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国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-43-34): 作品数：11 被引量：43H指数：4; 相关作者：刁有祥程彦丽张坤肖坡国纪垒更多>>; 相关机构：山东农业大学临沂大学更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项山东省科技发展计划项目更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立与应用被引量：1: 2013年; 根据GenBank发表的鼻气管鸟疫杆菌的16SRNA(登录号:JF810495.1)序列,利用Primer Explorer V4在线软件设计了1套环介导等温核酸扩增技术(LAMP)引物,并对反应体系和反应条件进行优化,同时评价该方法的灵敏性和特异性。结果显示,建立的LAMP检测方法能够在63℃1h内实现对目的片段的大量扩增,检测结果可直接用肉眼判断。特异性试验结果显示,该方法只能检测到鼻气管鸟疫杆菌,与其他细菌如鸡白痢沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、副鸡嗜血杆菌的核酸无交叉反应,特异性强。敏感性试验表明,该方法可检测到1×101拷贝/μL的质粒标准品,比普通PCR高104倍。利用该方法对分离的阳性菌株进行检测,检出率为83.33%。结果表明,建立的鼻气管鸟疫杆菌LAMP检测方法,具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的特点,可用于鼻气管鸟疫杆菌的临床检测。; 王丽荣刁有祥唐熠鞠小军宋晓娜

高抗体水平下H9N2亚型禽流感病毒对鸭的致病性被引量：1: 2013年; 将60只种鸭免疫接种H9N2灭活疫苗,在高抗体水平下,通过点眼、滴鼻、气管注射3种接种途径人工感染300日龄种鸭,观察种鸭的发病情况、症状及剖检变化;于感染后3、6、9d采血进行血液生化指标检测;利用建立的RT-PCR方法检测各试验组和对照组的带毒情况;采集输卵管、肝脏、肺脏和气管等组织固定、切片、HE染色,观察各器官病理组织学变化;利用建立的IFA方法对H9N2在种鸭体内的分布进行研究。结果显示,3组接种H9N2亚型禽流感后,引起种鸭采食下降、流泪、排白色稀便等症状;总蛋白(TP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)的含量发生了显著变化;病理组织学变化以肝脏颗粒变性和空泡变性,肺脏广泛性出血和炎性细胞浸润,输卵管纤维蛋白渗出为特征;IFA阳性信号主要分布于气管、输卵管、肺脏、肝脏和胰腺等处;对照组精神状态良好,各项生理指标趋于正常,IFA未检测到阳性信号。结果表明,在高抗体水平下,H9N2亚型禽流感病毒也可通过眼结膜、鼻腔黏膜、气管黏膜等侵入机体导致鸭的发病。; 肖坡刁有祥李建侠吴海洋程彦丽; 关键词：H9N2 血液生化指标组织病理学间接免疫荧光

鸭瘟病毒对SPF鸭的致病性研究被引量：2: 2012年; 【目的】探讨鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)对SPF鸭的致病性。【方法】将DPV分别通过点眼滴鼻和皮下注射接种途径人工感染SPF鸭,以未攻毒健康SPF鸭为对照,观察各组鸭的发病情况及症状,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组SPF鸭,采集肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、气管、食道、肠道、胸腺、法氏囊、脑和泄殖腔等组织,常规方法制备石蜡切片,HE染色,观察各器官病理组织学变化,同时利用间接免疫荧光染色法(IFA)对DPV抗原在鸭体内的分布进行检测,并进行血常规和血液生化指标检测,分析了DPV对SPF鸭淋巴细胞转化率的影响。【结果】DPV接种后,引起鸭高热、下痢,组织器官出血、坏死,食道、泄殖腔黏膜出血、溃疡并有灰黄色假膜覆盖;病理组织学变化以血管壁损伤为主,肝、脾细胞变性、坏死,消化道黏膜上皮细胞坏死脱落。DPV感染后,在鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、泄殖腔、肠道、肾脏、肺及气管中均检测到DPV抗原,且以肝脏、脾脏等组织中荧光最强;在脑和心脏中均未检测到DPV抗原。DPV感染组鸭血清中白细胞总数(WBC)、红细胞总数(RBC)、血小板总数(PLT)和总蛋白(TP)、血红蛋白(HGB)含量及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、淋巴细胞转化率与对照组差异大多达显著或极显著水平。【结论】DPV感染主要引起SPF鸭各组织器官广泛性出血;脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官首先受到攻击和损害,并造成免疫抑制;皮下注射接种DPV比点眼滴鼻接种对SPF鸭的致病性强。; 张坤刁有祥程彦丽崔京腾王蛟刘鑫; 关键词：鸭瘟病毒淋巴细胞转化病理组织学

