研究还表明Eudragit S-100的促进蛋白复性的作用是基于Eudragit S-100与TGF-β1发生了特异性的离子结合反应。通过这一反应,Eudragit S-100遮蔽了蛋白多肽间的疏水基团,有效地抑制了蛋白的聚集进而发挥其促复性功能。
- 黄志锋杨树林倪春燕张翼周翔天李校堃
- 关键词：蛋白复性
