黑龙江省科技攻关计划(GB05B106)
- 作品数：18 被引量：59H指数：5
- 相关作者：张冬杰杨国伟杨秀芹郭丽娟汪晓鸿更多>>
- 相关机构：黑龙江省农业科学院东北农业大学东北林业大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划黑龙江省杰出青年科学基金黑龙江省博士后基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 野猪RBP4基因的克隆、表达及变异初步研究被引量：3
- 2008年
- 视黄醇结合蛋白是体内一类将维生素A从肝中转运至靶组织以实现维生素A的细胞内转运代谢的特异的运载蛋白,在协助维生素A发挥生理功能中起着不可替代的作用。它既是一个影响猪的繁殖性状的候选基因,同时也是一个研究维生素A代谢障碍及肥胖症的候选基因。为了进一步揭示其群体遗传变异,寻找新的遗传标记,本研究对野猪(Sus scrofa ussuricus)RBP4基因进行了克隆、表达和序列分析,并对所发现的点突变进行了基于限制性内切酶MspⅠ的PCR-RFLP分析。序列分析表明野猪与大白猪相比存在着4个SNPs;该基因在野猪的肝脏、肾脏、肺、大肠和肌肉中表达,在心脏、胃、脾、小肠和睾丸中不表达;对14头野猪的酶切多态性分析表明该突变位点是多态位点,并且3种基因型的分布符合Hardy-Weinberg定律。
- 张冬杰杨龙刘娣
- 关键词：野猪RBP4基因克隆
- 不同日龄大白猪视黄素X受体β基因的表达研究被引量：1
- 2008年
- 采用RT-PCR方法对大白猪的RXRβ基因在1,90,180,270和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,RXRβmRNA在大白猪的脾脏、子宫和卵巢中持续表达,1日龄时表达的组织最多且表达水平较高,但该基因在所检的11个组织中存在明显的时间和空间变化。
- 杨国伟吴赛辉马红刘娣
- 关键词：大白猪RT-PCR
- 东北民猪SLA-DQA基因的PCR-RFLP多态性分析被引量：8
- 2007年
- 采用克隆测序和PCR-RFLP的方法对SLA-DQA基因的整个编码区进行了扫描和多态性分析。结果表明该基因的第2外显子是整个基因的高变区,突变率达到5.6%,其中80%为有效突变,但没有发现新的等位基因;PCR-RFLP结果表明外显子2用限制酶EcoR I酶切可获得3种基因型:254 bp(AA)、254 bp/88 bp/ 166 bp(AB)、88 bp/166 bp(BB),用限制酶PvuⅡ酶切可获得3种基因型:254 bp(AA)、254 bp/129 bp/125 bp (AB)、129 bp/125 bp(BB),外显子3用限制酶FbaⅠ酶切可获得3种基因型:282 bp(AA)、282 bp/130 bp/152 bp (AB)、130 bp/152 bp(BB),外显子4用限制酶Hin1Ⅰ酶切可获得3种基因型:184 bp(AA)、184 bp/83 bp/101 bp (AB)、83 bp/101 bp(BB);Hardy-Weinberg平衡分析表明民猪在EcoRⅠ位点处于平衡状态(P<0.05),而在PvuⅡ位点处于不平衡状态(P>0.05),FbaⅠ和Hin 1Ⅰ位点处于极不平衡状态(P>0.01)。
- 张冬杰杨国伟汪晓鸿刘琪刘娣
- 关键词：民猪克隆PCR-RFLP
- 民猪的SLA-DRB基因的PCR-RFLP多态性分析被引量：2
- 2007年
- 采用克隆测序和PCR-RFLP相结合的方法,对民猪的SLA-DRB基因的整个编码区进行了扫描和多态性分析.结果表明该基因的第2外显子是整个基因的高变区,突变率达到5.6%,其中80%为有效突变,但没有发现新的等位基因;PCR-RFLP结果表明外显子1用内切酶AluⅠ酶切可获得3种基因型;外显子2用内切酶TaqⅠ酶切可获得3种基因型;外显子3用内切酶BcnⅠ酶切可获得3种基因型;外显子4用内切酶MboⅠ酶切可获得2种基因型;外显子5用内切酶Hin1Ⅰ酶切可获得3种基因型.Hardy-Weinberg平衡分析表明民猪在AluⅠ和Hin1Ⅰ处于平衡状态(P>0.05),在TaqⅠ、BcnⅠ和MboⅠ处于不平衡状态.