鸭源NDV对SPF鸭免疫机能的影响被引量：2: 2013年; 【目的】探讨鸭源新城疫病毒(NDV)对SPF鸭免疫机能的影响。【方法】选用120只已免疫H5N1禽流感油乳剂灭活疫苗的SPF鸭,随机分为静脉注射组、点眼滴鼻组和对照组,每组40只。攻毒(2个试验组接种鸭源NDV 0.2mL(含病毒106 ELD50),对照组点眼滴鼻等量生理盐水)后观测各组鸭的发病死亡情况,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组鸭,采集脾脏、法氏囊,按常规方法制备石蜡切片,TUNEL法检测脾脏、法氏囊细胞凋亡情况,同时检测血液生化和血液常规指标,并测定鸭源NDV对SPF鸭外周血中淋巴细胞转化率和H5N1油乳剂灭活疫苗HI抗体效价的影响以及CD4+/CD8+的动态变化,分析不同处理组鸭源NDV对SPF鸭免疫机能的影响。【结果】攻毒后,试验组SPF鸭发病率为100%,死亡率为32.5%,并出现呼吸困难、肺脏出血、腺胃乳头出血等症状及剖检变化;血常规检测结果显示,鸭源NDV静脉注射组和点眼滴鼻组血液中红细胞总数、血红蛋白含量先降低后显著升高,血小板总数、白细胞总数降低且均与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);血液生化检测结果显示,试验组鸭谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、淀粉酶活性升高,总蛋白含量降低,与对照组相比差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);静脉注射组和点眼滴鼻组的H5N1油乳剂灭活疫苗HI抗体效价比对照组低但差异不显著,淋巴细胞转化率与对照组相比降低且差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);静脉注射组与点眼滴鼻组的CD4+/CD8+变化趋势基本一致,均为先升高后降至正常水平以下。TUNEL法检测脾脏、法氏囊均出现细胞凋亡,且凋亡率随着攻毒后时间的增加而升高。【结论】SPF鸭接种鸭源NDV后能引起免疫抑制。; 崔京腾刁有祥王蛟孙晓艳刘鑫; 关键词：鸭源新城疫病毒免疫抑制

鸭瘟病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立与应用被引量：6: 2013年; 为建立一种简便、快速、灵敏、特异的鸭瘟病毒(DPV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的DPV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,经优化反应体系,建立了LAMP快速检测方法。结果表明,LAMP方法能够在63℃恒温下,1h内实现目的核酸的大量扩增。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBRGreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法敏感性可达0.245μg/L,比普通PCR灵敏性高10倍;对鸭病毒性肝炎病毒、H9N2亚型禽流感病毒、鸭副黏病毒、鸭源偏肺病毒等的核酸无交叉反应;利用建立的LAMP检测方法对40份临床样品的阳性检出率为30%。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确检测DPV的方法。; 张坤刁有祥鞠小军

鸭坦布苏病毒E基因环介导等温扩增检测方法的建立与应用被引量：10: 2013年; 根据GenBank发布的坦布苏病毒Bagaza毒株E基因的保守序列设计1套引物,建立了环介导等温扩增快速检测鸭坦布苏病毒的方法。该检测方法的敏感性可达10拷贝/μL;对鸭坦布苏病毒山东分离株的检测呈阳性,而对鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、鸭新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒扩增结果均为阴性;应用该方法对山东省各地采集的82份疑似病料进行检测,可检出72份阳性。表明本试验所建立的环介导等温扩增检测方法灵敏性高、特异性强、操作简便快速,可用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断和流行病学调查。; 欧全宾刁有祥唐熠高绪慧于春梅; 关键词：E基因环介导等温扩增荧光染料

鸭源新城疫病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备被引量：2: 2013年; 为制备鸭源新城疫病毒(NDV)的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的鸭源NDV的核衣壳蛋白(NP)为免疫原,免疫6周龄～8周龄的BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,经以重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法筛选,获得了2株能稳定分泌抗重组蛋白MAb的杂交瘤细胞株A1和B2,经ELISA检测A1株和B2株细胞上清效价均为212,诱生的腹水的效价分别为107和106。Western blot和IFA检测显示,仅A1株能与鸭源NDV NP蛋白发生特异性反应。抗鸭源NDV NP蛋白MAb的研制,为鸭源NDV的免疫学诊断及致病机理的研究奠定基础。; 程彦丽刁有祥欧全宾杨建朋张坤国纪垒肖坡; 关键词：鸭源新城疫病毒核衣壳蛋白单克隆抗体

Ⅰ群禽腺病毒血清10型的致病性被引量：11: 2013年; 将Ⅰ群禽腺病毒血清10型山东分离株(SDXT株)通过皮下注射接种途径人工感染1日龄SPF雏鸡,观察试验鸡的发病情况及临床症状;于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组鸡只,采集心脏、肝脏、肺脏和肠道等组织固定、切片、H.E.染色,观察各器官病理组织学变化,并进行血常规和血液生化指标检测。同时,应用IFA对SDXT株人工感染雏鸡的各组织器官进行检测。结果表明,SDXT株接种后,引起雏鸡精神沉郁、食欲不振、嗜睡等症状。病理组织学变化以肝脏脂肪变性、肝脏结构紊乱、肝窦间出血和炎性细胞浸润,在肝细胞核内可见嗜碱性包涵体为主;肠道内肠绒毛脱落;肺脏广泛性出血和炎性细胞浸润为特征。IFA检测结果显示,肝脏、脾脏、肠道、肺脏均可检测到SDXT株,其中肝脏和肠道检出率最高,表明这2个器官是其主要靶器官。HGB、WBC、RBC、ALT和ALP发生显著变化。结果表明,Ⅰ群禽腺病毒血清10型对雏鸡有较强的致病性。; 国纪垒刁有祥程彦丽宋晓娜张坤肖坡杨建朋孙晓艳; 关键词：SPF雏鸡 SPF雏鸡

人工感染种鸭生殖系统中新城疫病毒的检测: 2012年; 本研究旨在探明鸭源新城疫病毒(NDV)通过人工感染后在种鸭生殖系统中分布。应用本实验室分离的一株经鸭胚传递的NDV SDFCH株,对42只无NDV感染的28周龄樱桃谷种鸭进行人工感染试验,试验分母鸭接种强毒组,公鸭接种强毒组和对照组。强毒接种4 d后,每隔2 d每组各迫杀2只,采集母鸭卵巢、卵泡、输卵管组织,公鸭采集睾丸、输精管进行病毒分离鉴定,并利用RT-PCR方法进行病毒F基因的扩增与同源性分析。同时,以NDV F蛋白的单克隆抗体(MAb)为一抗,建立间接免疫荧光检测方法检测输卵管组织中NDV及病毒在输卵管的分布情况。结果表明采用RT-PCR方法能够在种鸭生殖系统各个组织中检测并重新分离到NDV;输卵管子宫部和蛋白分泌部纤毛柱状上皮的纤毛细胞和分泌细胞内有阳性荧光信号存在。结果表明人工感染的种鸭卵巢、卵泡、睾丸、输精管以及输卵管子宫部和蛋白分泌部纤毛柱状上皮的纤毛细胞和分泌细胞中均有NDV分布,病毒能否随蛋白分泌、精液的排泄进入种蛋传递给雏鸭还有待于进一步研究。; 李建侠刁有祥孟凡生刘霞程彦丽孙静吴海洋; 关键词：种鸭新城疫病毒生殖系统 RT-PCR 间接免疫荧光

鸭瘟病毒强毒株感染SPF鸭后动态病理组织学变化被引量：9: 2013年; 用鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)人工感染2月龄SPF鸭,定期剖杀,经聚合酶链反应(PCR)检测为鸭瘟后,对各组织器官的病理组织学变化进行观察,并进行血常规和血液生化指标检测。结果显示,人工感染后24h,试验鸭中枢免疫器官胸腺、法氏囊表现为淋巴细胞数量减少,组织间隙增大;肝脏、脾脏组织病变较为严重,大部分组织器官均出现程度较轻的病理变化。感染后48～96h,中枢免疫器官的淋巴细胞极度减少、网状细胞增生、组织器官结构模糊不清,严重充血、出血;其余组织器官出现细胞变性、出血等不可逆病理变化。感染后120h,组织细胞变性、坏死,出现大片坏死区。点眼滴鼻组鸭感染DPV后组织学变化与皮下注射组相似,只是发生的时间偏后约24～48h。对照组鸭病理组织学观察未见损伤。WBC、HGB、AST、ALT等发生显著变化。结果表明,接种DPV强毒感染鸭的组织器官严重受损,特别是免疫器官,甚至会引起免疫抑制。; 张坤刁有祥程彦丽崔京腾王蛟; 关键词：鸭瘟病毒病理组织学变化

国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-43-34)

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