- 张冬杰杨国伟刘娣
- 关键词：民猪
- 大白猪骨桥蛋白基因的克隆、表达及功能分析被引量：2
- 2009年
- 应用RT-PCR方法克隆了全长909 bp的大白猪Osteopontin(OPN)基因。运用生物信息学工具进行的分析显示:OPN蛋白一级结构中天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸所占比例最高,含有特异的Arg-Gly-Asp序列(RGD),二级结构中α螺旋占很大比例,并且亲水性较强,OPN信号标签位于第一个同源区,共有的保守性序列为[KQ]-x-[TA]-x(2)-[GA]-S-S-E-E-K。基于蛋白序列所构建的2个分子进化树均表明猪与牛的亲缘关系最近,而与鸡最远。在mRNA水平上,OPN基因在猪体各组织中广泛表达,胃、肾、肺、小肠和卵巢相对较高,而心、脾和大肠则相对较低;在蛋白水平上,不同组织内该蛋白的大小不同,出现了70 ku,70和45 ku,70、45和24 ku 3种蛋白。
- 张冬杰刘娣汪晓鸿杨国伟
- 关键词：大白猪生物信息学反转录PCR
- 野猪MC4R基因的克隆及变异初步研究被引量：13
- 2007年
- 黑素皮质素受体4是在人类肥胖研究中发现的重要调节因子,参与调节动物的体重、采食量和能量稳态,缺失MC4R基因的突变纯合体小鼠出现遗传性肥胖。为了进一步揭示其群体遗传变异,寻找新的遗传标记,本研究对野猪(Sus scrofa ussuricus)MC4R基因进行了克隆(GenBank accession NoDQ388767)和序列分析,并对所发现的错义突变进行了基于限制性内切酶HindⅢ的PCR-RFLP分析。序列分析表明野猪与民猪MC4R基因的编码区序列完全相同,与大白猪相比存在4个SNPs;对14头野猪的酶切多态性分析表明该突变位点是多态位点,并且3种基因型的分布符合Hardy-Weinberg定律。结果表明,野猪具有独特的遗传信息。
- 杨秀芹于浩顾志刚刘娣
- 关键词：野猪MC4R基因
- 不同日龄大白猪骨桥蛋白基因的表达研究被引量：3
- 2009年
- 本研究采用RT-PCR方法对大白猪的骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因在1、7、90、180、270和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,OPN基因是一个广谱表达基因,在所检测的11个组织、6个时间点上均表达,但是存在时间和空间上的变化。据此推测该基因的生物功能非常广泛。
- 杨国伟张冬杰汪晓鸿王文涛刘娣
- 关键词：大白猪RT-PCR
- 猪CAPN3基因的克隆及PCR-SSCP分析被引量：3
- 2010年
- calpain3在肌肉组织中的特异表达,其活性显著影响宰后肉的嫩化。研究利用比较基因组学的方法首次克隆了猪CPAN3基因的内含子16-23,并利用PCR-SSCP方法在外显子1中寻找到1个插入/缺失突变和1个碱基替代,为进一步分析其变异和肉质的关系并进而确定遗传标记提供了基础。
- 邢明伟孙丽华刘娣
- 关键词：克隆
- 不同日龄大白猪视黄醇结合蛋白基因的表达研究
- 2009年
- 采用半定量RT-PCR方法对大白猪的Retinol-Binding Proteins(RBP)基因在1、90、180、270、360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究.结果表明RBP mRNA在肝脏、子宫和卵巢内持续表达,而且在肝脏中是持续高表达,子宫中RBP mRNA的表达在不同日龄间存在显著差异(P<0.05),且在90日龄时最低,脾脏不表达该基因,在胃里的表达时间较短,仅在1日龄时表达,心脏、肾脏、肺、大肠、小肠和肌肉组织中也表达RBPmRNA,但不同日龄不同组织的表达情况不一样,没有明显的规律性,但存在时间和空间的表达差异.
- 杨国伟张冬杰汪晓鸿王文涛刘娣
- 关键词：大白猪RBP
- 雌二醇和孕酮诱导猪子宫内膜上皮细胞OPN的表达状况被引量：1
- 2008年
- 目的探讨雌二醇和孕酮对猪子宫内膜上皮细胞内的骨桥蛋白基因作用效果。方法采用RT-PCR和Western-blot的方法,检测了猪子宫内膜上皮细胞中OPN基因的表达情况;采用半定量RT-PCR法检测添加终浓度为1μmol/L、0.1μmol/L、0.01μmol/L雌二醇和0.1μmol/L、0.01μmol/L、0.001μmol/L孕酮作用24 h和48 h后,OPNmRNA的表达变化情况。结果猪子宫内膜上皮细胞在非孕期转录OPN mRNA,表达70×10^3和45×10^3的OPN蛋白;添加雌二醇24 h后,OPN mRNA的表达水平降低了50%-53%（P〈0.05）,48 h后降低了12%-25%（P〈0.01）,均显著低于对照组;添加孕酮后,OPN mRNA的表达无显著变化（P〉0.05）。结论雌二醇抑制了OPN的表达,推测孕酮本身对OPN的表达不起作用。
- 张冬杰刘娣杨国伟孙丽华
- 关键词：子宫内膜上皮细胞骨桥蛋白雌二醇孕酮逆转录聚合酶链反应
